-安捷倫液相色譜培訓(xùn)教材PPT課件

1、Agilent1200高效液相色譜儀工作站學(xué)習(xí)總結(jié),生測(cè)室顏棟林,開首語本人在2008年1月8日至1月11日參加廣州安捷倫科技有限公司的1200高效液相色譜儀化學(xué)工作站的學(xué)習(xí)培訓(xùn)，幾天學(xué)習(xí)培訓(xùn)，使我對(duì)1200液相色譜儀的硬件及軟件有了更全面的了解和更多的認(rèn)識(shí)，現(xiàn)在做個(gè)總結(jié)向大家介紹如下。,硬件篇安捷倫高效液相色譜儀1200由幾部分組成，脫氣機(jī)，泵、進(jìn)樣器、柱溫箱和檢測(cè)器。安捷倫1200HPLC系統(tǒng)采用積木式堆積結(jié)構(gòu)，方便用戶按照自己的需要配置不同的的系統(tǒng)，整個(gè)系統(tǒng)的流路自上而下設(shè)計(jì)、連接，減小了系統(tǒng)的死體積和延遲體積。,Agilent1200HPLC系統(tǒng)堆疊方式,脫氣機(jī)安捷倫1200系列在線脫

2、氣機(jī)有，微量真空脫氣機(jī)G1379B、標(biāo)準(zhǔn)真空脫氣機(jī)G1322A。原理基本相同，就是使用半透膜管路，允許氣體分子通過，液體分子無法通過。A型用的是微滲管，B型用的是濾膜。流路A型是左進(jìn)右出，而B型為下進(jìn)上出，本科室使用的為A型G1322A。使用真空脫氣機(jī)可以降低噪聲，保證保留時(shí)間的重現(xiàn)性，與He脫氣相比，更方便，更節(jié)省費(fèi)用。,真空脫氣機(jī)脫氣原理,泵安捷倫1200系列泵有：?jiǎn)卧茫篏1310A、四元泵：G1311A、二元泵：G1312A、二元泵SL型：G1212B。單獨(dú)一個(gè)泵腔無法滿足溶劑傳輸系統(tǒng)的要求：連續(xù)性、穩(wěn)定性都不符合標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)在新購(gòu)儀器中已很少考慮。,單元泵，按溶劑的傳輸系統(tǒng)有兩種，一種是

3、并聯(lián)柱塞泵，另一種是串連柱塞泵。并聯(lián)柱塞泵由于兩個(gè)泵的相位不同，可以補(bǔ)償流量脈沖，但由于單向閥的數(shù)量增多，所以容易造成泄漏，增加了維護(hù)使用的難度。串連柱塞泵左泵腔的活塞運(yùn)動(dòng)速度為右泵腔活塞的2倍，因此，相同時(shí)間內(nèi)，左泵提供的流量為右泵的兩倍，左泵提供的溶劑一半直接供給系統(tǒng)，另一半被右泵吸入，稍后供給液相系統(tǒng)，減少了單向閥的用量，可以使用壓縮因子補(bǔ)償。,四元泵，其實(shí)就是比單元泵多了四元比例閥。由單元泵可以升級(jí)到四元泵，除了要加上四元比例閥外，還要更換主板。需要注意的是，當(dāng)使用鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，建議將鹽溶液接到四元比例閥下面的通道上，有機(jī)溶劑接到上面的通道上。如果經(jīng)常使用鹽溶液，建議定期用水沖洗

4、所有的通道以去除閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。,四元泵的工作原理,二元泵，有兩個(gè)泵頭，特點(diǎn)是高壓混合，無需脫氣；對(duì)于有強(qiáng)紫外吸收的流動(dòng)相，使用靜態(tài)混合器可以降低基線噪聲；可以選擇溶劑切換閥自動(dòng)進(jìn)行溶劑切換；對(duì)于高鹽流動(dòng)相，可選擇泵頭密封墊清洗裝置。所以脫氣機(jī)不是標(biāo)準(zhǔn)配置，但增加真空脫氣機(jī)，流量范圍可以從0.55ml/min擴(kuò)展至0.055ml/min；加入靜態(tài)混合器，使流動(dòng)相混合更加均勻；如果配置,溶劑切換閥，則兩個(gè)泵頭可分別控制兩種溶劑，類似四元比例閥，但并不完全一樣，只能同時(shí)混合兩種溶劑，不可實(shí)現(xiàn)四種溶劑的同時(shí)使用。二元泵為高壓泵，為后混合式，精度更高，而且由于為高壓混合，產(chǎn)生的氣泡也更少，所以

