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1、現(xiàn)代生物藥物分類(lèi):重組DNA技術(shù)制造的多肽、蛋白質(zhì)類(lèi)治療劑基因藥物:基因治療劑、基因疫苗和反義藥物等。天然生物藥物:來(lái)自動(dòng)物、植物、微生物和海洋生物的天然產(chǎn)物。合成與部分合成生物藥物。生物技術(shù)藥物的特性:分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜;具有種屬特異性;治療針對(duì)性強(qiáng)、療效高;穩(wěn)定性差;基因穩(wěn)定性;免疫原性;體內(nèi)的半衰期短;受體效應(yīng);多效性和網(wǎng)絡(luò)效應(yīng);檢驗(yàn)的特殊性重組蛋白質(zhì)分離純化的方法及目的:1、離心/過(guò)濾(去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片、顆粒性雜質(zhì)) 2、陰離子交換層析(去除雜質(zhì)蛋白、脂質(zhì)、DNA和病毒等) 3、40nm微孔濾膜過(guò)濾(進(jìn)一步去除病毒) 4、陽(yáng)離子交換層析(去除牛血清蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白等) 5、超濾(去除沉淀物及

2、病毒) 6、疏水層析(去除殘余的雜蛋白) 7、凝膠過(guò)濾(與多聚體分離) 8、0.22um微孔濾膜過(guò)濾(除菌)宿主細(xì)胞的分類(lèi):1原核細(xì)胞:常用的有大腸桿菌(分泌能力不足,真核蛋白質(zhì)常形成不溶性的包涵體,不存在翻譯后修飾作用,對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)物不能糖基化。)、枯草芽孢桿菌(分泌能力強(qiáng),不形成包涵體,不能使蛋白質(zhì)糖基化。)、鏈霉菌(重要的工業(yè)微生物。分泌能力強(qiáng),具有糖基化能力。)等;2真核細(xì)胞:酵母(表達(dá)產(chǎn)物直接分泌到細(xì)胞外,分泌能力強(qiáng),表達(dá)產(chǎn)物能糖基化。)、絲狀真菌(很強(qiáng)的蛋白質(zhì)分泌能力,能正確進(jìn)行翻譯后加工,包括肽剪切和糖基化。)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞(表達(dá)產(chǎn)物可由重組轉(zhuǎn)化的細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中,產(chǎn)物是糖基化的

3、,接近或類(lèi)似于天然產(chǎn)物。)。影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素:(1)外源基因的計(jì)量(2)外源基因的表達(dá)效率:?jiǎn)?dòng)子的強(qiáng)弱、核糖體結(jié)合位點(diǎn)的有效性、SD序列和起始密碼的間距、密碼子組成(3)表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性(4)細(xì)胞的代謝負(fù)荷(5)工程菌的培養(yǎng)條件真核基因在大腸桿菌中的表達(dá)的形式:以融合蛋白的形式表達(dá)藥物基因、以非融合蛋白的形式表達(dá)藥物基因、分泌型表達(dá)蛋白藥物基因影響目的基因在酵母中表達(dá)的因素:外源基因的劑量、外源基因的表達(dá)效率(啟動(dòng)子、分泌信號(hào)、終止子)、外源蛋白的糖基化、宿主菌株的影響基因工程藥物生產(chǎn)的過(guò)程:獲得目的基因、組建重組質(zhì)粒、構(gòu)建基因工程菌、產(chǎn)物分離純化、除菌過(guò)濾、半成品檢定、成

4、品檢定、包裝。提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法:選擇合適的宿主菌、選擇合適的載體、選擇壓力、分階段控制培養(yǎng)、控制培養(yǎng)條件、固定化基因工程菌的培養(yǎng)方式:1. 分批培養(yǎng)2. 補(bǔ)料分批培養(yǎng):將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進(jìn)行培養(yǎng),經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后,間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基,使菌體進(jìn)一步生長(zhǎng)的方法。3. 連續(xù)培養(yǎng):將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中,攪拌培養(yǎng)至一定菌體濃度后,開(kāi)動(dòng)進(jìn)料和出料的蠕動(dòng)泵,以控制一定稀釋率進(jìn)行不間斷的培養(yǎng)。4. 透析培養(yǎng)利用膜的半透性原理使代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基分離,通過(guò)去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來(lái)解除其對(duì)生產(chǎn)菌的不利影響。5. 固定化培養(yǎng):將固定化技術(shù)用于工程菌的培養(yǎng),質(zhì)粒穩(wěn)定性大大提高,特別是對(duì)分泌型菌種有利基因

5、工程菌的不穩(wěn)定性有哪幾種?如何對(duì)它進(jìn)行改善1分裂不穩(wěn)定:指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。2結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定:指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變改善1、選擇合適的宿主菌2、選擇合適的載體3、選擇壓力4、分階段控制培養(yǎng)5、控制培養(yǎng)條件6、固定化基因工程藥物的分離純化:細(xì)胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品、成品加工。分離純化的方法一、根據(jù)分子大小不同的純化方法1.透析和超濾2.密度梯度離心 3.凝膠過(guò)濾二、根據(jù)電荷不同的純化方法1.電泳2.聚丙烯酰胺凝膠電泳3.毛細(xì)管電泳4.等電聚焦5.層析聚焦6.離子交換層析 三、利用選擇性吸附的純化方法:疏水

6、作用層析 四、利用配體的特異性親和力的純化方法:親和層析包含體表達(dá)形式的優(yōu)點(diǎn):高密度,易于分離純化,能簡(jiǎn)化外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離操作;有效地抵御了大腸桿菌中蛋白酶對(duì)目的蛋白的降解,在一定程度上保持表達(dá)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定;對(duì)宿主細(xì)胞無(wú)毒害。包含體表達(dá)形式的缺點(diǎn):?jiǎn)适Я嗽械纳锘钚?,必須通過(guò)有效的變性復(fù)性操作,才能回收得到具有正確空間構(gòu)象的目標(biāo)蛋白;體外復(fù)性蛋白質(zhì)成功率低,不超過(guò)30%。動(dòng)物細(xì)胞的生理特點(diǎn):1、細(xì)胞的分裂周期長(zhǎng) 2、細(xì)胞生長(zhǎng)需貼附于基質(zhì),并有接觸抑制現(xiàn)象 3、正常二倍體細(xì)胞的生長(zhǎng)壽命是有限的 4、動(dòng)物細(xì)胞對(duì)周?chē)h(huán)境十分敏感 5、動(dòng)物細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)基的要求高 6、動(dòng)物細(xì)胞對(duì)蛋白質(zhì)的合成途徑

7、和修飾功能與細(xì)菌不同動(dòng)物細(xì)胞制藥的前景與展望:1、改進(jìn)表達(dá)載體,提高表達(dá)水平和產(chǎn)量 2、利用代謝工程,改進(jìn)培養(yǎng)工藝,降低生產(chǎn)資本 3、抑制細(xì)胞凋亡,延長(zhǎng)培養(yǎng)周期 4、采用糖基化工程,提高產(chǎn)品質(zhì)量 5、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究 6、組織工程的研究HAT培養(yǎng)基的原理:它是用次黃嘌呤(H)、氨基碟呤(A)和胸腺嘧啶(T)配制的。其中氨基碟呤能阻斷DNA合成的主要途徑,瘤-瘤融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞不能合成DNA而死亡。脾-脾融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞在這樣的組織培養(yǎng)條件,幾天內(nèi)亦迅速死亡。由于SP2/0等骨髓細(xì)胞都是次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)缺乏株,脾細(xì)胞內(nèi)卻有這種酶,因此脾-瘤融合的雜交細(xì)胞可利用HGPRT

8、,用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)合成DNA,使雜交瘤細(xì)胞得以生長(zhǎng)。制備雙功能抗體的方法:1、非共價(jià)鍵二聚體 2、共價(jià)連接雙特異單鏈抗體 3、應(yīng)用亮氨酸拉鏈、螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋燈蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域?qū)蓡捂溈贵w連接起來(lái)抗體融合蛋白的類(lèi)型:1、配基-配基型融合蛋白 2、配基-Ig型嵌合蛋白 3、配基-Fv型嵌合蛋白 4、受體-Fv型融合蛋白 5、酶-抗體型融合蛋白構(gòu)建抗體融合蛋白的基本原則:將第一個(gè)蛋白的終止密碼子刪除,再接上帶有終止密碼子的第二個(gè)蛋白基因,即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)基因共表達(dá)。在構(gòu)建過(guò)程中關(guān)鍵的問(wèn)題是兩個(gè)蛋白間的街頭序列連接肽,一般來(lái)說(shuō)35個(gè)氨基酸就可滿足大部分融合蛋白的正確折疊的要求,加入一段有疏水

