T-BPMA 29-2024 火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的測定 液相色譜-串聯(lián)質譜法

ICS67.220CCSX04BPMADeterminationofhigenamineandtretoquinolinhotpotseasoning—Liquidchromatography-tandemmassspectrometrymIT/BPMA29—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由北京市科學技術研究院分析測試研究所（北京市理化分析測試中心）提出。本文件由北京預防醫(yī)學會歸口。本文件起草單位：北京市科學技術研究院分析測試研究所（北京市理化分析測試中心）、北京市疾病預防控制中心、北京市延慶區(qū)疾病預防控制中心。本文件主要起草人：王建鳳、馮月超、劉艷、郭巧珍、姚凱、張晶、林強。1T/BPMA29—2024本文件描述了火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚液相色譜-串聯(lián)質譜的測定方法。本文件適用于火鍋底料中去甲烏藥堿和曲托喹酚的定性定量測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4方法原理火鍋底料中的去甲烏藥堿和曲托喹酚，用含5%甲酸的乙醇溶液提取，經(jīng)十八烷基鍵合硅（C18）、石墨化碳黑（GCB）以及加強基質脂類去除劑（EMR）組合填料凈化后，采用液相色譜-串聯(lián)質譜法測定，同位素內標法定量。5試劑和材料5.1試劑除另有說明外，所用試劑均為色譜純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1.3甲酸（CH3COOH純度≥88%。5.1.4甲酸銨（HCOONH4）。5.1.6去甲烏藥堿（C16H17NO3，CAS號：5843-65-2純度大于等于99%。5.1.7去甲烏藥堿-D4（C16H13D4NO3，CAS號：2249814-83-1純度大于等于99%。5.1.8曲托喹酚鹽酸鹽（C19H24ClNO5，CAS號：18559-59-6純度大于等于99%。5.1.9曲托喹酚鹽酸鹽-D9（C19H15D9ClNO5，CAS號：18559-63-2純度大于等于99%。5.1.10含5%甲酸的乙醇溶液：移取12.5mL甲酸（5.1.3用乙醇（5.1.2）定容至250mL，混勻。5.1.1110mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸稱取0.315g甲酸銨（5.1.4用水溶解，向其中加入0.5mL甲酸（5.1.3定容至500mL，混勻。2T/BPMA29—20245.1.12復溶溶液：移取甲醇（5.1.1）和10mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸5.1.11）各50.0mL，混勻。5.1.13標準儲備溶液：分別準確稱取適量標準物質去甲烏藥堿（5.1.6）、去甲烏藥堿-D4（5.1.7）、曲托喹酚鹽酸鹽（5.1.8）、曲托喹酚鹽酸鹽-D9（5.1.9用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，按其純度及有效成分折算，配制成1000μg/mL標準儲備溶液，-18℃或以下避光保存，有效期3個月。5.1.14混合標準儲備溶液：分別準確移取去甲烏藥堿和曲托喹酚兩種標準儲備液各100μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成10μg/mL的混合標準儲備溶液，有效期1個月。5.1.15混合標準中間溶液：準確移取混合標準儲備液（5.1.14）100μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成100ng/mL的混合標準中間溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.1.16混合內標標準儲備溶液：準確移取去甲烏藥堿-D4和曲托喹酚-D9標準儲備液各100μL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到10μg/mL混合內標標準儲備溶液，有效期1個月。5.1.17混合內標標準工作溶液：準確移取10μg/mL混合內標標準儲備溶液（5.1.16）1.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到1μg/mL混合內標標準工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.1.18系列標準工作溶液：取適量混合標準中間液（5.1.15）和混合內標標準工作液（5.1.17用復溶溶液（5.1.12）稀釋配制成濃度為0.1ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL的系列標準工作溶液，其中內標濃度為5ng/mL，現(xiàn)用現(xiàn)配。