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文檔簡介
1、 維生素C尿負荷試驗(一)目的及意義:評價被檢者維生素C的營養(yǎng)狀況。(二)原理:還原型抗壞血酸具有還原性,能還原2,6-二氯酚靛酚染料。該染料在酸性溶液中呈紅色,被還原后紅色失去。還原型抗壞血酸還原染料后,本身被氧化成脫氫型抗壞血酸。一定量的尿樣能還原標(biāo)準(zhǔn)染料的量與樣品中所含抗壞血酸的量成正比。v 成人尿負荷4小時(口服500mg抗壞血酸)v 不足 10mgv(三)儀器與試劑v 容量瓶(50ml);微量滴定管;三角燒瓶(50ml);吸管等v 1%草酸溶液;0.02 2,6-二氯酚靛酚溶液;標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液(四)操作步驟(1)樣品制備 晨起空腹時被檢者排出晨尿后,口服500mg抗壞血酸,收集其后
2、4小時尿液。在尿液中加入一定量草酸,置于4度保存。(2)溶液配制v VC應(yīng)用液配制 取1ml VC儲備液(1mg/ml)50ml容量瓶,以1%草酸溶液定容。(3)空白試驗 取10ml 1草酸溶液三角瓶,以染料滴定至粉紅色,記錄用量(C)。(4)染料標(biāo)定 取5ml VC應(yīng)用液和5ml 1草酸溶液于三角瓶,以染料滴定至粉紅色,15s不褪色為終點,記錄用量(A)。(5)以吸管吸取尿樣25ml至50ml三角瓶,加入1%草酸5ml。(6)立即用標(biāo)定過的2,6-二氯酚靛酚染料滴定之,直至淡粉紅色15s不褪色為終點,記錄染料用量。做平行樣。(五)結(jié)果計算計算T值 VC應(yīng)用液濃度用量 T= AC尿中還原型抗壞
3、血酸排出量=(六)注意事項v 操作要迅速,滴定要準(zhǔn)確。v 樣品中可能含有其他物質(zhì)能還原2,6-二氯酚靛酚染料,但還原染料的速度要比抗壞血酸慢,所以滴定時以15s不褪色為終點(七)實驗數(shù)據(jù)及處理1. VC應(yīng)用液濃度=0.02mg/mL; VC應(yīng)用液用量=5/mL; A=1.14 mL; C=0.20 mL; 4小時尿量=100mL;2.染料滴定用量滴定次數(shù)起始刻度/ mL終點刻度/ mL用量/ mL12.5016.0413.5421.3914.5613.173.0.02mg/mL5mL T= 1.14 mL0.20 mL =0.106 mg/mL4.第一次滴定尿中還原型抗壞血酸排出量=(13.54-0.20)0.106100 =28.28mg 5 第二次滴定尿中還原型抗壞血酸排出量=(13.17-0.20)0.106100 =27.50 mg 5尿中還原型抗壞血酸排出量平均值=(28.28+27.50)2=27.89 mg(八)實驗結(jié)果討論與分析1.實驗測得尿中還原型抗壞血酸排出量為27.89 mg,大于10 mg,對照標(biāo)準(zhǔn)知被檢者維生素C營養(yǎng)狀況良好。2.維生素C在體內(nèi)不能自身合成,完全靠飲食攝入,被檢者維生素C營養(yǎng)狀況良好表明其在飲食中攝入維生素含量較高。3.實驗操作不夠迅速,致使部分VC在空氣中氧化,可能使實驗結(jié)果偏小。4
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