5、價(jià)格也比四元泵貴得多。四元泵為低壓泵，流速穩(wěn)定性相對(duì)較差，低壓混合容易產(chǎn)生氣泡，在實(shí)驗(yàn)中常會(huì)遇到這樣的問題，多元,混合中出現(xiàn)流動(dòng)相不穩(wěn)定的現(xiàn)象，特別是流動(dòng)相配比較低的如小于1%，其多元混合效果難以達(dá)到我們的要求，造成保留時(shí)間漂移，甚至得不到我們預(yù)期的色譜峰。明白四元泵的低壓混合的道理，實(shí)際操作中我們發(fā)現(xiàn)問題時(shí)，有助于我們對(duì)原因的分析。必要時(shí)泵可以拆御，更換密封墊及濾芯。對(duì)容易出故障部位及處理方法，比如寶石,活塞桿是不能超聲的部件，泵頭密封墊要成對(duì)更換，實(shí)驗(yàn)室中至少應(yīng)備有一付4號(hào)泵頭密封墊，部件號(hào)為：5663-6589（用于反相色譜）；0905-1420（用于正相色譜）。同時(shí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有5-10

6、個(gè)PTFE過濾芯，以備日常所需。判斷方法為，打開沖洗閥，以水為溶劑，流速5ml/min，系統(tǒng)壓力大于10bar就應(yīng)更換過濾白頭了。,二元泵的工作原理,進(jìn)樣器，安捷倫1200系列進(jìn)樣器有：標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)進(jìn)樣器G1329A、高性能進(jìn)樣器G1367A、高性能進(jìn)樣器SL型G1367B、手動(dòng)進(jìn)樣器G1328B。自動(dòng)進(jìn)樣器的特殊功能，洗針功能可以把樣品殘留降低到最小限度；多次吸液用于進(jìn)樣量大于100l的情況；程序進(jìn)樣可以非常靈活,地執(zhí)行用戶的進(jìn)樣程序要求，如多種樣品自動(dòng)混合，自動(dòng)進(jìn)樣等高級(jí)功能的自由設(shè)置，但是，由于進(jìn)樣針的擴(kuò)散，所以進(jìn)樣量越小，受到擴(kuò)散的影響也越大，所以自動(dòng)混合的準(zhǔn)確度還是難以達(dá)到容量瓶的混合方

7、式。這在做標(biāo)準(zhǔn)由線時(shí)得注意的問題，如為定量則不推薦小樣量的混合方式。程序進(jìn)樣方式設(shè)置如下圖：,第一步：設(shè)置進(jìn)樣器,第二步：使用進(jìn)樣器程序（U）,第三步：更多信息（功能項(xiàng)）,對(duì)于手動(dòng)進(jìn)樣器，必須了解六通閥的工作原理，應(yīng)特別注意的是進(jìn)樣量少于定量環(huán)的50%或大于定量環(huán)的3-5倍量是比較準(zhǔn)確的，不過，大家用自動(dòng)進(jìn)樣器已經(jīng)習(xí)慣了，如果再用回手動(dòng)進(jìn)樣器會(huì)不會(huì)有些郁悶？會(huì)不會(huì)有一種坐慣了寶馬又要回到踩單車的感覺？柱溫箱，使用安捷倫柱溫箱可以保證柱的穩(wěn)定性，從而保證了保留時(shí)間的重現(xiàn)性。恒定的柱溫特別是日溫差大的時(shí)候更為必要。,檢測(cè)器，安捷倫1200系列檢測(cè)器有，可變波長(zhǎng)檢測(cè)器G1314B、二極管陣列檢測(cè)器G