9、性和一定伸展性的較長(zhǎng)肽鏈,可緩解兩種蛋白相互干擾。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的基本方法:獲取目的基因,抗體庫(kù)技術(shù)的載體,淘篩,表達(dá)和檢定噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)的特點(diǎn):1、將抗體的基因型與表達(dá)型緊密聯(lián)系 2、模擬天然全套抗體庫(kù) 3、避開(kāi)了人工免疫和雜交瘤技術(shù) 4、可獲得高親和力的人源化抗體植物培養(yǎng)細(xì)胞的生理特性:1、植物細(xì)胞較大,有纖維素細(xì)胞壁,細(xì)胞耐拉不耐扭,抗剪切力差 2、生長(zhǎng)速度緩慢,易被污染,需用抗生素 3、細(xì)胞生長(zhǎng)的中期及對(duì)數(shù)期,多以非均相集合體的細(xì)胞團(tuán)形式存在,懸浮培養(yǎng)較難 4、培養(yǎng)時(shí)需供氧,培養(yǎng)液粘度大,不能耐受強(qiáng)力通風(fēng)和攪拌 5、具有群體效應(yīng),無(wú)接觸抑制性 6、產(chǎn)物多停留于細(xì)胞內(nèi),且產(chǎn)量較低 7

10、、細(xì)胞重量的增加在對(duì)數(shù)期,次級(jí)代謝產(chǎn)物的累積在穩(wěn)定期影響植物次級(jí)代謝產(chǎn)物累積的因素:1、生物條件(外植體、季節(jié)、休眠、分化)2、物理?xiàng)l件(光、溫度、PH、通氣)3、化學(xué)條件(培養(yǎng)基的化學(xué)組成、滲出物)4、工業(yè)培養(yǎng)條件(兩步培養(yǎng)法、攪拌頻率、培養(yǎng)容器的影響)植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)需考察的因素:1、供氧能力及氣泡分散程度 2、剪切力大小及對(duì)細(xì)胞的影響 3、高密度培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液的混合程度 4、溫度、PH及營(yíng)養(yǎng)物濃度的控制能力 5、細(xì)胞團(tuán)大小的控制能力 6、易于放大利用微生物生產(chǎn)酶制劑的優(yōu)點(diǎn):(1)能夠生產(chǎn)酶的微生物種類(lèi)繁多,有較大的選擇余地。(2)微生物繁殖快、培養(yǎng)周期短、培養(yǎng)方法簡(jiǎn)便,培養(yǎng)過(guò)程容易控制,

11、(3)微生物具有較強(qiáng)的適應(yīng)性,能夠培育出新的高產(chǎn)菌株。固定化細(xì)胞的特點(diǎn):1、無(wú)需進(jìn)行酶的分離純化 2、細(xì)胞保持酶的原始狀態(tài),固定化過(guò)程中酶的回收率高 3、細(xì)胞內(nèi)酶比固定化酶穩(wěn)定性高 4、細(xì)胞內(nèi)酶的輔助因子可以自動(dòng)再生 5、細(xì)胞本身含多酶體系,可催化一系列反應(yīng) 6、抗污染能力強(qiáng)固定化酶的性質(zhì):(1)酶活力的變化 (2)酶反應(yīng)特性的變化 (3)最適PH值 (4)最適溫度 (5)米氏常數(shù) (6)最大反應(yīng)速度固定化酶的特點(diǎn):(1)固定化酶屬于修飾酶,這種酶可以通過(guò)化學(xué)、生物、分子工程手段加以改良。(2)固定化酶的穩(wěn)定性很高,可以多次連續(xù)使用。(3)反應(yīng)以后,產(chǎn)物中不含酶,易于純化。(4)反應(yīng)條件易于控

12、制,可實(shí)現(xiàn)連續(xù)化和自動(dòng)控制。(5)酶的利用率高,酶的實(shí)際使用量較少。(6)固定化酶比水溶性酶更適合進(jìn)行多酶反應(yīng)。固定化反應(yīng)器的類(lèi)型:(1)間歇式攪拌反應(yīng)罐(BSTR)(2)連續(xù)流動(dòng)攪拌反應(yīng)罐(CSTR)(3)填充式反應(yīng)罐(PBR)(4)流化床反應(yīng)器(FBR)(5)循環(huán)反應(yīng)器(RCR)(6)連續(xù)流動(dòng)攪拌超濾膜反應(yīng)器(CSTR/UF)(7)其它反應(yīng)器反應(yīng)器的選擇依據(jù):(1)根據(jù)固定化酶的形狀來(lái)選擇。(2)根據(jù)底物的物理性質(zhì)來(lái)選擇。(3)根據(jù)外界環(huán)境條件對(duì)于酶的穩(wěn)定性來(lái)選擇。(4)根據(jù)操作要求和固定化酶反應(yīng)器的投資費(fèi)用來(lái)選擇。酶化學(xué)修飾的方法1.酶的表面化學(xué)修飾(大分子修飾、小分子修飾、交聯(lián)修飾、固

13、定化修飾)2、酶分子內(nèi)部的修飾(非催化活性基團(tuán)的修飾、蛋白主鏈修飾、催化活性基團(tuán)的修飾、與輔因子相關(guān)的修飾、肽鏈伸展后的修飾)3.結(jié)合位點(diǎn)突變的化學(xué)修飾有機(jī)相酶反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn):1、增加疏水性底物或產(chǎn)物的溶解度 2、熱力學(xué)平衡向合成方向移動(dòng) 3、可抑制有水參與的副反應(yīng) 4、酶不溶于有機(jī)介質(zhì),易于回收再利用 5、易從低沸點(diǎn)溶劑中分離純化產(chǎn)物 6、酶的熱穩(wěn)定性提高,pH的適應(yīng)性擴(kuò)大 7、無(wú)微生物污染 8、能測(cè)定某些在水介質(zhì)中不能測(cè)定的常數(shù) 9、固定化酶方法簡(jiǎn)單修飾酶的特性:1、熱穩(wěn)定性提高2、抗各類(lèi)失活因子能力提高3、抗原性消失4、體內(nèi)半衰期延長(zhǎng)5、最適pH改變6、酶學(xué)性質(zhì)變化7、對(duì)組織分布能力改變有機(jī)

14、相酶反應(yīng)的溶劑體系:水水溶性溶劑均相體系、水水不溶性溶劑兩相體系、膠束與反相膠束體系、單相有機(jī)溶劑體系有機(jī)相酶反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn):1、增加疏水性底物或產(chǎn)物的溶解度 2、熱力學(xué)平衡向合成方向移動(dòng) 3、可抑制有水參與的副反應(yīng) 4、酶不溶于有機(jī)介質(zhì),易于回收再利用 5、易從低沸點(diǎn)溶劑中分離純化產(chǎn)物 6、酶的熱穩(wěn)定性提高,pH的適應(yīng)性擴(kuò)大 7、無(wú)微生物污染 8、能測(cè)定某些在水介質(zhì)中不能測(cè)定的常數(shù) 9、固定化酶方法簡(jiǎn)單抗生素生物合成基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn):1、高G-C堿基組成 2、屬于同一個(gè)基因簇 3、抗生素生物合成基因除在染色體上外,有的也定位在質(zhì)粒上克隆抗生素生物合成基因的方法:1、在準(zhǔn)宿主系統(tǒng)中克隆檢測(cè)單基因產(chǎn)物

15、 2、阻斷變株法 3、突變克隆法 4、直接克隆法5、克隆抗生素抗性基因法 6、寡核苷酸探針?lè)?7、同源基因雜交法基因工程抗體概念及其目的: 基因工程抗體:又稱重組抗體,是指利用重組DNA和蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)編碼抗體的基因按不同需要進(jìn)行加工改造和重新裝配,經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子。目的:降低鼠源性單克隆抗體分子的免疫原性、降低抗體的相對(duì)分子質(zhì)量,以增加組織的透過(guò)性基因工程抗體改造實(shí)例:免疫原性:人一鼠嵌合抗體 改型抗體 分子量:Fab、Fv、ScFv、單域抗體基因表達(dá)研究關(guān)注的主要問(wèn)題:1目的基因的表達(dá)產(chǎn)量2表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性3產(chǎn)物的生物學(xué)活性4表達(dá)產(chǎn)物的分離純化。影響植物次生代謝積累因

16、素一、生物條件。外植體:培養(yǎng)時(shí)期、大小、前處理、細(xì)胞密度 。季節(jié) 休眠 分化二、物理?xiàng)l件 光:植物光照和激素具有協(xié)同作用或?qū)棺饔?溫度 ph 通氣三、化學(xué)條件 培養(yǎng)基的化學(xué)組成 滲出物 四、工業(yè)培養(yǎng)條件 兩步培養(yǎng)法細(xì)胞工程:按照一定的設(shè)計(jì)方案,通過(guò)在細(xì)胞、亞細(xì)胞或組織水平上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,獲得重構(gòu)的細(xì)胞、組織、器官以及個(gè)體,創(chuàng)造優(yōu)良品種和產(chǎn)品的綜合性生物工程。包括的技術(shù):真核細(xì)胞的基因重組、導(dǎo)入、擴(kuò)增和表達(dá)的理論和技術(shù);細(xì)胞融合的理論和技術(shù);細(xì)胞器特別是細(xì)胞核移植的理論和技術(shù);染色體改造的理論和技術(shù);轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物的理論和技術(shù);細(xì)胞大量培養(yǎng)的理論和技術(shù),以及將有關(guān)產(chǎn)物提取純化的理論和技術(shù) ;論述