5.2材料5.2.1石墨化碳黑（GCB，120μm~400μm）。5.2.2十八烷基鍵合硅膠（C18，40μm~60μm）。5.2.3加強基質脂類去除劑（EMR）。5.2.4微孔濾膜：有機系，尼龍，0.22μm。6儀器和設備6.1液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質譜儀，配備有電噴霧電離源（ESI）。6.2離心機：轉速不低于8000r/min。6.3氮氣吹干儀。6.4振蕩器。6.5渦旋混合器。6.6超聲波清洗器。6.7分析天平：感量0.00001g和0.01g。7試樣制備和保存7.1試樣制備取代表性樣品500g，用攪碎機充分攪碎混勻（塊狀樣品需先在60℃水浴中融化后再用攪碎機充分3T/BPMA29—2024攪碎混勻）均分成兩份作為試樣，并標明標記。7.2試樣保存將試樣于-18℃及以下保存。8測定步驟8.1樣品的處理8.1.1提取100μL，加入20mL含5%甲酸的乙醇溶取上清液，待凈化。8.1.2凈化和65mgEMR（5.2.3渦旋混合，8000r/min離心5min，移取1.0mL上清液，40℃氮氣吹至近干，用復溶溶液（5.1.12）定容至1.0mL，渦旋混合30s，用微孔濾膜（5.2.4）過濾，供液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定。8.2空白試驗除不加試樣外，其他步驟均按8.1進行。8.3儀器分析條件8.3.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：高強度硅膠顆粒色譜柱（2.1mm×100mm,1.8μm）或性能相當者；b)柱溫：30℃;c)進樣量：5μL；d)流速：0.3mL/min；e)流動相：A相為乙腈（5.1.5B相為10mmol/L甲酸銨水溶液（含0.1%甲酸5.1.11梯度洗脫條件見表1；f)被測物及內標物的參考保留時間見表2。表1梯度洗脫條件335334T/BPMA29—20248.3.2質譜參考條件質譜參考條件如下：a)離子源：電噴霧離子源；b)掃描方式：正離子掃描；c)檢測方式：多重反應監(jiān)測（MRM）；d)毛細管電壓：3.0kV；e)離子源溫度：150℃;f)脫溶劑溫度：500℃;g)脫溶劑氣流量：800L/h；h)錐孔氣流量：50L/h；i)碰撞氣體：氬氣；j)去甲烏藥堿和曲托喹酚的其它質譜參數(shù)見表2。表2去甲烏藥堿和曲托喹酚及其內標的保留時間及質譜條件參考值658.4定性判定在相同試驗條件下，試樣溶液中待測物的保留時間應與系列標準溶液中待測物的保留時間一致，其相對偏差在±2.5%之內；試樣譜圖中待測物監(jiān)測離子對的相對離子豐度與濃度接近的系列標準溶液中對應的監(jiān)測離子對的相對離子豐度，若最大允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定樣品中存在對應的待測物。表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差±20±25±308.5定量測定5T/BPMA29—2024將試樣溶液和系列標準工作溶液上機分析，以標準工作液中被測組分的濃度為橫坐標，被測組分和對應內標的色譜峰面積之比為縱坐標，繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對試樣進行內標法定量。試樣溶液中待測物的響應值均應在儀器測定的線性范圍內。去甲烏藥堿、曲托喹酚以及內標標準溶液的特征離子質量色譜圖見附錄A。9結果計算和表述結果按式（1）計算：X=...................................................式中:X——試樣中被測組分含量，單位為微克每千克(μg/kgm——試樣的稱樣量，單位為克（gc——從標準工作曲線得到的被測組分溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mLV——提取液的體積，單位為毫升（mL1000——換算系數(shù)。測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留一位小數(shù)。10方法準確度、精密度和靈敏度10.1方法檢出限和定量限去甲烏藥堿和曲托喹酚的檢出限均為0.3μg/kg，定量限均為1.0μg/kg。10.2準確度和精密度本方法被測物在1.0μg/kg，2.0μg/kg和10.0μg/kg添加濃度水平上的回收率和相對標準偏差見附錄B。6T/BPMA29—2024去甲烏藥堿和曲托喹酚以及內標標準品的特征離子質量色譜圖曲托喹酚、曲托喹酚-D9、去甲烏藥堿、去甲烏藥堿-D4的特征離子質量色譜圖見A.1~A.4。圖A.1曲托喹酚的特征離子質量色譜圖（10ng/mL）圖A.2曲托喹酚-D9的特征離子質量色譜圖（5ng/mL）7T/BPM