8、1315B、二極管陣列檢測(cè)器SL型G1315C、示差折光檢測(cè)器G1362A、熒光檢測(cè)器G1321A。本所用的是VWD的G1314B型，DAD型及FLD的就不多說了。對(duì)VWD型檢測(cè)器應(yīng)了解它的工作原理，氘燈的使用維護(hù)及更換。需要注意的是，使用中不要頻繁的開關(guān)氘燈，否則影響氘燈的壽命。,可以利用診斷方式來檢測(cè)氘燈的能量，當(dāng)然，發(fā)現(xiàn)氘燈能量降低時(shí)不要馬上得出氘燈應(yīng)該更換的結(jié)論，這也許是流通池臟或有氣泡造成的能量降低，所以必須用診斷方式檢測(cè)流通池。診斷結(jié)果大于0.6說明流通池很干凈，小于0.2則說明流通池該清洗了。更換氘燈后要在診斷日志中填寫更換氘燈，這樣氘燈的使用時(shí)數(shù)便從零開始。,這里還有一點(diǎn)得注意

9、的是流通池的后壓力非常重要，一定要使用適當(dāng)出口連接管，出口管線要使用專用廢液管為系統(tǒng)提供適當(dāng)?shù)暮髩海坏盟阶詫U液管截短，以防氣泡進(jìn)入流通池。但如果壓力過高，流通池的石英窗片可能破裂。在這里我要說的是，對(duì)安捷倫1200高效液相色譜儀正確的操作方法和定期的維護(hù)保養(yǎng)的是很重要的。,軟件篇軟件部分，這就是1200液相色譜儀的化學(xué)工作站。本所安捷倫1200高效液相色譜儀工作站軟件版本為B.02.01，現(xiàn)在新的版本為B.03-01的了，但這沒有太多的差別，新版本增加的只是一部分我們很少用到的高級(jí)功能。,在這里我就和大家一起討論一些日常使用中遇到的細(xì)節(jié)問題，也許是我們使用過程中所容易忽略也容易造成操作問題

10、的。軟件方面從數(shù)據(jù)采集，數(shù)據(jù)分析至報(bào)告格式及打印。首先我們應(yīng)該了解，脫機(jī)區(qū)別于聯(lián)機(jī)是不能對(duì)儀器進(jìn)行控制，不能運(yùn)行診斷。,工作站運(yùn)行界面：?jiǎn)吾樳M(jìn)樣,工作站運(yùn)行界面：多針進(jìn)樣,數(shù)據(jù)采集中主要是分析方法和運(yùn)行控制，這是我們操作中常用的。方法的的概念，方法是一個(gè)參和集，它包括分析一個(gè)樣品所需要的所有參數(shù)：數(shù)據(jù)采集參數(shù)、數(shù)據(jù)分析參數(shù)及命令或宏指令等內(nèi)容。方法的組成：1、方法信息；2、儀器/采集參數(shù)；3、數(shù)據(jù)分析參數(shù)；4、運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表。,我想對(duì)方法的編輯大家應(yīng)該都比較常用和熟悉的了，在這里我選一些也許大家不太注意的說一說吧。編輯方法儀器中，方法編輯選項(xiàng)里有四個(gè)可選項(xiàng)，1、方法信息（M）；2、儀器/采集（I

11、）；3、數(shù)據(jù)分析（D）；4、運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表（R）。首先選擇所要編輯方法哪一部分內(nèi)容。需要注意的是，不選擇某一部分內(nèi)容，并不意味著方法中不含有該部分內(nèi)容，而僅僅,意味著本次對(duì)該部分內(nèi)容不進(jìn)行編輯，使用原方法中設(shè)置的參數(shù)。還有，儀器參數(shù)設(shè)置四元泵的參數(shù)設(shè)置。1、停止時(shí)間：是儀器停止采集數(shù)據(jù)的時(shí)間，并不是泵停止工作的時(shí)間。本例中工作站僅采集010分鐘的色譜圖，10分鐘后，不再采集數(shù)據(jù)，但泵仍然繼續(xù)工作，向系統(tǒng)提供流動(dòng)相。使用自動(dòng)進(jìn)樣器,時(shí)一定要設(shè)置適當(dāng)?shù)耐Ｖ箷r(shí)間，以保證連續(xù)進(jìn)樣的要求；2、后運(yùn)行時(shí)間：是指一次運(yùn)行結(jié)束后，到第二次進(jìn)樣前的等候時(shí)間，該時(shí)間用于系統(tǒng)為第二次進(jìn)樣做好準(zhǔn)備。例如：將不感興趣的雜