17、:基因工程藥物生產(chǎn)的過(guò)程(論述):基因工程技術(shù)就是將所要組建對(duì)象的目的基因插入載體、拼接、轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞,構(gòu)建成工程菌,實(shí)現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合,并使目的基因在工程菌內(nèi)進(jìn)行復(fù)制和表達(dá)的技術(shù)?;蚬こ趟幬镏圃斓闹饕襟E是:目的基因的克隆,構(gòu)建DNA重組體,構(gòu)建工程菌,目的基因的表達(dá),外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化,產(chǎn)品的檢驗(yàn)等??煞譃樯嫌魏拖掠蝺蓚€(gè)階段。上游階段:主要是分離目的基因、構(gòu)建工程菌(細(xì)胞)。目的基因獲得后,最主要的就是目的基因的表達(dá)。選擇基因表達(dá)系統(tǒng)主要考慮的是保證表達(dá)的蛋白質(zhì)的功能,其次是表達(dá)的量和分離純化的難易。此階段的工作主要在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成。下游階段:從工程菌的大量培養(yǎng)一直到產(chǎn)品的

18、分離純化和質(zhì)量控制。此階段是將實(shí)驗(yàn)室的成果產(chǎn)業(yè)化、商品化,主要包括:工程菌大規(guī)模發(fā)酵最佳參數(shù)的確立、新型生物反應(yīng)器的研制、高效分離介質(zhì)及裝置的開(kāi)發(fā)、分離純化的優(yōu)化控制、高純度產(chǎn)品的制備技術(shù)、生物傳感器等一系列儀器儀表的設(shè)計(jì)和制造、電子計(jì)算機(jī)的優(yōu)化控制等。動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)條件,培養(yǎng)方法與培養(yǎng)方式:培養(yǎng)條件(1)器材的清洗和消毒:器材的清洗:浸泡、刷洗、泡酸、沖洗;器材的消毒滅菌:物理消毒、化學(xué)消毒(2)水質(zhì):電阻值大于18M,去熱原。(3)pH:7.27.4(4) 滲透壓:290300mOsm/kg(5) 溫度:370.5 C(6) 空氣:氧的飽和質(zhì)60%,氧分壓40.7kPa培養(yǎng)方法:【1】細(xì)胞

19、分離(1)離心分離法。主要用于從含有細(xì)胞的體液如血液,羊水,胸腹水中分離細(xì)胞,離心速度過(guò)高或時(shí)間過(guò)長(zhǎng),易擠壓細(xì)胞使之受損傷或死亡。(2)消化分離法。是從生物體取來(lái)組織塊,將其剪碎,并用消化液將其消化,使組織松散或細(xì)胞懸液然后用緩沖液洗滌,離心,去除殘留的消化液而獲得所需的細(xì)胞?!?】細(xì)胞計(jì)數(shù)(1)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)。原理:讓一定體積的細(xì)胞懸液經(jīng)一小孔,并在兩個(gè)電極間通過(guò),此時(shí)通過(guò)的細(xì)胞就會(huì)對(duì)電極產(chǎn)生干擾而使電壓發(fā)生改變,這樣就會(huì)在電子計(jì)數(shù)器上形成一個(gè)信號(hào)被記錄下來(lái)(2)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)(3)結(jié)晶紫染色細(xì)胞核計(jì)數(shù)法(4)MTT染色計(jì)數(shù)法。該方法的原理是活細(xì)胞內(nèi)的線粒體脫氫酶能將MTT(淡黃色)轉(zhuǎn)變

20、為不可溶性的紫色甲 結(jié)晶,它可溶于脫色液,其色澤的深淺與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,通過(guò)比色即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線求出細(xì)胞數(shù)。【3】細(xì)胞傳代。(1)懸浮細(xì)胞的傳代(2)貼壁細(xì)胞的傳代【4】細(xì)胞凍存和復(fù)蘇。(1)細(xì)胞的凍存。在凍存時(shí),冷凍速度很重要,不能太快也不能太慢(2)細(xì)胞的復(fù)蘇。復(fù)蘇時(shí)總的要求是快融mtt原理:活細(xì)胞中線粒體脫氫酶能將四唑鹽(淡黃色)還原成不溶干水的紫色產(chǎn)物甲臢(formazan),并沉淀在細(xì)胞中,而死細(xì)胞沒(méi)有這種功能。二甲亞砜(DMSO)能溶解沉積在細(xì)胞中紫色結(jié)晶物,溶液顏色深淺與所含的formazan量成正比。再用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的方法【1】懸浮培養(yǎng)。讓細(xì)胞自由地懸浮

21、于培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)增殖【2】貼壁培養(yǎng)。必須讓細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)方法【3】貼壁-懸浮培養(yǎng)。(1)微載體培養(yǎng)(2)包埋和微囊培養(yǎng)(3)結(jié)團(tuán)培養(yǎng)操作方式【1】分批式操作【2】半連續(xù)式操作【3】灌流式操作大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)載體必須具備的條件:(1)載體能夠獨(dú)立的復(fù)制;(2)具有靈活的克隆位點(diǎn)和方便的篩選標(biāo)記,以籃球外源基因的克隆、鑒定和篩選;(3)具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子,能為大腸桿菌的RNA聚合酶所識(shí)別;(4)具有阻遏子,使啟動(dòng)子受到控制,只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄;(5)具有很強(qiáng)的終止子,以便使RNA聚合酶集中力量轉(zhuǎn)錄克隆的外源基因, 而不轉(zhuǎn)錄無(wú)關(guān)的基因;(6)所產(chǎn)生的mRNA必須具有翻譯的

22、起始信號(hào),即起始密碼AUG和SD序列, 以便轉(zhuǎn)錄后能順利翻譯?;蚬こ躺L(zhǎng)代謝菌的特點(diǎn)?菌體的生長(zhǎng)通常用比生長(zhǎng)速率來(lái)表示??刂凭w的生長(zhǎng)對(duì)提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性、減少代謝副產(chǎn)物積累、提高外源蛋白產(chǎn)率有重要意義。 工程菌培養(yǎng)可通過(guò)選用不同的碳源控制補(bǔ)料和稀釋速率等方法來(lái)控制菌體的生長(zhǎng)。大腸桿菌的蛋白/菌體量的比值是基本恒定的,因而菌體的生長(zhǎng)速度反映了蛋白質(zhì)的合成速度。培養(yǎng)條件的改變,都會(huì)改變菌體的能量代謝和小分子前體的供應(yīng),影響生物大分子的合成和菌體的生長(zhǎng)。對(duì)菌體生長(zhǎng)的調(diào)控主要有兩種觀點(diǎn):一種觀點(diǎn)認(rèn)為能量的供應(yīng)決定了菌體的最大比生長(zhǎng)速率;另一種觀點(diǎn)認(rèn)為是小分子前體和催化組分的限制決定了菌體的最大比生長(zhǎng)

23、率。一、菌體的生長(zhǎng)與能量的關(guān)系1、碳源物質(zhì)是組成培養(yǎng)基的主要成分。碳源物質(zhì)為細(xì)胞提供能量;當(dāng)菌體生長(zhǎng)所需能量大于菌體有氧代謝提供的能量時(shí),菌體會(huì)產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物乙酸;高濃度的乙酸明顯抑制菌體的生長(zhǎng)。乙醇的抑制作用與pH有關(guān),適當(dāng)提高pH,可減少乙酸的抑制作用。培養(yǎng)方式中的措施:分批培養(yǎng)中選擇不同的碳源,補(bǔ)料培養(yǎng)中通過(guò)控制補(bǔ)料速度,連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速度等培養(yǎng)方法,都能一定范圍內(nèi)控制菌體的生長(zhǎng),從而控制乙酸的產(chǎn)生,減少它的抑制作用,以實(shí)現(xiàn)工程菌的高密度培養(yǎng)和提高重組產(chǎn)物的表達(dá)水平。加入蛋氨酸和酵母提取物都能減少乙酸的產(chǎn)生。實(shí)質(zhì):控制菌體的糖酵解速度,使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力,從而避

24、免乙酰輔酶A的積累和乙酸的產(chǎn)生。代價(jià):降低供能速度或前體供應(yīng)速度來(lái)降低蛋白合成和菌體生長(zhǎng)速度2、 菌體生長(zhǎng)與前體供應(yīng)的關(guān)系:在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入氨基酸(小分子前體)能使菌體比生長(zhǎng)率提高,蛋白合成增加。由于菌體中小分子前體量和催化結(jié)構(gòu)是有限的,因而生物大分子的合成處于亞飽和狀態(tài),限制了菌體的比生長(zhǎng)速率?;虮磉_(dá)在各個(gè)水平的競(jìng)爭(zhēng)又是各個(gè)基因互相競(jìng)爭(zhēng)共同的前體和催化結(jié)構(gòu)的結(jié)果。對(duì)于基因工程菌來(lái)說(shuō),由于基因工程菌質(zhì)粒的復(fù)制和外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯需要與宿主細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)共同的前體和催化結(jié)構(gòu),從而加劇了這些成分的不足,因而在同樣的培養(yǎng)基中,工程菌的比生長(zhǎng)速率往往低于其宿主細(xì)胞,特別是工程菌誘導(dǎo)后,由于外源基因的大

