人絨毛膜促性腺激素(HCG)稀釋經(jīng)驗(yàn)分享和臨床應(yīng)用介紹ppt課件

1、.,人絨毛膜促性腺激素（HCG）稀釋經(jīng)驗(yàn)分享和臨床應(yīng)用介紹 鄭州金域生化發(fā)光室 李利娟,.,概述,人絨毛膜促性腺激素（HCG）的簡單介紹 人絨毛膜促性腺激素（HCG）的定量檢測 人絨毛膜促性腺激素（HCG）的臨床應(yīng)用,.,關(guān)于人絨毛膜促性腺激素（HCG）,HCG是由兩個(gè)非共價(jià)鍵相連的肽鏈組成的糖蛋白激素。其單個(gè)亞基不具有生物活性，當(dāng)連接成完整化合物時(shí)始具活性，分子量約為 4.7萬。HCG亞單位的氨基酸排列與黃體生成素（LH）亞單位相似，故用完整的抗HCG分子的抗體測定HCG時(shí)與LH間有免疫交叉反應(yīng)。但它們的亞 單位各不相同。因此為避免交叉反應(yīng)，目前均采用抗-HCG單克隆抗體進(jìn)持特異的HCG檢查

2、，近年來還有報(bào)道采用抗- HCG羧基末端肽單克隆抗體以進(jìn)一步提高檢測的敏感性和特異性。,.,HCG與其它激素的區(qū)別,HCG與LH、FSH、TSH有一個(gè)相同的亞基和一個(gè)不同的亞基。 LH的亞基含121個(gè)氨基酸，HCG的亞基相當(dāng)于在LH的亞基的C末端延伸了24個(gè)氨基酸，共有145個(gè)氨基酸。,.,HCG的檢測,最初為膠體金法進(jìn)行定性檢測（試紙條定性） 上世紀(jì)九十年代，使用放射免疫法 目前主流使用化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光（貝克曼庫爾特Access，雅培Axsym，德普DPC系列，羅氏Elecsys，強(qiáng)生Eci）,.,定性檢測局限,定性檢測的應(yīng)用與局限 1、由于是定性的方法也就是說只是給出陽性陰性的結(jié)果，而

3、不能給出正確的數(shù)值。因此在用于判定其它疾病方面用定量檢測血清HCG來代替。 2、由于檢測者可能是取隨機(jī)尿液檢測，就有可能在妊娠早期出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。 3、一些與HCG有相同或相適片斷的激素可能會與尿試紙條上的抗體結(jié)合而造成假陽性。如黃體生成素(LH)、某些前列腺素、某些激素類避孕藥,.,定量檢測,放射免疫分析由于其靈敏度及穩(wěn)定性不如現(xiàn)在的化學(xué)發(fā)光也已被淘汰。,.,（電）化學(xué)發(fā)光檢測,（電）化學(xué)發(fā)光檢測相比較放射免疫分析靈敏度，準(zhǔn)確度，穩(wěn)定性及線性范圍均有明顯的優(yōu)勢，但是由于臨床所需檢測HCG范圍極廣，且由于免疫檢測鉤狀效應(yīng)的存在使得（電）化學(xué)發(fā)光檢測HCG檢測仍然存在一定的局限。在日常檢測中我

4、們通過利用HCG試紙條聯(lián)合應(yīng)用達(dá)到節(jié)約試劑的目的，同時(shí)可以有效避免鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)。,.,鉤狀效應(yīng),鉤狀效應(yīng)是指免疫檢測中由于抗原、抗體濃度比例不合適而致檢測結(jié)果呈假陰性的現(xiàn)象。1929年Heidelberger利用等量抗體檢測濃度遞增抗原，當(dāng)抗原濃度較低，抗體濃度相對較高時(shí)，沉淀反應(yīng)不明顯；當(dāng)抗原濃度增加到與抗體濃度比例合適時(shí)，沉淀反應(yīng)明顯；繼續(xù)增加抗原濃度時(shí)，沉淀反應(yīng)反而減弱。據(jù)此繪出雙相應(yīng)答曲線，曲線高峰區(qū)域，抗體、抗原濃度呈最適比，沉淀反應(yīng)明顯，稱等價(jià)帶。高峰區(qū)域左側(cè)，由于抗體濃度過高，沉淀反應(yīng)不明顯，稱前帶；高峰區(qū)域右側(cè)。由于抗原濃度過高，沉淀反應(yīng)也不明顯，稱后帶。抗體濃度過高所致結(jié)果

5、稱前帶現(xiàn)象，抗原濃度過高所致結(jié)果稱后帶現(xiàn)象，統(tǒng)稱為帶現(xiàn)象。1977年Green把此現(xiàn)象稱為鉤狀效應(yīng)（hook effect），包括了前后帶現(xiàn)象。,.,定量檢測HCG現(xiàn)狀,在HCG的定量檢測中經(jīng)常會遇到一些高值標(biāo)本，超過儀器的分析范圍，只能報(bào)告：線性。而臨床要求檢驗(yàn)科提供準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，以便采取適當(dāng)?shù)闹委煷胧?。為了避免盲目選擇稀釋倍數(shù)，造成不必要的試劑浪費(fèi)和延長檢驗(yàn)時(shí)間。我們發(fā)現(xiàn)可以借助HCG試紙條先定性檢測血HCG，根據(jù)檢測帶（以下簡稱T帶）出現(xiàn)或不出現(xiàn)的時(shí)間和顏色的深淺，經(jīng)過與質(zhì)控帶（以下簡稱C帶）比較來選擇稀釋倍數(shù)，從而使超過儀器分析范圍的高值標(biāo)本盡快地、并盡可能地一次就報(bào)告準(zhǔn)確結(jié)果。,.