12、質(zhì)沖洗出色譜柱，或等待系統(tǒng)中的流動(dòng)相真正變成下一次進(jìn)樣的初始比例。做梯度洗脫時(shí)，一定要設(shè)置該數(shù)值；3、壓力限：,壓力的上下限也要合理設(shè)置。壓力上限不要高于柱子能夠承受的壓力最大值，一般比正常分析壓力高20bar左右；而壓力下限的數(shù)值一般比正常分析壓力低20bar左右；4、時(shí)間表：此處可以編輯梯度洗脫程序，規(guī)定溶劑比例變化方式。要注意程序時(shí)間與停止時(shí)間和后運(yùn)行時(shí)間之間的協(xié)調(diào)關(guān)系。單元泵的參數(shù)設(shè)置界面與四元泵相比少了溶劑選擇項(xiàng)，參數(shù)設(shè)置的要求,與四元泵參數(shù)設(shè)置要求相同，只是此時(shí)只有一種溶劑可供選擇，也無法進(jìn)行梯度洗脫實(shí)驗(yàn)。二元泵的參數(shù)設(shè)置要求與四元泵參數(shù)設(shè)置要求相同，只是此時(shí)只有A、B兩種溶劑可供

13、選擇。二元泵SL的參數(shù)設(shè)置可以在溶劑類型處的列表中選擇本次使用的溶劑，并寫入對(duì)溶劑描述。,系統(tǒng)將根據(jù)你所選擇的溶劑自動(dòng)進(jìn)行溶劑壓縮因子補(bǔ)償，保證流量、比例更加精確。當(dāng)選擇“使用高級(jí)壓縮因子校正”選項(xiàng)時(shí)，將按照各個(gè)方法中泵參數(shù)部分選擇的溶劑的對(duì)應(yīng)的壓縮因子來控制泵，進(jìn)而保證流動(dòng)相的流量和比例更加精確。有一個(gè)問題，就是在數(shù)據(jù)采集完畢洗柱的時(shí)候是不用開燈的，但如果強(qiáng)行關(guān)燈則方法運(yùn)行時(shí),會(huì)報(bào)錯(cuò)，會(huì)提示儀器沒有準(zhǔn)備就緒。怎么辦呢，在方法的運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表中有“運(yùn)行前命令/宏”和“運(yùn)行后命令/宏”，我們可不可以在“運(yùn)行前命令/宏”中設(shè)置把燈關(guān)了呢？當(dāng)然可以，而且這是關(guān)燈后再洗柱方法中所必須的，但我在前面說過，

14、先關(guān)燈，儀器會(huì)報(bào)錯(cuò)，方法無法運(yùn)行。其實(shí)很簡(jiǎn)單，這是因?yàn)槲覀冇幸粋€(gè)細(xì)節(jié),設(shè)置關(guān)燈后洗柱：第一步,設(shè)置關(guān)燈后洗柱：第二步,設(shè)置關(guān)燈后洗柱：第三步,設(shè)置關(guān)燈后洗柱：第四步,沒編好，在方法編輯過程中，進(jìn)入儀器參數(shù)設(shè)置-檢測(cè)參數(shù)VWD設(shè)置，在右下角選“更多信息”，點(diǎn)擊進(jìn)入后點(diǎn)選“特殊設(shè)置”，對(duì)“當(dāng)燈關(guān)閉時(shí)可進(jìn)行分析（E）”進(jìn)行勾選，再在“運(yùn)行前命令/宏”中輸入LAMPOFF，這樣，就可以實(shí)現(xiàn)先關(guān)燈后再運(yùn)行洗柱的方法了。然后在“運(yùn)行后命令/宏”中設(shè)置完成后關(guān)泵或關(guān)閉工作站，,這就是隨你所欲啦。關(guān)泵為PUMPOFF，關(guān)閉整個(gè)系統(tǒng)為STANDBY，這里要說明的是PUMPOFF和STANDBY是有區(qū)別的，前者為