25、量表達(dá),引起菌體比生長(zhǎng)速率下降,甚至生長(zhǎng)停滯。質(zhì)粒存在對(duì)菌體代謝的影響:中等拷貝質(zhì)粒(56拷貝)的工程菌中與前體合成有關(guān)的酶增加,這些酶的基因大多受終產(chǎn)物的反饋調(diào)節(jié)。高拷貝質(zhì)粒的工程菌(240拷貝)中,生長(zhǎng)速率和菌體總蛋白合成均減少。這與工程菌大量前體被利用引起前體不足,從而產(chǎn)生“嚴(yán)緊反應(yīng)”有關(guān)?!皣?yán)緊反應(yīng)”是當(dāng)氨酰tRNA不足時(shí),核糖體在密碼子上停留,并合成被稱為魔點(diǎn)的ppGpp的結(jié)果。ppGpp是一個(gè)重要的調(diào)控分子。兩種觀點(diǎn):ppGpp的濃度增加會(huì)導(dǎo)致在合成mRNA和rRNA時(shí)RNA聚合酶在模板上的移動(dòng)產(chǎn)生停頓,RNA鏈延長(zhǎng)速度減慢,使游離的RNA聚合酶濃度降低,嚴(yán)緊控制的啟動(dòng)子如rrnA

26、等的轉(zhuǎn)錄減少;也可能ppGpp是通過(guò)干擾RNA聚合酶與PL啟動(dòng)子專(zhuān)一識(shí)別反應(yīng)。固定化酶的優(yōu)點(diǎn)及如何制備?固定化酶的優(yōu)點(diǎn):(1)固定化酶屬于修飾酶,這種酶可以通過(guò)化學(xué)、生物、分子工程手段加以改良。(2)固定化酶的穩(wěn)定性很高,可以多次連續(xù)使用。(3)反應(yīng)以后,產(chǎn)物中不含酶,易于純化。(4)反應(yīng)條件易于控制,可實(shí)現(xiàn)連續(xù)化和自動(dòng)控制。(5)酶的利用率高,酶的實(shí)際使用量較少。(6)固定化酶比水溶性酶更適合進(jìn)行多酶反應(yīng)。酶的固定化,就是通過(guò)載體等將酶限制或固定于特定的空間位置,使酶變成不易隨水流失即運(yùn)動(dòng)受到限制,而又能發(fā)揮催化作用的酶制劑。根據(jù)酶的應(yīng)用目的和特性來(lái)選擇固定化方法。酶固定化的方法:1載體結(jié)合

27、法(物理吸附法、離子結(jié)合法、共價(jià)結(jié)合法)載體結(jié)合法是將酶結(jié)合到不溶性載體上的一種固定化方法,根據(jù)結(jié)合形式的不同,可以分為物理吸附法、離子結(jié)合法和共價(jià)結(jié)合法等三種;2交聯(lián)法:用雙功能或多功能試劑使酶與酶或微生物的細(xì)胞與細(xì)胞之間交聯(lián)的固定化方法;3包埋法(網(wǎng)格型、微囊型)將酶或含酶菌體包埋在各種多孔載體中,使酶固定化的方法。包埋法可分為網(wǎng)格型和微囊型兩種。將酶或細(xì)胞包埋在高分子凝膠細(xì)微網(wǎng)絡(luò)中的稱為網(wǎng)格型,將酶或細(xì)胞包埋在高分子半透膜中的稱為微囊型;4熱處理(細(xì)胞)。 以下是附加文檔,不需要的朋友下載后刪除,謝謝班主任工作總結(jié)專(zhuān)題8篇第一篇:班主任工作總結(jié)小學(xué)班主任特別是一年級(jí)的班主任,是一個(gè)復(fù)合性

28、角色。當(dāng)孩子們需要關(guān)心愛(ài)護(hù)時(shí),班主任應(yīng)該是一位慈母,給予他們細(xì)心的體貼和溫暖;當(dāng)孩子們有了缺點(diǎn),班主任又該是一位嚴(yán)師,嚴(yán)肅地指出他的不足,并幫助他改正。于是,我認(rèn)為班主任工作是一項(xiàng)既艱巨而又辛苦的工作。說(shuō)其艱巨,是指學(xué)生的成長(zhǎng),發(fā)展以至能否成為合格人才,班主任起著關(guān)鍵性的作用,說(shuō)其辛苦,是指每天除了對(duì)學(xué)生的學(xué)習(xí)負(fù)責(zé)以外,還要關(guān)心他們的身體、紀(jì)律、衛(wèi)生、安全以及心理健康等情況。盡管這樣,下面我就談幾點(diǎn)做法和體會(huì)。一、常規(guī)習(xí)慣,常抓不懈學(xué)生良好的行為習(xí)慣的養(yǎng)成不是一節(jié)課、一兩天說(shuō)說(shuō)就行的,它必須貫穿在整個(gè)管理過(guò)程中。于是我制定出詳細(xì)的班規(guī),要求學(xué)生對(duì)照?qǐng)?zhí)行,使學(xué)生做到有規(guī)可循,有章可依。由于低年級(jí)

29、學(xué)生自覺(jué)性和自控力都比較差,避免不了會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的錯(cuò)誤,因此這就需要班主任做耐心細(xì)致的思想工作、不能操之過(guò)急。于是,我經(jīng)常利用班會(huì)對(duì)學(xué)生中出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行曉之以理、動(dòng)之以情、導(dǎo)之以行的及時(shí)教育,給他們講明道理及危害性,從而使學(xué)生做到自覺(jué)遵守紀(jì)律。二、細(xì)處關(guān)愛(ài),親近學(xué)生愛(ài),是教師職業(yè)道德的核心,一個(gè)班主任要做好本職工作,首先要做到愛(ài)學(xué)生?!案腥诵恼撸群跚?。”工作中,我努力做到于細(xì)微處見(jiàn)真情,真誠(chéng)的關(guān)心孩子,熱心的幫助孩子。我深信,愛(ài)是一種傳遞,當(dāng)教師真誠(chéng)的付出愛(ài)時(shí),收獲的必定是孩子更多的愛(ài)!感受孩子們的心靈之語(yǔ),便是我最快樂(lè)的一件事!”三、具體要求,指導(dǎo)到位心理學(xué)研究表明,兒童對(duì)事物的認(rèn)知

30、是整體性的,能熟知輪廓,但不注重細(xì)節(jié)。我認(rèn)為,首先要蹲下來(lái),以孩子的視角觀察事物,用孩子能聽(tīng)懂的話和他們交流。其次,要注重細(xì)節(jié)教育,把該做的事指導(dǎo)到位,因?yàn)樗麄兒芟氚凑绽蠋煹囊笕プ?,很想把事情做好。四、示范帶頭,直觀引導(dǎo)大教育家烏申斯基曾有過(guò)這樣一段話:“教師個(gè)人的范例,對(duì)于學(xué)生的心靈是任何東西都不能代替的最有用的陽(yáng)光。”低年級(jí)的學(xué)生對(duì)自己的班主任是一個(gè)怎樣的老師,他們會(huì)留心觀察班主任的每一個(gè)動(dòng)作、每一個(gè)眼神、每一種表情,會(huì)細(xì)心傾聽(tīng)班主任的每一句話,他們對(duì)班主任有著一種特殊的信任和依賴情感。班主任的自身素質(zhì),道德修養(yǎng),班主任的一言一行,一舉一動(dòng),無(wú)形之中會(huì)成為全班幾十個(gè)孩子的榜樣。因此,在班

31、級(jí)工作中我時(shí)刻注意自身形象,事事從我做起,以良好的形象率先垂范,潛移默化的影響著我的學(xué)生。凡要求學(xué)生做到的,教師首先自己做到,而且做得更好。要求學(xué)生講衛(wèi)生,不隨便亂扔垃圾,自己就做到隨手撿拾垃圾。要求學(xué)生不遲到,在我的帶動(dòng)下,我們班的大多數(shù)學(xué)生都能做到講衛(wèi)生不遲到,個(gè)個(gè)講文明守紀(jì)律。五、及時(shí)表?yè)P(yáng),延遲批評(píng)德國(guó)美學(xué)家黑格爾說(shuō):“不應(yīng)該使孩子們的注意力長(zhǎng)久地集中在一些過(guò)失上,對(duì)此,盡可能委婉地提醒一下就夠了。最重要的是要在學(xué)生身上激發(fā)出對(duì)自身力量和自身榮譽(yù)的信念?!苯踢^(guò)低年級(jí)的老師都知道:孩子小,事兒多,一上課就“告狀”。當(dāng)老師的又不能不公平處理,這樣耽誤的時(shí)間太多,而且學(xué)生因?yàn)槭芰伺u(píng),注意力長(zhǎng)

