臨床細(xì)菌培養(yǎng)鑒定流程及報(bào)告.ppt

1、a,1,臨床細(xì)菌培養(yǎng)鑒定常規(guī)報(bào)告流程,a,2,思考題,1、血培養(yǎng)陽(yáng)性結(jié)果如何分級(jí)報(bào)告？ 2、如何根據(jù)尿液菌落計(jì)數(shù)分析尿培養(yǎng)結(jié)果是感染還是污染？,a,3,醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室基本條件及設(shè)備 醫(yī)學(xué)微生物學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù) 臨床各種標(biāo)本的采集、分離培養(yǎng)及報(bào)告方式 臨床常見(jiàn)細(xì)菌的分離鑒定,a,4,一、醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室基本條件及設(shè)備,細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室 無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室 基本設(shè)備,a,5,細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室,細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室是細(xì)菌檢驗(yàn)的場(chǎng)所，在此完成標(biāo)本接種、孵育、分離、細(xì)菌鑒定和藥物敏感試驗(yàn)。所以細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室必須具備空氣及桌面消毒的條件，確保室內(nèi)相對(duì)無(wú)菌。如：足夠強(qiáng)度的紫外線燈管，耐酸堿的桌面等。,a,6,無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室,無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室僅限于制

2、備、分裝無(wú)菌培養(yǎng)基的操作，不進(jìn)行有菌標(biāo)本的分離及其它操作。無(wú)菌室應(yīng)達(dá)到絕對(duì)無(wú)菌的標(biāo)準(zhǔn)，使用的前后均應(yīng)嚴(yán)格消毒滅菌（一般均為紫外線照射），僅限操作人員進(jìn)入，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格關(guān)門。,a,7,基本設(shè)備,生物安全柜 孵育溫箱（有條件的要有二氧化碳培養(yǎng)箱） 顯微鏡 接種器具 冰箱、冰柜 高壓滅菌設(shè)備 火焰燈,a,8,二、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)檢驗(yàn)的基本技術(shù),基本染色 基本接種方法,a,9,基本染色,主要用于形態(tài)學(xué)檢查，因?yàn)樾螒B(tài)學(xué)檢查是鑒定細(xì)菌的重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒別，也是決定采用何種生化鑒定的重要提示。有時(shí)通過(guò)形態(tài)學(xué)檢查可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖器官分泌物中的淋病柰瑟菌等，染色方法主要有革蘭氏

3、染色法，抗酸染色法，鞭毛染色法，異染顆粒染色法，墨汁莢膜染色法等。,a,10,基本接種方法,曲線劃線法（又稱連續(xù)劃線法）、分區(qū)劃線法、棋盤格劃線法、傾注平板法、斜面接種法、穿刺培養(yǎng)法、液體培養(yǎng)基接種法等。,a,11,三、臨床各種標(biāo)本的采集、分離培養(yǎng)及報(bào)告方式,血（適用胸腹水） 痰 尿 便 膿,a,12,（一） 血 當(dāng)微生物侵入血液迅速繁殖超出免疫系統(tǒng)清除這些微生物的能力時(shí)形成菌血癥或真菌血癥。 1.血培養(yǎng)中常見(jiàn)的分離菌,革蘭氏陽(yáng)性菌 金黃色葡萄球菌 凝固酶陰性葡萄球菌 肺炎鏈球菌 A群B群鏈球菌 腸球菌,革蘭氏陰性菌 大腸桿菌 肺炎克雷伯菌 陰溝腸桿菌 產(chǎn)氣腸桿菌 傷寒沙門菌 綠膿桿菌 鮑曼不