15、泵的關(guān)閉，后者為停泵至待機(jī)狀態(tài)的。如果選BACK命令，則關(guān)閉工作站。這是關(guān)機(jī)方法中的一個(gè)小技巧，這當(dāng)然不可用在分析方法上，分析方法中前后宏命令最好慎用，,特別是在VWD設(shè)置中更不可選特殊設(shè)置中勾選“當(dāng)關(guān)燈時(shí)可進(jìn)行分析”，不然我們的實(shí)驗(yàn)操作就沒有意義了。這是為什么，大家一想就知道啦。還有，在運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表中要注意的問題是，除非有特殊要求，一般不建議選擇“保存GLP數(shù)據(jù)”、“將方法和數(shù)據(jù)保存在一起”選項(xiàng)，GLP,數(shù)據(jù)是最原始的數(shù)據(jù)，不允許改動(dòng)。一般情況下選擇這兩種選項(xiàng)只是浪費(fèi)硬盤空間而已。泵的設(shè)置方面，特別是梯度洗脫設(shè)置中建議先預(yù)覽一下，看看是不是我們想要的突變或浙變效果。數(shù)據(jù)分析中重點(diǎn)在于圖譜的處

16、理，以及如何建立校正表。有時(shí)我們得到的色譜圖并不很理想，,那如何對(duì)它進(jìn)行合理積分以得到比較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)這是個(gè)關(guān)鍵，這可以從積分事件中進(jìn)行設(shè)置。斜率靈敏度和峰寬的數(shù)值改動(dòng)要慎重，因?yàn)檫x用不同數(shù)值，將影響色譜峰起止點(diǎn)的識(shí)別，得到不同的峰面積，進(jìn)而影響到所得定量結(jié)果的準(zhǔn)確程度。一定要保證處理同一系列數(shù)據(jù)（各個(gè)標(biāo)樣數(shù)據(jù)和未知樣品數(shù)據(jù)）時(shí)，,這兩個(gè)參數(shù)值是一致的。最小峰面積和最小峰高的數(shù)值大小不會(huì)影響所得峰面積，僅僅做為是否對(duì)該色譜峰進(jìn)行積分的標(biāo)準(zhǔn)。積分事件表中的積分參數(shù)并不是孤立于方法的參數(shù)，它們屬于方法的一部分內(nèi)容，所以保存積分參數(shù)時(shí)應(yīng)先將積分事件保存到方法中，然后再保存方法，積分參數(shù)就會(huì)被保存下來。

17、如果自動(dòng)積分,和利用積分事件表設(shè)置積分參數(shù)都不能滿足用戶積分的具體要求，那么退出積分事件表，即可看到上圖所示的手動(dòng)積分工具欄，你可以使用手動(dòng)積分的功能進(jìn)行積分條件優(yōu)化，手動(dòng)積分不能被直接保存到方法中，也不建議保存手動(dòng)積分參數(shù)。,校正，校正即是利用某個(gè)峰的峰高或峰面積來確定其對(duì)應(yīng)組分的濃度或含量，當(dāng)檢測(cè)器靈敏度針對(duì)不同的組分而變化時(shí)需要進(jìn)行校正，檢測(cè)器對(duì)同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時(shí)需要進(jìn)行校正。校正分單級(jí)校正和多級(jí)校正。一、單級(jí)校正：即單點(diǎn)校正，單點(diǎn)法。僅有一個(gè)濃度的標(biāo)樣，無論進(jìn)樣幾針取平均值，,只要濃度相同，都相當(dāng)于只做一次校正。單點(diǎn)校正的兩種假設(shè)（1、響應(yīng)曲線必須是直線；2、響應(yīng)曲線必須