32、時(shí)間集中在自己的過(guò)失上,情緒受影響,低落的情緒體驗(yàn)使智力活動(dòng)水平明顯下降,課堂吸收效率變低。針對(duì)這一情況,我采取延遲批評(píng),這樣既培養(yǎng)學(xué)生愉快的情緒體驗(yàn),又給予其改正和返回的機(jī)會(huì),之后老師只要加以指導(dǎo),就能很好的解決問(wèn)題.本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第二篇:四年級(jí)班主任工作總結(jié)學(xué)生是涌動(dòng)著無(wú)限活力的生命體,是教育的起點(diǎn)和歸宿。面對(duì)學(xué)生,祖國(guó)的未來(lái),我們要做一個(gè)真正有意義的班主任,素質(zhì)教育要求我們要面向全體學(xué)生,為學(xué)生服好務(wù),使學(xué)生的思想道德、文化科學(xué)、勞動(dòng)技能、身體心理素質(zhì)得到全面和諧地發(fā)展,我們的班級(jí)管理究竟該如何閱讀學(xué)生個(gè)體,提升學(xué)生學(xué)習(xí)生活及生命的質(zhì)量呢?

33、在過(guò)去的一學(xué)期里,我們班在學(xué)校的統(tǒng)一組織、領(lǐng)導(dǎo)和同學(xué)們的共同努力下及任課老師的大力支持和配合下,各項(xiàng)工作順利開(kāi)展,安全、學(xué)習(xí)、工作等方面都取得較突出的成績(jī),現(xiàn)將我所做的一些工作總結(jié)如下:一、做好學(xué)生的思想工作,培養(yǎng)學(xué)生良好的道德品質(zhì),凈化學(xué)生的心靈,努力培養(yǎng)德智體全面發(fā)展的人才做好學(xué)生的思想工作從兩方面入手,一是重視每周的班會(huì)課,開(kāi)好班會(huì)課;二是重視與學(xué)生的思想交流,多與學(xué)生談心。重視班會(huì),開(kāi)好班會(huì),為的是在班中形成正確的輿論導(dǎo)向,形成良好的班風(fēng)、學(xué)風(fēng),為學(xué)生提供一個(gè)好的大環(huán)境,重視的是學(xué)生的共性。為配合學(xué)校各項(xiàng)工作的落實(shí),我們班積極開(kāi)展了許多有益于學(xué)生身心健康發(fā)展的活動(dòng),讓學(xué)生在活動(dòng)中明事理

34、、長(zhǎng)見(jiàn)識(shí)。學(xué)生自尊心也很強(qiáng),直接的批評(píng)換回來(lái)的可能是思想的叛逆,利用班會(huì)課對(duì)學(xué)生進(jìn)行思想教育的好處,就是避免單調(diào)重復(fù)的批評(píng)說(shuō)教而引起學(xué)生的反感,容易為學(xué)生接受,能切實(shí)幫助學(xué)生澄清思想上的模糊認(rèn)識(shí),提高學(xué)生的思想境界。但開(kāi)班會(huì)課不一定都要等到每周二下午第四節(jié),可利用一些零碎的又不影響學(xué)科學(xué)習(xí)的時(shí)間開(kāi)短小精悍的班會(huì)也能取得良好的效果。不必長(zhǎng)篇大論,班主任把及時(shí)發(fā)現(xiàn)的不良思想的苗頭一針見(jiàn)血地指出來(lái),對(duì)事不對(duì)人,進(jìn)行警示性的引導(dǎo)教育,往往能把一些影響班風(fēng)、學(xué)風(fēng)的不良思想消滅在萌芽階段。而重視與學(xué)生的思想交流,多與學(xué)生談心,注重的是學(xué)生的個(gè)性和因材施教。我常利用課余時(shí)間和學(xué)生促膝談心,及時(shí)對(duì)學(xué)生進(jìn)行針對(duì)

35、性的教育。用個(gè)人的魅力征服學(xué)生,用自己的熱情和朝氣感染學(xué)生。體現(xiàn)在學(xué)習(xí)、生活的方方面面。做任何事情,一定要從學(xué)生的角度去考慮,為學(xué)生利益著想,學(xué)生才易于接受。在這個(gè)時(shí)候,我就是他們的好朋友,盡量為他們排憂解難,也正因如此,我得到了班上大多數(shù)學(xué)生的喜愛(ài)和信任。二、加強(qiáng)班級(jí)管理,培養(yǎng)優(yōu)秀的學(xué)風(fēng)、班風(fēng),深入全面地了解學(xué)生,努力培養(yǎng)團(tuán)結(jié)、嚴(yán)格、活潑、奮進(jìn)的班集體四年級(jí)的學(xué)生思想、心理發(fā)展、變化很快。因此,對(duì)學(xué)生的思想工作顯得尤其復(fù)雜和重要。在這個(gè)學(xué)期里,我的班級(jí)管理工作主要從三方面實(shí)施:一方面,我主要加大了對(duì)學(xué)生自治自理能力培養(yǎng)的力度,通過(guò)各種方式,既注意指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行自我教育,讓學(xué)生在自我意識(shí)的基礎(chǔ)上

36、產(chǎn)生進(jìn)取心,逐漸形成良好的思想行為品質(zhì);又注意指導(dǎo)學(xué)生如何進(jìn)行自我管理,培養(yǎng)他們多方面的能力,放手讓學(xué)生自我設(shè)計(jì)、自我組織各種教育活動(dòng),在活動(dòng)中把教育和娛樂(lè)融入一體;還注意培養(yǎng)學(xué)生的自我服務(wù)的能力,讓學(xué)生學(xué)會(huì)規(guī)劃、料理、調(diào)控自己,使自己在集體中成為班集體的建設(shè)者,而不是包袱。在這點(diǎn)上,特別值得一提的是班干部的選用,這是讓學(xué)生自治的重要途徑。班主任的管理代表的是學(xué)校的管理,不論班主任如何和顏悅色都帶有不容質(zhì)疑的權(quán)威性,也難免有不被理解和接受的時(shí)候,通過(guò)班干部的協(xié)調(diào),往往能夠取得意想不到的效果。班干部起的是協(xié)助班主任管理班級(jí)的作用,他們接受班主任的指導(dǎo),又及時(shí)向班主任反饋班級(jí)情況和同學(xué)們的思想動(dòng)態(tài)

37、;他們分工管理班級(jí)的各項(xiàng)事務(wù),同時(shí)又是一個(gè)團(tuán)結(jié)合作的整體。選好班干部,不但有利于班級(jí)管理,而且有利于全體學(xué)生共同發(fā)展。培養(yǎng)學(xué)生擔(dān)任班干部,是培養(yǎng)學(xué)生能力、提高學(xué)生素質(zhì)的一種很有效的方法,如培養(yǎng)其組織能力、管理能力、社交能力、語(yǔ)言表達(dá)能力等,還可以培養(yǎng)其關(guān)心集體、關(guān)心他人、樂(lè)于奉獻(xiàn)、積極進(jìn)取等優(yōu)良的思想品質(zhì)。多培養(yǎng)班干部有利于多數(shù)學(xué)生全面發(fā)展.本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第三篇:特教班主任工作總結(jié)本學(xué)期在校領(lǐng)導(dǎo)的信任和支持下,我繼續(xù)擔(dān)任高考班班主任的工作,為了在今后的工作能夠取長(zhǎng)補(bǔ)短,特總結(jié)如下:(一)抓常規(guī)管理規(guī)范學(xué)生的行為習(xí)慣早到校、兩操、打掃除、校各項(xiàng)活動(dòng)

38、的參加都認(rèn)真組織,嚴(yán)格要求,決不馬虎,讓學(xué)生感到做人就要這樣嚴(yán)謹(jǐn)、認(rèn)真、一絲不茍。至今學(xué)生以習(xí)慣成自然。例如間操時(shí)間一到不用老師強(qiáng)調(diào),都主動(dòng)自覺(jué)去做,贏得任課老師的好評(píng)。(二)實(shí)行班級(jí)管理我們班級(jí)發(fā)展的目標(biāo)都是由師生共同商討確立的,并且分工負(fù)責(zé)。這樣,使管理者和被管理者做到和諧統(tǒng)一。師生能以誠(chéng)相待,共同決策,使學(xué)生感覺(jué)到班級(jí)的事也有他們的一部分。通過(guò)分級(jí)管理,班干部承擔(dān)了一些日常事務(wù)的管理工作,并有權(quán)獨(dú)立處理相關(guān)事務(wù)。班主任則激勵(lì)和指導(dǎo)學(xué)生自主性的發(fā)揮,化解工作中的矛盾。通過(guò)自我管理,既加強(qiáng)了班干部隊(duì)伍的建設(shè),培養(yǎng)了學(xué)生組織管理能力,又提高了全體學(xué)生的自覺(jué)性,自制力。(三)營(yíng)造良好的學(xué)習(xí)環(huán)境現(xiàn)