4、動(dòng)桿菌,a,13,2. 標(biāo)本的采集與運(yùn)送 采血指征 一般患者出現(xiàn)以下體癥時(shí)可作為采血的重要指征：發(fā)熱（38）或低溫（36 ）、寒戰(zhàn)、白細(xì)胞增多（計(jì)數(shù)10000109/L），特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞，皮膚黏膜出血，昏迷，多器官衰竭，血壓降低，CRP升高及呼吸快，特殊患者（如血液病）出現(xiàn)粒細(xì)胞減少，（成熟的多形核細(xì)胞1000109/L ）血小板減少等，或同時(shí)具備上述幾種體征時(shí)而臨床可疑菌血癥應(yīng)采集血培養(yǎng)。新生兒菌血癥應(yīng)該增加尿液和腦脊液培養(yǎng)。最好在感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前及時(shí)采集血培養(yǎng)。,a,14,采血時(shí)間及采血量 采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行，在24小時(shí)內(nèi)采集2

5、3份血培養(yǎng)（一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單份血培養(yǎng)）。對(duì)間歇性寒戰(zhàn)或發(fā)熱應(yīng)在寒戰(zhàn)或體溫高峰到來(lái)之前0.51小時(shí)，采集血液，或于寒戰(zhàn)或發(fā)熱后1小時(shí)進(jìn)行。成人采血量810ml，兒童15ml。血液和肉湯之比1：5 1：10。,a,15,標(biāo)本運(yùn)送 采血后應(yīng)立即送檢，如不能立即送檢，需室溫保存或置3537孵箱中，切勿冷藏。自動(dòng)化連續(xù)檢測(cè)系統(tǒng)雖有允許延遲上機(jī)檢測(cè)微生物生長(zhǎng)的原理，還是應(yīng)該盡量減少延遲上機(jī)時(shí)間。,a,16,3.分離培養(yǎng),血培養(yǎng)操作過(guò)程中應(yīng)注意生物安全防護(hù)。 血培養(yǎng)瓶處理 傳統(tǒng)手工法血培養(yǎng)每天至少檢查一次，注意微生物生長(zhǎng)可視信號(hào)，應(yīng)無(wú)菌抽取培養(yǎng)物，涂片革蘭氏染色，選擇合適的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)種，

6、同時(shí)做藥敏試驗(yàn)。 培養(yǎng)基的選擇 一般革蘭氏陽(yáng)性菌選血瓊脂，革蘭氏陰性球菌選血瓊脂、巧克力瓊脂，革蘭氏陰性桿菌再加一個(gè)中國(guó)蘭或麥康凱培養(yǎng)基，真菌需轉(zhuǎn)種于真菌培養(yǎng)基。根據(jù)生長(zhǎng)情況，挑取純菌落進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。,a,17,4.結(jié)果報(bào)告 陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告 初級(jí)報(bào)告：陽(yáng)性血培養(yǎng)結(jié)果非常重要，應(yīng)該立即口頭報(bào)告給醫(yī)生，包括革蘭氏染色特性和形態(tài)，疑似何種菌等。同時(shí)記錄報(bào)告日期、時(shí)間、內(nèi)容以及接受報(bào)告人的姓名。 中級(jí)報(bào)告：報(bào)告直接抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果和細(xì)菌種屬的初步鑒定結(jié)果。 最終報(bào)告：報(bào)告細(xì)菌種屬名和標(biāo)準(zhǔn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果。 陰性結(jié)果報(bào)告 普通血培養(yǎng)3天無(wú)菌生長(zhǎng)可報(bào)告為“72小時(shí)培養(yǎng)未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)”但培養(yǎng)瓶要繼續(xù)培

7、養(yǎng)至7天，如果發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，可發(fā)補(bǔ)充報(bào)告，某些特殊致病菌培養(yǎng)時(shí)間需延長(zhǎng)。,a,18,（二）痰（即下呼吸道感染標(biāo)本） 臨床通常將正常人喉以上部位稱為上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而氣管以下包括氣管、支氣管和肺泡稱下呼吸道，通常無(wú)菌。下呼吸道感染包括急性氣管支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作，支氣管擴(kuò)張繼發(fā)感染及肺實(shí)質(zhì)感染（肺炎、肺膿腫）等。病原體有細(xì)菌、病毒、衣原體、支原體、真菌、立克次氏體和原蟲等。 下呼吸道感染者可有發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，是下呼吸道感染細(xì)菌檢查的主要標(biāo)本。細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)?zāi)苊鞔_感染病原，并提供有關(guān)抗菌藥物對(duì)分離菌的抗菌活性，有助于疾病的治療、流行病學(xué)調(diào)查研究

