RPA——PCR技術(shù)的革命.ppt

1、a，1，RPAPCR技術(shù)革命，什么是RPA，為什么RPA與技術(shù)革命、應(yīng)用相關(guān)，a，2，什么是RPA？ PCR技術(shù)誕生已經(jīng)30年了。 從古典PCR、實(shí)時(shí)定量PCR到現(xiàn)在的數(shù)字PCR，這個(gè)技術(shù)在不斷變化，但我們的視野并沒有消失。 RPA (重組酶解酶)全名重組酶擴(kuò)增技術(shù)被稱為核酸檢測(cè)技術(shù)，代替PCR。 a、3、RPA技術(shù)主要依賴于能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB )鏈取代DNA聚合酶。 這三種酶的混合物在常溫下也有活性，最佳反應(yīng)溫度在37C左右。a，4，RPA的原理，a，5，a，6，預(yù)可用性編碼，2006，a，7，a，8，a，9，a，10，a，11，引物設(shè)計(jì)RPA分

2、析的關(guān)鍵是引物和探測(cè)器PCR引物通常需要達(dá)到30-38個(gè)堿基，因?yàn)镽PA引物比一般的PCR引物長(zhǎng)。 引物過短會(huì)降低重組率，影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度。 在設(shè)計(jì)RPA引物時(shí)，變性溫度并不是影響擴(kuò)增引物的重要因素。 RPA的引物和探針設(shè)計(jì)不像傳統(tǒng)的PCR那么成熟，用戶需要自己觸摸條件進(jìn)行優(yōu)化。a、 12 speed 10 to 15 minutedetectiontimesensitivitysinglemolecostcheapaccesslittleornohardwareisrequirequiresingsincrequilitysconti 馬特minitionalsampleprepar

3、ationrobustnesstosamplecontamintosandtemperaturefluctationsportabilityhandheldinstrumentationordisosa 為什么RPA是技術(shù)革命、a、13、RPA的具體應(yīng)用實(shí)例、Clinical、Food safety、Agricultural、Blood bank screening、環(huán)境、Animal health、a、 14 recombinasepolymeraseamplification (RPA ) OFC amv-35 sprootrandnosterminatorforrapiddetectio

4、nofgeneticallymodifiedcrops，Chao Xu 1 Wu junjin 1，2 andyusongwan 1，2，*1biotechnologiesresearchinstitute，chineseacademyofagriculturalsciences，Beijing 100081，China； E-Mails: xuchao1667 (C.X.)； liliang (L.L.)； jinwu jun (w.j.)2inspectionandtestingcenterforenvironmentalsriskassessmentofgeneticmodifiedpl

5、ant-relatedmicroorganics (beijin 最小化，北京100081，China，a，15， 1.introduction theinternationalservicefortheacquisitionofagri-biotechnicalapplications (isaa ) terstitysthattmilsoffarmerscultivatedgenetitionmodified (GM ) cropsovermorethan 170 millonchecktaresacross 27 countries in 2013； themajormacropspec

6、iescanla，maize，cotton， and soybean 1.althoughthepolymerasechainreaction (PCR ) isonofthemothidwideleyusemancificationserversforgmoscreendetection 3 那么delectricationentercomplementationandcomplicationprocedcurreslitiontheuseofprccamplicati andhighlyefectivemossforidentingthep dfeedareimportantandnece

7、ssary 4 . themmostfrequentlyusedmethodfordetectinggmomaterisscreeningforthecamv-35 s promoter (p-35 s ) fromthecauliflowermosaicvirus (ca andt he3 non-translatedregionofthenopalinesynhasegene (t-nos ) fromagrobacteriummefaciens 11 . in this work enersidetheinitialdevedeproventodep-35 sandt-nossequen

8、cesforppossofgmoscreeningandtection .a，16，a，17，2.2 . a，18，a，19，2.3 .應(yīng)用程序應(yīng)用程序，a， 20 3.1.materials 3.2.extractionofgenomicdna 3.3.oligonucleotideprimersandprobesrparealtimefluorescentassaysincludeafforwardpri anda probe.3.4.rpaassaysrparrrectionperformendinatolvolumeof 50lusingatwistampsonkit (twistri

9、buteddx， Cambridge) UK )、29.5loftwistamprehydrationbuffer、420 nM each RPA primer、120 nM RPA probe， 14 mm magnesium acetate and1lofgenomicdna.mix freeze-diredrectreineterveraddamingserveracetedandrehydredmatertwistatubescannerde selecoluresecensementsementatinevery 20 s，A probit regression，3. Experimen