維生素C尿負荷試驗

1、 維生素C尿負荷試驗（一）目的及意義：評價被檢者維生素C的營養(yǎng)狀況。（二）原理：還原型抗壞血酸具有還原性，能還原2,6-二氯酚靛酚染料。該染料在酸性溶液中呈紅色，被還原后紅色失去。還原型抗壞血酸還原染料后，本身被氧化成脫氫型抗壞血酸。一定量的尿樣能還原標(biāo)準(zhǔn)染料的量與樣品中所含抗壞血酸的量成正比。v 成人尿負荷4小時（口服500mg抗壞血酸）v 不足 10mgv（三）儀器與試劑v 容量瓶（50ml）；微量滴定管；三角燒瓶（50ml）；吸管等v 1%草酸溶液；0.02 2,6-二氯酚靛酚溶液；標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液（四）操作步驟（1）樣品制備 晨起空腹時被檢者排出晨尿后，口服500mg抗壞血酸，收集其后

2、4小時尿液。在尿液中加入一定量草酸，置于4度保存。（2）溶液配制v VC應(yīng)用液配制 取1ml VC儲備液（1mg/ml)50ml容量瓶，以1%草酸溶液定容。（3）空白試驗 取10ml 1草酸溶液三角瓶，以染料滴定至粉紅色，記錄用量（C）。（4）染料標(biāo)定 取5ml VC應(yīng)用液和5ml 1草酸溶液于三角瓶，以染料滴定至粉紅色，15s不褪色為終點，記錄用量（A）。（5）以吸管吸取尿樣25ml至50ml三角瓶，加入1%草酸5ml。（6）立即用標(biāo)定過的2,6-二氯酚靛酚染料滴定之，直至淡粉紅色15s不褪色為終點，記錄染料用量。做平行樣。（五）結(jié)果計算計算T值 VC應(yīng)用液濃度用量 T= AC尿中還原型抗壞

3、血酸排出量=（六）注意事項v 操作要迅速，滴定要準(zhǔn)確。v 樣品中可能含有其他物質(zhì)能還原2,6-二氯酚靛酚染料，但還原染料的速度要比抗壞血酸慢，所以滴定時以15s不褪色為終點（七）實驗數(shù)據(jù)及處理1. VC應(yīng)用液濃度=0.02mg/mL; VC應(yīng)用液用量=5/mL； A=1.14 mL； C=0.20 mL； 4小時尿量=100mL；2.染料滴定用量滴定次數(shù)起始刻度/ mL終點刻度/ mL用量/ mL12.5016.0413.5421.3914.5613.173.0.02mg/mL5mL T= 1.14 mL0.20 mL =0.106 mg/mL4.第一次滴定尿中還原型抗壞血酸排出量=（13.54-0.20）0.106100 =28.28mg 5 第二次滴定尿中還原型抗壞血酸排出量=（13.17-0.20）0.106100 =27.50 mg 5尿中還原型抗壞血酸排出量平均值=（28.28+27.50）2=27.89 mg（八）實驗結(jié)果討論與分析1.實驗測得尿中還原型抗壞血酸排出量為27.89 mg，大于10 mg，對照標(biāo)準(zhǔn)知被檢者維生素C營養(yǎng)狀況良好。2.維生素C在體內(nèi)不能自身合成，完全靠飲食攝入，被檢者維生素C營養(yǎng)狀況良好表明其在飲食中攝入維生素含量較高。3.實驗操作不夠迅速，致使部分VC在空氣中氧化，可能使實驗結(jié)果偏小。4