18、通過原點(diǎn)。）都不盡合理，使得單級(jí)校正定量結(jié)果不準(zhǔn)確。但其具有簡(jiǎn)單、快速的優(yōu)點(diǎn)，常適用于以下情況：1、做簡(jiǎn)單的粗定量；2、當(dāng)未知樣品的濃度小于且接近于標(biāo)樣濃度時(shí)，變量定量結(jié)果較準(zhǔn)確；3、主要用于檢出實(shí)驗(yàn)，即不需要準(zhǔn)確定量未知樣品含量，,只關(guān)心未知樣品是否達(dá)標(biāo)。二、多級(jí)校正。1、對(duì)每一峰需做至少兩次校正；2、可以補(bǔ)償檢測(cè)器的非線性響應(yīng)；3、響應(yīng)曲線可以不通過原點(diǎn)。多級(jí)校正糾正了單級(jí)校正的缺點(diǎn)，可以進(jìn)行準(zhǔn)確定量。液相色譜里面常用的多級(jí)校正為五級(jí)校正（即五點(diǎn)法）。,建立校正表，它的目的是為了得出含量結(jié)果。校正表建立是自動(dòng)計(jì)算中必須的，標(biāo)準(zhǔn)曲線制定也必須在校正表建立上。校正表編好后，也要作為方法的一部分

19、存入方法。同時(shí)想用批處理來處理數(shù)據(jù)時(shí)首先建立校正表。至于批處理方面的應(yīng)用，這是高級(jí)培訓(xùn)班中的內(nèi)容，在基礎(chǔ)培訓(xùn)班中只提及一下，所以我在這里也就不,多說了。在此提醒注意的是：如果使用內(nèi)標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)百分比法定量，一定要指定內(nèi)標(biāo)峰，否則化學(xué)工作站會(huì)警告內(nèi)標(biāo)化合物丟失，無法完成定量。最后是報(bào)告處理，工作站提供了一系列的報(bào)告格式，如簡(jiǎn)單報(bào)告，性能報(bào)告，完整報(bào)告等，其中又分為內(nèi)標(biāo)法，外標(biāo)法，百分比法等多,種報(bào)告格式。如果你對(duì)工作站上給出的格式不滿意，可以自定義設(shè)置報(bào)告，不過，自定義報(bào)告的設(shè)置是一個(gè)令人頭痛的問題，要想得到一個(gè)較滿意的自定義報(bào)告，需要你花不少的心神。安捷倫的色譜工作站中的報(bào)告功能確實(shí)到了人人痛罵

20、的程度。安捷倫公司難道真的這么沒文化么？一點(diǎn)沒考慮中國(guó)國(guó)情還一味在中國(guó),吹捧他的的儀器，非也，這是因?yàn)榘步輦惞玖碛写蛩愣眩部梢哉f他心太黑太狠。用過WATERS工作站么？其報(bào)告功能是不是值得稱道。特別是令正在用安捷倫的工作站的兄弟姐妹們羨慕不已吧？其實(shí)，WATERS的工作站就是安捷倫公司賣給WATERS的，奇怪吧？沒什么，這是老外玩的把戲，,安捷倫公司把儀器和軟件分開來賣，所以買了他們的儀器，還得買他們的軟件，對(duì)安捷倫來說，色譜方面的軟件分為COM軟件和STATION軟件，前者有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，后者的就是工作站，WATERS就是把買回來的COM和STATION整合在一起，明白么？所以要

21、想擁有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能就得花錢去買安捷倫的COM數(shù)據(jù)處理軟件吧,不然你只好將就著用啦。,維護(hù)篇1、為什么溶劑和樣品要過濾?溶劑和樣品過濾非常重要，它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用，消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。色譜柱：由于填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。儀器：溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)增加進(jìn)樣閥的堵塞和磨損，同時(shí)也會(huì)增加泵頭內(nèi)的藍(lán)寶石活塞桿和活塞的磨損。,樣品過濾頭的類型：30mm內(nèi)徑：適用于大進(jìn)樣量的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50l。13mm內(nèi)徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2m和0.