6、,定量檢測HCG現(xiàn)狀,由于HCG在體內(nèi)的變化很快，個(gè)體差異極大。而且在妊娠期的不同時(shí)間（平均2.2天，HCG上翻一倍）HCG水平差異極大。特別是對于葡萄胎，惡性葡萄胎，絨毛膜癌等疾病，血清HCG極高。這樣就有一些極高值的HCG標(biāo)本，無法準(zhǔn)確報(bào)告結(jié)果。但臨床又要求一個(gè)準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，以便采取適當(dāng)?shù)闹委煼椒?。這樣，有的實(shí)驗(yàn)室盲目地選擇稀釋倍數(shù)，必定浪費(fèi)試劑和時(shí)間。如果稀釋倍數(shù)選擇太小，稀釋后仍大于儀器分析范圍，必然要試著增加稀釋倍數(shù)后重新測定。如果稀釋倍數(shù)過大，會造成過度稀釋后的標(biāo)本中HCG含量極微量而測不出，或者不在儀器的線性范圍內(nèi)造成很大的誤差，必然要縮小稀釋倍數(shù)再進(jìn)行測定。雖然該儀器有機(jī)內(nèi)稀

7、釋功能，但是固定為某一稀釋倍數(shù)如2、3、5、10、20、50、100。而且只有在第一次測試超線。才會采用機(jī)內(nèi)稀釋。這樣就有兩個(gè)問題：第一，不稀釋或稀釋倍數(shù)過小必然會浪費(fèi)試劑。第二，在大多數(shù)情況下，固定高稀釋倍數(shù)，會造成稀釋后的標(biāo)本，不在測試線性范圍內(nèi)，造成很大的測定誤差，影響臨床的判斷。,.,試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用,試紙條顯示狀況,.,試紙條顯色分析,T帶不出現(xiàn)，C帶出現(xiàn)。血HCG定性試驗(yàn)陰性，說明HCG含量為零或極低，可直接原倍檢測 T帶出現(xiàn)，顏色很淺，說明HCG含量較低，可直接定量測定。 T帶出現(xiàn)，顏色略淺于C帶。有就T帶分析有兩種情況，就T帶本身而言為一長方形，a：此長方形內(nèi)左側(cè)顏

8、色比右側(cè)深，這種標(biāo)本一般濃度不會太高，只需選擇較低倍數(shù)（不超20倍）稀釋上機(jī)檢測即可。b:右側(cè)顏色深者，標(biāo)本HCG濃度一般很高，至少在就我們經(jīng)驗(yàn)來看，在羅氏E601儀器上一般要選至少20倍上機(jī)稀釋檢測。其濃度至少在七八萬，高者達(dá)兩三百萬。 T帶出現(xiàn)，但顏色與C帶深淺相當(dāng)或是深于C帶，前提是T帶長方形內(nèi)著色均勻，此類標(biāo)本血HCG較高，但其濃度一般低于b種情況下濃度,.,試紙條初篩與定量檢測聯(lián)合應(yīng)用,我們在定量測定前，首先用HCG定性試紙條定性測定血HCG，根據(jù)T帶與C帶出現(xiàn)的時(shí)間以及顏色的深淺等來選擇相應(yīng)的稀釋倍數(shù)進(jìn)行定量測定，不必多次進(jìn)行定量測定。極大地提高了一次報(bào)告成功率，而且定性試紙條相對

9、于定量試劑來說，要廉價(jià)得多。這樣既節(jié)約了試劑成本；又可以避免鉤狀效應(yīng)的出現(xiàn)同時(shí)縮短了時(shí)間，可以說是達(dá)到了事半功倍得效果。,.,在我們之前發(fā)現(xiàn)的幾例鉤狀效應(yīng)的標(biāo)本中試紙條分析情況均同于b種情況，具體檢測數(shù)據(jù)見下表：以下數(shù)據(jù)來至于西門子,在此種情況中，如缺少試紙條的先期判斷，恐怕我們就會發(fā)出錯(cuò)誤報(bào)告了。,.,HCG的臨床意義,HCG的檢查對早期妊娠診斷有重要意義，對與妊娠相關(guān)疾病、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤等疾病的診斷、鑒別和病程觀察等有一定價(jià)值。,.,HCG的臨床意義,1診斷早期妊娠： 孕后35-50天HCG可升至大于2500IU/L。60-70天可達(dá)8萬IU/L，多胎妊娠者尿HCG常高于一胎妊娠。 在妊娠最