39、在初中學(xué)生的學(xué)習(xí)、生活有絕大部分時(shí)間是在學(xué)校里度過(guò)的。班級(jí)即是學(xué)生的一個(gè)大家庭。營(yíng)造良好的學(xué)習(xí)環(huán)境,對(duì)提高學(xué)生的德育素質(zhì),起了相當(dāng)大的作用。首先對(duì)學(xué)生進(jìn)行理想教育,學(xué)習(xí)目的教育,習(xí)慣的養(yǎng)成教育,培養(yǎng)其自信心及責(zé)任意識(shí),其次,建立一些監(jiān)督機(jī)制,獎(jiǎng)懲制度,定期檢查,定期反饋,賞罰分明,現(xiàn)在班級(jí)風(fēng)氣正,學(xué)風(fēng)濃,凝聚力強(qiáng)。班級(jí)真正成為一個(gè)和諧向上的集體。(四)個(gè)別教育與表?yè)P(yáng)相結(jié)合班級(jí)中思想基礎(chǔ)和學(xué)習(xí)都比較差的學(xué)生。通常表現(xiàn)為精力旺盛而又學(xué)不進(jìn)去,思想活躍而又任性好動(dòng),對(duì)班集體正常的學(xué)習(xí)生活秩序有一定影響。在教育轉(zhuǎn)化這部分學(xué)生時(shí),我從建立和培養(yǎng)感情入手,親近他、關(guān)心他、了解他,努力發(fā)現(xiàn)他身上的閃光點(diǎn),如

40、在班級(jí)活動(dòng)中,象打掃衛(wèi)生、主動(dòng)抬水,拾到東西主動(dòng)上繳,積極參加校運(yùn)會(huì)入場(chǎng)式等等,都及時(shí)表?yè)P(yáng),使這些不管在家里,還是在學(xué)校,極少獲得表?yè)P(yáng),久而久之,已經(jīng)失去了上進(jìn)心和自我認(rèn)同感,缺乏自信心的同學(xué),從拾自信,使他們?cè)诎嘀魅纬浞掷斫夂托湃蔚幕A(chǔ)上,使性格和人格回到了正確的軌道上來(lái).本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第四篇:優(yōu)秀班主任工作總結(jié)素質(zhì)教育要求我們要面向全體學(xué)生,使學(xué)生的思想道德、文化科學(xué)、勞動(dòng)技能、身體心理素質(zhì)得到全面和諧地發(fā)展,個(gè)性特長(zhǎng)得到充分的培育。這是一項(xiàng)長(zhǎng)期的、具有劃時(shí)代意義的改革。學(xué)校教育是我國(guó)主要的教學(xué)形式,班級(jí)授課制是學(xué)校教育的基本形式。因此,作為

41、班集體靈魂的班主任應(yīng)該充分認(rèn)識(shí)到自己所承擔(dān)的歷史重任。小學(xué)班主任面對(duì)6、7歲-11、12歲的兒童,工作更加繁重。我相信,任何一位班主任都希望勝任這項(xiàng)工作并把自己從繁重中盡量解脫出來(lái),那么,如何開(kāi)展小學(xué)班主任工作就至關(guān)重要。下面我談?wù)勛约旱捏w會(huì)。一、親近學(xué)生,研究學(xué)生;展現(xiàn)自我,樹(shù)立威望。誰(shuí)愛(ài)孩子,孩子就會(huì)愛(ài)他,只有用愛(ài)才能教育孩子。班主任要善于接近孩子,體貼和關(guān)心學(xué)生,和他們進(jìn)行親密的思想交流,讓他們真正感受到老師對(duì)他的親近和愛(ài)。這是班主任順利開(kāi)展一切工作的基礎(chǔ)。研究學(xué)生是教育取得成功的必要條件,最好的途徑是通過(guò)活動(dòng)觀察。了解班風(fēng)、學(xué)風(fēng),了解全班主要的優(yōu)缺點(diǎn)并分析其原因所在,了解家長(zhǎng)普遍的文化

42、層次,找到亟待糾正的弱點(diǎn);二要研究學(xué)生的個(gè)性特征(包括能力、氣質(zhì)、性格、愛(ài)好等),了解個(gè)人的生活環(huán)境,掌握哪些是積極分子,哪些是特別需要注意的學(xué)生等等。在親近與研究學(xué)生的過(guò)程中,班主任要努力展現(xiàn)自身廣博的文化與高尚的道德情操,使學(xué)生對(duì)你既親近又崇拜,既認(rèn)定你是值得信賴的老師,又把你當(dāng)作好朋友,樹(shù)立起班主任崇高的威望。那么,你的教育可能取得事半功倍的效果。二、班干部隊(duì)伍的組建和培養(yǎng)。一個(gè)班的集體面貌如何,很大程度上是由小班干部決定的。小班干部對(duì)班集體有著以點(diǎn)帶面和以面帶面的作用,我稱他們是班主任的左右手。所以唯有慎重地選拔和培養(yǎng)班干部隊(duì)伍,班主任工作才能逐漸從繁重走向簡(jiǎn)單與輕松。當(dāng)選的班干部應(yīng)具

43、有較強(qiáng)的號(hào)召力和自我管理能力。班干部隊(duì)伍的組建不能僅僅作為一種形式存在,班主任必須精心培養(yǎng):其一,要大力表?yè)P(yáng)班干部?jī)?yōu)點(diǎn),宣傳他們的先進(jìn)事跡,幫助小班干部樹(shù)立威信;其二,在鼓勵(lì)班干部大膽工作,指點(diǎn)他們工作方法的同時(shí),要更嚴(yán)格要求班干部個(gè)人在知識(shí)、能力上取得更大進(jìn)步,在紀(jì)律上以身作則,力求從各方面給全班起到模范帶頭作用,亦即以點(diǎn)帶面;其三,培養(yǎng)*部團(tuán)結(jié)協(xié)作的精神,要能夠通過(guò)*部這個(gè)小集體建立正確、健全的輿論,帶動(dòng)整個(gè)班集體開(kāi)展批評(píng)與自我批評(píng),形成集體的組織性、紀(jì)律性和進(jìn)取心,亦即以面帶面。三、以強(qiáng)化常規(guī)訓(xùn)練帶動(dòng)教育教學(xué)工作。良好的常規(guī)是進(jìn)行正常的學(xué)習(xí)和生活的保障,一個(gè)學(xué)生調(diào)皮搗蛋、不合常規(guī)的舉動(dòng)往

44、往會(huì)使一堂好課留下遺憾,使整個(gè)集體活動(dòng)宣告失敗,甚至使全班努力爭(zhēng)取的榮譽(yù)付諸東流,直接影響到班集體的利益。因此,要扎實(shí)有效地加強(qiáng)一個(gè)學(xué)生的常規(guī)訓(xùn)練。訓(xùn)練的內(nèi)容包括小學(xué)生守則和小學(xué)生日常行為規(guī)范要求的常規(guī)、課堂常規(guī)、集會(huì)和出操常規(guī)、衛(wèi)生常規(guī)、勞動(dòng)常規(guī)、參觀常規(guī)以及路隊(duì)常規(guī)等等諸多方面。訓(xùn)練可以通過(guò)集體或個(gè)人、單項(xiàng)強(qiáng)化或全面優(yōu)化相結(jié)合的方式進(jìn)行(根據(jù)具體情況選擇),務(wù)必使每個(gè)學(xué)生具有服從集體,服從命令的思想.本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第五篇:大學(xué)班主任工作總結(jié)見(jiàn)習(xí)期剛滿的我,回顧這一年的工作,除了代理團(tuán)委書(shū)記一職外,另外很重要的一部分工作就是擔(dān)任班主任。我當(dāng)任的

45、是2000級(jí)英教及2001級(jí)0103、0104班的班主任。以下我分別將兩個(gè)專(zhuān)業(yè)的班級(jí)工作進(jìn)行總結(jié)。2000級(jí)英教專(zhuān)業(yè)兩個(gè)班情況比較好。他們已經(jīng)基本適應(yīng)大學(xué)生活,兩個(gè)班班委工作認(rèn)真負(fù)責(zé),能起到核心帶頭作用,與我也保持著密切聯(lián)系,作好了橋梁工作。因此,兩個(gè)班取得了不少成績(jī):2001班在今年被評(píng)為優(yōu)秀班集體。班上有2/3的同學(xué)參加了黨校學(xué)習(xí),并都以優(yōu)異的成績(jī)結(jié)業(yè)。其中有一名同學(xué)被發(fā)展為預(yù)備黨員。該班學(xué)風(fēng)濃厚,平時(shí)堅(jiān)持早讀,在期末考試中無(wú)一人重修。在英語(yǔ)劇比賽中,該班也獲得了二等獎(jiǎng)的好成績(jī)。2002班在去年也被評(píng)為了紅旗團(tuán)支部。該班也是積極要求進(jìn)步。全班33人,有22人向黨組織遞交了入黨申請(qǐng)書(shū),形成一