22、45m兩種規(guī)格,材料為纖維素。3mm內(nèi)徑：適用于小進(jìn)樣量的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格。處理樣品體積為7l。濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。,醋酸纖維濾膜：不適用于有機(jī)溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質(zhì)和其相關(guān)樣品。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機(jī)溶劑和水溶液，可用于強(qiáng)酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機(jī)溶劑。,2、為什么HPLC用緩沖鹽時(shí)要加在線Seal-wash選項(xiàng)？HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨

23、著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項(xiàng)能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結(jié)晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時(shí),必須使用該在線沖洗選項(xiàng)。清洗液配制:90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長(zhǎng)和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。,3、為什么Agilent1200LC的流動(dòng)相管路非常細(xì)?在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱外效應(yīng)”對(duì)分析結(jié)果的影響，由于樣品分子在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體中小45個(gè)數(shù)量級(jí)，液體流動(dòng)相的流速也比氣相慢1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。因此，樣品進(jìn)入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進(jìn)樣

24、器、柱接頭、連接管、檢測(cè)器）中，樣品分子的擴(kuò)散和滯留，都會(huì)引起色譜峰的展寬，而使柱效降低。為使柱外效應(yīng)減之最小，獲得理想的分析結(jié)果，Agilent1200LC使用加工工藝難度高的毛細(xì)管線作為流動(dòng)相管路。,毛細(xì)管線分類：0.17mm內(nèi)徑綠色;0.12mm內(nèi)徑紅色。PEEK管線：內(nèi)徑0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。毛細(xì)管線優(yōu)點(diǎn):柔韌性好.Agilent公司同時(shí)備有1/16in的粗外徑毛細(xì)管線,適用于不同習(xí)慣的用戶,優(yōu)點(diǎn)是剛性好,但柔韌性差一些。,4、流動(dòng)相使用前為什么要脫氣？流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢

25、測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會(huì)造成熒光猝滅。,常用的脫氣方法比較：氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：效果較好，但操作復(fù)雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：易抽走有機(jī)相。超聲脫氣法：流動(dòng)相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。在線真空脫氣法：Agilent1100LC真空脫機(jī)利用膜滲透技術(shù),在線脫氣,智能控制,無需額外操作,成本低,脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多

26、元溶劑體系。,5、如何防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運(yùn)行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑過濾器的堵塞。A：請(qǐng)嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過濾。B：請(qǐng)勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液。,C:在溶劑瓶?jī)?nèi)溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。D:避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。堵塞后的處理法方法：將過濾頭從組件中取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。,6、Agilent1200LC泵如何維護(hù)？Agilent1

27、200LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動(dòng)、流量準(zhǔn)確的流動(dòng)相,及時(shí)合理的維護(hù)非常重要。A：流動(dòng)相使用前請(qǐng)必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時(shí)，要加在線Seal-wash選項(xiàng)。C：關(guān)機(jī)前，用100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機(jī)溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關(guān)泵，（適于反相色譜柱）。正相色譜柱用適當(dāng)?shù)娜軇_洗D：及時(shí)更換PurgeValve內(nèi)的過濾芯。（當(dāng)打開PurgeValve時(shí)，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。,7、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？泵頭活塞的標(biāo)準(zhǔn)密封圈能適合于大多數(shù)應(yīng)用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標(biāo)準(zhǔn)活塞密封圈，特別是長(zhǎng)時(shí)間使用時(shí)，需更換另

28、一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。*注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設(shè)為200bar。,8、使用梯度比例發(fā)時(shí)要注意那些事項(xiàng)？當(dāng)鹽溶液與有機(jī)溶劑溶液混合時(shí)，鹽溶液能與有機(jī)溶劑溶液完全混溶，而不會(huì)出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點(diǎn)，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機(jī)溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機(jī)溶劑中，出現(xiàn)問題。強(qiáng)烈建議：當(dāng)使用緩沖鹽溶液和有機(jī)溶劑時(shí)，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機(jī)溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。,9、在線真空脫氣機(jī)使用要注意那些事項(xiàng)？一般來說，Agilent1100LC的真空脫氣機(jī)無需過多維護(hù)，只需注意幾個(gè)注意事項(xiàng)就可以了。A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機(jī)腔體；更換不同類型的溶劑時(shí)，要先抽空，再抽滿。B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。,10、更換色譜柱時(shí)要注意什么事項(xiàng)?在使用HPLC時(shí),應(yīng)特別注意”柱