8、和醫(yī)院感染的監(jiān)測(cè)。,a,19,1.呼吸道標(biāo)本(痰)中常見(jiàn)的分離細(xì)菌,革蘭氏陽(yáng)性菌 草綠色鏈球菌，肺炎鏈球菌，化膿性鏈球菌 表皮葡萄球菌 ,金黃色葡萄球菌,其他葡萄球菌 微球菌，消化鏈球菌，消化球菌 腸球菌 真桿菌，丙酸桿菌，乳酸桿菌 放線菌，奴卡苗，結(jié)核分枝桿菌 白喉棒狀桿菌，類白喉棒狀桿菌 念珠菌,革蘭氏陰性菌 韋榮球菌 腦膜炎奈瑟菌，其他奈瑟菌 卡他莫拉菌 肺炎克雷伯菌及其他克雷伯菌 沙雷菌，變形桿菌 大腸埃希氏菌及其他腸桿菌科細(xì)菌 百日咳鮑特菌，不動(dòng)桿菌 銅綠假單胞菌及其他假單胞菌屬細(xì)菌 嗜肺軍團(tuán)菌，氣單胞菌 流感嗜血桿菌，付流感嗜血桿菌 擬桿菌，梭桿菌,a,20,2.標(biāo)本采集及運(yùn)送 對(duì)

9、可疑烈性呼吸道傳染病(如SARS，肺炭疽，肺鼠疫等)的患者采集痰標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。 自然咳痰法（最常用的方法）：以晨痰為佳，采集標(biāo)本前應(yīng)用清水、冷開水漱口或牙刷清潔口腔和牙齒。盡可能在使用抗菌藥物之前采集標(biāo)本，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無(wú)菌、清潔、干燥、不滲漏、不吸水的廣口帶蓋的容器中，標(biāo)本量要1ml。標(biāo)本要盡快送檢，不能及時(shí)送檢的標(biāo)本室溫保存2小時(shí)。,a,21,支氣管鏡采集法、防污染毛刷采集法、環(huán)甲膜穿刺經(jīng)氣管吸引法、經(jīng)胸壁針穿刺吸引法和支氣管肺泡灌洗法，均由臨床醫(yī)生按照相應(yīng)操作規(guī)程采集，但必須注意所采集標(biāo)本盡可能避免咽喉部正常菌群的污染。 小兒取痰法：用彎壓舌板向后壓舌

10、，將拭子伸入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部或氣管分泌物粘在拭子上送檢。,a,22,分離培養(yǎng) (1) 痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理：不含或粘液很少的標(biāo)本可直接接種，遇有含大量粘液的標(biāo)本，應(yīng)加入等量的液化劑（如PH7.6的10g/L胰酶溶液等），放置35待充分液化再行接種 。亦可加液化劑后攪拌混勻離心，取沉淀物接種。 一般細(xì)菌分離培養(yǎng)：將處理后的痰標(biāo)本分別劃區(qū)接種于血平板(適用于分離肺炎鏈球菌和其他細(xì)菌),巧克力平板(適用于分離嗜血桿菌)和麥康凱/中國(guó)蘭平板。巧克力平板需置5%二氧化碳環(huán)境（無(wú)二氧化碳培養(yǎng)箱可用燭缸），35 培養(yǎng)24小時(shí)后觀察菌落形態(tài)，涂片染色，挑取可疑純菌落，做進(jìn)一步鑒定。,a,23