10、初3個(gè)月，HCG水平每（2.20.5）天約升高一倍，,.,HCG的臨床意義,2異常妊娠與胎盤功能的判斷： 異位妊娠：如宮外孕時(shí)，本試驗(yàn)只有60%的陽性率，在子宮出血3天后，HCG仍可為陽性， 故HCG檢查可作為與其它腹癥的鑒別。HCG常為312-625IU/L。 如果用HCG難以確認(rèn)，還可用血孕酮來做輔助性診斷。宮外孕患者的血孕酮水平低，這是公認(rèn)的。故可作為早期診斷方法之一。臨界值為63nmol/L. 異位妊娠引起腹腔內(nèi)出血時(shí)，腹腔血-HCG均大于正常值，且明顯高于靜脈血-HCG。,.,HCG的臨床意義,婦女受孕后，從第11天起即可測出血中HCG升高，以后每兩天HCG的量可升高倍（就算有先兆流

11、產(chǎn)，HCG的增加比率不會變）。 比如今天是234，如果后天測出來是450左右就就可認(rèn)為是正常宮內(nèi)早孕。 異位妊娠時(shí), 由于輸卵管肌層菲薄、滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育不良, 血供差, 合體滋養(yǎng)細(xì)胞合成hCG量顯著減少, 每天升高幅度也減少 如果連續(xù)兩次增加速度緩慢，表明宮外孕或者胚胎不正常發(fā)育遲緩。比如今天是10，后天是15，再2天才17，這樣的HCG值肯定不正常，保胎的成功率極低。如果HCG值持續(xù)而明顯的下降，就算B超測到胎心也最好做清宮手術(shù)，表明胎兒其實(shí)已經(jīng)腦死亡。,.,HCG的臨床意義,CA - 125是一種來源于體腔上皮、生殖道粘膜和卵巢上皮細(xì)胞表面的衍生腫瘤相關(guān)抗原 ,胎兒絨毛膜羊水和母體脫膜中均有

12、大量的CA -125 。 有資料表明異位妊娠流產(chǎn)患者血清CA - 125水平顯著高于異位妊娠成活組; 相反, hCG水平顯著低于異位妊娠成活組; 并且血清CA - 125水平有隨著- hCG水平的降低而增高的趨勢, 認(rèn)為CA - 125水平升高是對- hCG降低的一種補(bǔ)償, 并有助于鑒別異位妊娠流產(chǎn)和成活性異位妊娠;但血清CA - 125與- hCG之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。 對于流產(chǎn)型異位妊娠患者可在血清CA125和連續(xù)- hCG監(jiān)測條件下采用期待療法或藥物治療。,.,HCG的臨床意義,流產(chǎn)診斷與治療：不完全流產(chǎn)如子宮內(nèi)尚有胎盤組織殘 存，HCG檢查仍可呈陽性；完全流產(chǎn)或死胎時(shí)HCG由陽性轉(zhuǎn)陰性，

13、因此可作為保胎或吸宮治療的參考依據(jù)。 先兆流產(chǎn)：如尿中HCG 仍維持高水平多不會發(fā)生難免流產(chǎn)。如HCG在2500IU/L以下，并逐漸下降，則有流產(chǎn)的或死胎的可能，當(dāng)降至600IU/L 則難免流產(chǎn)。在保胎治療中，如HCG仍繼續(xù)下降說明保胎無效，如HCG不斷上升，說明保胎成功 在產(chǎn)后4天或人工流產(chǎn)術(shù)后13天，血清HCG應(yīng)低于 1000IU/L，產(chǎn)后9天或人工流產(chǎn)術(shù)后25天，血清HCG應(yīng)恢復(fù)正常。 如不符合這一情況，則應(yīng)考慮有異?？赡堋?.,HCG的臨床意義,3滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤診斷與治療監(jiān)測 葡萄胎、惡性葡萄胎、絨毛膜上皮癌及睪丸畸胎瘤等患者尿中HCG顯著升高，有的可達(dá)10萬到 數(shù)百萬IU/L，可用稀釋試驗(yàn)診斷如妊娠12周以前1：500稀釋尿液呈陽性，妊娠12周以后1：250稀釋尿液呈陽性，對葡萄 胎診斷有價(jià)值。1：100-1：500稀釋尿液呈陽性對絨毛膜癌也有診斷價(jià)值，如男性尿中HCG升高，要考慮睪丸腫瘤如精原細(xì)胞癌、畸形及異位HCG瘤 等。 如果HCG增加速度非?？欤砻饔衅咸烟サ目赡?，必須緊密監(jiān)測。當(dāng)然也有可能是雙胞胎。 滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤患者術(shù)后3周后尿HCG應(yīng)50IU/L,8-12周呈陰性；如HCG不下降 或不轉(zhuǎn)陰，提示可能有殘留病變，這類病例常易復(fù)發(fā)，故需定期檢查。,.,4其它更年期、排