46、股“一顆紅星向著黨”的良好精神面貌。團(tuán)支部認(rèn)真負(fù)責(zé),組織開(kāi)展了以“揭批”為中心的團(tuán)支部會(huì)議,使同學(xué)們對(duì)邪教有了清醒地認(rèn)識(shí)。李國(guó)宏同學(xué)雖然曾經(jīng)犯過(guò)錯(cuò)誤,但在班上同學(xué)的幫助下,勇于改正,并且一次意外中舍己救人,為外語(yǔ)學(xué)院爭(zhēng)了光。該班另一特色就是活躍,能全面發(fā)展。在冬季長(zhǎng)跑中,報(bào)名踴躍,最后有7人參加。在“十大歌星”比賽中,有兩人獲獎(jiǎng)。“十大笑星”中,該班節(jié)目代表外語(yǔ)學(xué)院參賽,獲得第一名的好成績(jī)。作為班主任能看到這樣的班級(jí)成績(jī)感到非常欣慰與驕傲。下學(xué)期他們將進(jìn)入大三,班委要改選,我希望能有跟多的同學(xué)得到鍛煉。我?guī)У牧硗鈨蓚€(gè)班與他們形成對(duì)比,大一的0103、0104總的情況另我擔(dān)憂。先談?wù)劜蛔惆?,總?/p>

47、有以下幾點(diǎn).本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第六篇:差班班主任工作總結(jié)擔(dān)任八所中學(xué)初一年級(jí)(6)班的班主任一年了,在與孩子們接觸打交道的這一年中,有苦有淚,有歡笑也有悲痛,更有些許成功也有些許遺憾!現(xiàn)我對(duì)這一年的班主任工作作出如下總結(jié):一班風(fēng)管理俗話說(shuō):一個(gè)班的班風(fēng)猶如這個(gè)班的班主任的性格特點(diǎn)。我是一個(gè)比較“苛刻”的人,對(duì)人對(duì)事都極度的講究“完美”。在管理班級(jí)的時(shí)候,我是以“軍隊(duì)化”的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)進(jìn)行的。一個(gè)學(xué)生,如果能夠約束自己,并能夠服從管理、聽(tīng)從指揮,我想,這個(gè)學(xué)生就達(dá)到了自我的升華。1.學(xué)生的品德一個(gè)班級(jí)的優(yōu)秀與否,表現(xiàn)在每位學(xué)生品德的優(yōu)劣上面。我們班一共有87

48、個(gè)人,男生59個(gè),女生28個(gè),其中少數(shù)民族生共有6人,從下面鄉(xiāng)鎮(zhèn)上來(lái)的學(xué)生占了本班人數(shù)的78。無(wú)論是從下面鄉(xiāng)鎮(zhèn)上來(lái)的學(xué)生還是在市內(nèi)的學(xué)生,幾乎每個(gè)學(xué)生的品德思想多多少少都存在著個(gè)體的差異性。概括來(lái)講,從下面鄉(xiāng)鎮(zhèn)上來(lái)的學(xué)生普遍會(huì)在心理及思想上認(rèn)為自己是從農(nóng)村來(lái)的,無(wú)論是學(xué)習(xí)還是見(jiàn)識(shí)方面都不如城市的孩子,難免會(huì)產(chǎn)生自卑的心理;城市的孩子則會(huì)認(rèn)為自己比從農(nóng)村上來(lái)的孩子優(yōu)秀很多,甚至有瞧不起人的這種不良心態(tài);還有這兩類(lèi)孩子之間會(huì)進(jìn)行物質(zhì)上的攀比。這些品德思想上的認(rèn)識(shí)多多少少都影響了一個(gè)班級(jí)的凝聚力,也影響了個(gè)人的品德素養(yǎng)!面對(duì)這些問(wèn)題,我主要采用“鼓勵(lì)限制”的方法。鼓勵(lì)具有自卑心理的學(xué)生向精神方面看齊

49、;鼓勵(lì)具有攀比之心的學(xué)生也向精神方面看齊!同時(shí)限制家庭條件好的同學(xué)要特別注意學(xué)校的規(guī)章制度,不能帶手機(jī)、帶MP3和MP4進(jìn)入教室的,堅(jiān)決不能讓他們帶入!當(dāng)然,在學(xué)生們交往接觸的過(guò)程中,難免也會(huì)發(fā)生矛盾,主要體現(xiàn)在吵架和打架這兩大方面上。對(duì)于如何避免這些沖突,我堅(jiān)持的原則是寬以待人。如果學(xué)生之間發(fā)生沖突了,我會(huì)找他們了解情況,無(wú)論是誰(shuí)對(duì)是誰(shuí)錯(cuò),都要讓他們站在對(duì)方的角度去進(jìn)行思考:換成是我,我能不能這樣做?讓他們學(xué)會(huì)寬以待人,避免下次再發(fā)生矛盾沖突。2.學(xué)生的考勤著名教師魏書(shū)生說(shuō)過(guò)一句話:學(xué)生能做的事學(xué)生自己做!學(xué)生的考勤情況,我是這么進(jìn)行管理的:各個(gè)組長(zhǎng)負(fù)責(zé)各組成員的遲到、曠課以及課堂紀(jì)律的考勤

50、;紀(jì)律委員負(fù)責(zé)對(duì)每個(gè)組長(zhǎng)的紀(jì)律考勤;副班長(zhǎng)監(jiān)督紀(jì)律委員的紀(jì)律考勤;正班長(zhǎng)對(duì)副班長(zhǎng)的紀(jì)律進(jìn)行考勤。不管是身為普通身份的學(xué)生,還是身處“要職”的班干部,如果出現(xiàn)亂子,我都會(huì)找該負(fù)責(zé)人進(jìn)行對(duì)話,及時(shí)地進(jìn)行處理。且在合適的時(shí)間,比如說(shuō)每周周一的班會(huì)課上進(jìn)行點(diǎn)名批評(píng),當(dāng)然對(duì)于做得比較好的學(xué)生,也會(huì)進(jìn)行點(diǎn)名表?yè)P(yáng).本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第七篇:幼兒園班主任工作總結(jié)本學(xué)期我班根據(jù)綱要精神,以幼兒園工作計(jì)劃為指導(dǎo),緊緊圍繞學(xué)期計(jì)劃,在班上老師的緊密配合下,有的放矢,循序漸進(jìn)的開(kāi)展班級(jí)各項(xiàng)工作?,F(xiàn)將本學(xué)期主要工作總結(jié)如下:一、教育工作1、“多元化幼兒藝術(shù)教育融化”的嘗試根據(jù)

51、幼兒園及班工作計(jì)劃,我班進(jìn)行了“多元化幼兒藝術(shù)教育融化”的嘗試,并制訂了春雨的色彩、夏天的主題網(wǎng)絡(luò)。在春雨的色彩的主題網(wǎng)絡(luò)中,以文學(xué)作品為切入點(diǎn),以“春”為核心,涉及科學(xué)、社會(huì)、語(yǔ)言、藝術(shù)、健康等領(lǐng)域的各項(xiàng)活動(dòng)。春雨的色彩中還生成了小主題雨,并根據(jù)“雨”進(jìn)行了“雨的形成”、“小雨滴旅行記”、“小雨點(diǎn)”等等的活動(dòng)。在進(jìn)行這些活動(dòng)時(shí),我們注重利用各種資源,合理整合。通過(guò)實(shí)驗(yàn)、圖片、電教設(shè)施來(lái)啟發(fā)幼兒了解有關(guān)雨的知識(shí);或許是因?yàn)橛變耗挲g知識(shí)水平的因素,或許所選知識(shí)涉及過(guò)深,在活動(dòng)進(jìn)行中,發(fā)現(xiàn)效果不理想,沒(méi)有達(dá)到預(yù)定目標(biāo)。因此,在進(jìn)行第二主題網(wǎng)絡(luò)夏天時(shí),我們總結(jié)經(jīng)驗(yàn),反思不足,及時(shí)進(jìn)行調(diào)整。從幼兒生活

52、中選材,以南京教材中找涼快為藍(lán)本進(jìn)行課程整合,而收到了較好的成效。在夏天的主題網(wǎng)絡(luò)中,從小朋友找涼快動(dòng)物找涼快到昆蟲(chóng)的夏眠多種多樣的乘涼工具我發(fā)明的乘涼工具;幼兒參與程度的熱情較上一主題高漲。2、環(huán)境創(chuàng)設(shè)我班幼兒三十九人,性格活潑開(kāi)朗,但個(gè)性鮮明突出。因此,我班在進(jìn)行環(huán)境創(chuàng)設(shè)中能依據(jù)綱要中的精神,結(jié)合本班幼兒實(shí)際情況,有針對(duì)性的創(chuàng)設(shè)各區(qū)域:1、對(duì)個(gè)性霸道、任性的幼兒創(chuàng)設(shè)了“謙讓是美德”角色扮演區(qū)。2、對(duì)愛(ài)表現(xiàn)、外露的幼兒設(shè)置了小舞臺(tái)。3、壁畫(huà)的設(shè)計(jì)及進(jìn)度緊扣教育主題,充分利用家長(zhǎng)資源和幼兒作品.本文來(lái)自公務(wù)員之家,查看正文請(qǐng)使用公務(wù)員之家站內(nèi)搜索查看正文。第八篇:初中班主任工作總結(jié)一個(gè)學(xué)期很快

53、結(jié)束了,在領(lǐng)導(dǎo)和各位老師的關(guān)心和幫助下,順利走過(guò)了一學(xué)期?,F(xiàn)在就把一學(xué)期的工作情況總結(jié)一下。一、我所做的主要工作初三是整個(gè)初中重要的時(shí)期,我深知自己肩負(fù)的責(zé)任重大,不敢有絲毫的怠慢。學(xué)生在心理和生理上都發(fā)生了很大的變化,對(duì)于這一變化,學(xué)生的精神上有更多的壓力,而大多數(shù)的學(xué)生在這個(gè)轉(zhuǎn)折時(shí)期顯得無(wú)所適從。怎樣讓學(xué)生盡快適應(yīng)這一變化,順利度過(guò)轉(zhuǎn)折時(shí)期,這是擺在我眼前的首要任務(wù)。我當(dāng)班主任力爭(zhēng)做到兩點(diǎn):一是尊重每一個(gè)學(xué)生,滿足學(xué)生尊重的需要,承認(rèn)的需要,情感的需要,努力克服固執(zhí)己見(jiàn),偏激的思維方式,尊重學(xué)生個(gè)性發(fā)展,為孩子的成長(zhǎng)創(chuàng)造一個(gè)愉快的心理運(yùn)動(dòng)空間;二是善待每一個(gè)學(xué)生,用真誠(chéng)的愛(ài)心對(duì)待每一個(gè)孩子

54、。對(duì)于優(yōu)等生,不掩飾他們的缺點(diǎn),積極引導(dǎo)他們揚(yáng)長(zhǎng)改過(guò),努力使其達(dá)到卓越。對(duì)于后進(jìn)生,不歧視他們,善于發(fā)現(xiàn)他們身上的閃光點(diǎn),激勵(lì)他們一步一步自我完善。我班的王帥同學(xué)學(xué)習(xí)很差,上課不注意聽(tīng)講,作業(yè)經(jīng)常不交,課上、課下紀(jì)律不能保證,是典型的后進(jìn)生。對(duì)于這樣的孩子如果只是批評(píng)、指責(zé),他的自信心肯定會(huì)越來(lái)越少,甚至還會(huì)自暴自棄。我發(fā)現(xiàn)他的足球踢得不錯(cuò),于是就鼓勵(lì)他,如果你在學(xué)習(xí)上能象踢球那么專(zhuān)注,你的學(xué)習(xí)成績(jī)一定會(huì)取得大進(jìn)步。對(duì)于他身上的每一點(diǎn)進(jìn)步,我都及時(shí)發(fā)現(xiàn),并且及時(shí)予以鼓勵(lì),培養(yǎng)他的自信心。對(duì)于后進(jìn)生,我動(dòng)員學(xué)習(xí)好的同學(xué)幫助他們,帶動(dòng)他們把學(xué)習(xí)成績(jī)提高上去,組成一幫一學(xué)習(xí)互助學(xué)習(xí)小組。這個(gè)班的學(xué)生

55、整體給人的感覺(jué)就是思維活躍,反應(yīng)敏捷,但就是組織紀(jì)律性差,紀(jì)律松散,缺乏自我約束能力。如今的孩子已經(jīng)今非昔比,他們接觸面廣,思維活躍,自尊心強(qiáng),但又有著現(xiàn)代青少年極大的弱點(diǎn)即缺乏勤奮刻苦拼搏的精神,這些都表現(xiàn)在一言一行中。在隊(duì)列隊(duì)行訓(xùn)練中表現(xiàn)尤其明顯。他們自由散漫,在隊(duì)列里有說(shuō)話的、打鬧的,無(wú)精打采,步伐隨便。我向孩子提出要求,從起步到走步,從轉(zhuǎn)體到每一個(gè)動(dòng)作,都給他們提出規(guī)范化的要求,親身示范,身體力行。通過(guò)這些訓(xùn)練,使孩子們體會(huì)到嚴(yán)格有序管理帶來(lái)的效果?,F(xiàn)在的孩子普遍自私,在小事上斤斤計(jì)較,不能寬厚待人。這表現(xiàn)在處理同學(xué)關(guān)系上,同學(xué)之間有了矛盾,出言不遜,動(dòng)輒大打出手,拳腳相加。針對(duì)這一現(xiàn)

56、象,我教育學(xué)生怎樣正確處理同學(xué)關(guān)系,并以此開(kāi)展主題班會(huì),對(duì)學(xué)生進(jìn)行教育。在處理鬧矛盾的學(xué)生時(shí),我讓學(xué)生多做自我批評(píng),在自己身上找不足,以比來(lái)培養(yǎng)學(xué)生寬厚待人的精神,學(xué)會(huì)以寬容和大度之心對(duì)待周?chē)娜?。勞?dòng)更培育學(xué)生德育思想品質(zhì)的機(jī)會(huì)。現(xiàn)在的孩子一提起勞動(dòng)就有厭煩心理,這些獨(dú)生子女平時(shí)干活的機(jī)會(huì)很少,養(yǎng)成了懶惰的習(xí)慣。首先必須得教會(huì)學(xué)生怎樣干活,從掃地到拖地,從擦玻璃到擦墻圍子,我都示范指導(dǎo)并嚴(yán)格檢查,及時(shí)表?yè)P(yáng)做得好的同學(xué),批評(píng)做的不認(rèn)真和逃跑的同學(xué),讓孩子們知道老師不僅在意他們的學(xué)習(xí)更注重他們的人品.大學(xué)生實(shí)習(xí)總結(jié)專(zhuān)題8篇第一篇:大學(xué)生實(shí)習(xí)總結(jié)一、社會(huì)實(shí)踐目的:認(rèn)識(shí)當(dāng)代社會(huì)對(duì)大學(xué)生的要求、及從中

57、找出自己的不足之處、在四年中在這方面加強(qiáng)學(xué)習(xí)。了解一些社會(huì)的其他人如何在努力生活,對(duì)自己以后畢業(yè)找工作有一定的幫助,了解一些就業(yè)崗位需要怎么樣的技能,怎樣的工作、以及我們應(yīng)該如何去做。最主要的就是鍛煉自己,使自己不會(huì)再像以前那么那樣懶惰,讓自己變得堅(jiān)強(qiáng)不再懦弱、學(xué)會(huì)忍受忍受一些不公、學(xué)會(huì)忍受孤獨(dú)!二、實(shí)踐內(nèi)容:在寒假開(kāi)始時(shí)我一回到家就開(kāi)始給家里幫忙,家里在市場(chǎng)批發(fā)蔬菜每天早上6點(diǎn)就要在零下20度的環(huán)境下將自己從別的地方運(yùn)來(lái)的蔬菜進(jìn)行批發(fā)、今年已經(jīng)近20歲了、對(duì)家里的幫助也是很少很少,感覺(jué)慚愧,只是每天早早的去幫忙送菜,這個(gè)實(shí)踐對(duì)自己的專(zhuān)業(yè)知識(shí)倒是沒(méi)有什么運(yùn)用的地方,也許是現(xiàn)在用不上,我是很希望

58、將自己所學(xué)的運(yùn)用到工作使自己所學(xué)的不至于一無(wú)用處!但現(xiàn)在這種機(jī)會(huì)是少之又少。以前只要是星期天、假期都會(huì)給家里幫忙這只是對(duì)自己的小鍛煉、在大學(xué)校園中也許是舒服貫了變得無(wú)所事事、現(xiàn)在早上早起感覺(jué)這么的困難這在以前是怎么也不會(huì)出現(xiàn)的事情,這個(gè)假期這個(gè)毛病也有了少許的改變、呵這就是所謂的成績(jī)、我從小就希望自己長(zhǎng)大能去做自己喜歡的生意、通過(guò)給家里好幾年的批發(fā)零售我看到也許做生意會(huì)很枯燥、乏味、但是能忍受這種孤獨(dú)、乏味并在其中創(chuàng)造出成績(jī)的我認(rèn)為這就是成功的,這便是生活的意義所在。三、實(shí)踐結(jié)果:回嘉峪關(guān)在家中的這幾日雖不比在學(xué)校的安逸但是也讓自己成長(zhǎng)了少許、通過(guò)寒假的幫忙的幫忙發(fā)現(xiàn)自己的人際交往能力還是很弱,這是以后必須解決的問(wèn)題、使自己變得無(wú)所畏懼。在

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