11、,結(jié)果分析及報(bào)告 結(jié)果分析 痰及下呼吸道分泌物標(biāo)本易受到定植在上呼吸道的正常菌群污染。當(dāng)從送檢標(biāo)本中分離出多種細(xì)菌時(shí)，確定那一種分離細(xì)菌是引起下呼吸道感染的病原菌，這對(duì)臨床診斷與治療至關(guān)重要。當(dāng)在同一培養(yǎng)基上分離出1種以上的病原菌（復(fù)合菌）時(shí)，要結(jié)合患者的臨床癥狀，涂片染色鏡檢情況及患者近期細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果等，綜合判斷所分離的多種細(xì)菌中那一種細(xì)菌可能為致病菌，通常多為優(yōu)勢(shì)菌。當(dāng)分離的優(yōu)勢(shì)菌與涂片染色鏡檢結(jié)果一致時(shí)，要做藥敏試驗(yàn)。若分離培養(yǎng)結(jié)果與涂片染色鏡檢結(jié)果不一致時(shí)，可不進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，以免誤導(dǎo)，僅報(bào)告分離鑒定結(jié)果，由臨床大夫定奪是否重試。,a,24,報(bào)告方式 由于檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告的時(shí)效性，下呼吸

12、道標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果分為初步和最終結(jié)果報(bào)告。 初步報(bào)告：當(dāng)標(biāo)本涂片革蘭氏染色細(xì)胞學(xué)和細(xì)菌學(xué)鏡檢發(fā)現(xiàn)有臨床診斷意義的結(jié)果時(shí)，應(yīng)及時(shí)發(fā)出描述性的初步報(bào)告。 最終報(bào)告：鏡檢結(jié)果與分離培養(yǎng)結(jié)果相一致時(shí)，最終報(bào)告規(guī)范的細(xì)菌名稱和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。若分離培養(yǎng)結(jié)果與鏡檢結(jié)果不一致時(shí)，僅報(bào)告分離鑒定結(jié)果，不做藥敏試驗(yàn)。若分離培養(yǎng)未檢出優(yōu)勢(shì)菌，可報(bào)“未培養(yǎng)出病原菌”。,a,25,(三) 尿 尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。從腎臟排泌出來(lái)的尿液正常情況下是無(wú)菌的，如果在尿液中分離出細(xì)菌（排除污染因素）即為菌尿，同時(shí)伴有感染癥狀者稱為尿路感染。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（腎盂腎炎）及下尿路感染（膀

13、胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺炎。,a,26,1.尿中常見(jiàn)分離菌,革蘭氏陽(yáng)性菌 金黃色葡萄球菌 血漿凝固酶陰性葡萄球菌 腸球菌 A群鏈球菌 結(jié)核分支桿菌 念珠菌,革蘭陰性菌 大腸埃希菌 克雷伯菌屬 變形桿菌屬 淋病奈瑟氏菌 腸桿菌屬 假單胞菌屬 羅威登菌屬 沙雷菌屬 不動(dòng)桿菌屬 假單胞菌屬,a,27, 標(biāo)本的采集與運(yùn)送 尿培養(yǎng)檢查的臨床指征(有下列情況之一者，應(yīng)進(jìn)行尿培養(yǎng)） a.有典型的尿路感染癥狀 b.有肉眼膿尿或血尿 c.尿常規(guī)白細(xì)胞和/或亞硝酸鹽陽(yáng)性 d.不明原因的發(fā)熱而無(wú)其他局部癥狀 e.留置導(dǎo)尿管的病人出現(xiàn)發(fā)熱 f.膀胱排空功能受損 g.泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前,a,28,(2)標(biāo)本采集 a.

14、清潔中段尿 最好是晨尿，是臨床上最常留取尿標(biāo)本的方法 b.恥骨上膀胱穿刺法 是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)” c.直接導(dǎo)尿法 d.小兒收集包 e.留置導(dǎo)尿,a,29,(3)標(biāo)本運(yùn)送 標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢， 2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行接種，否則應(yīng)置48冰箱保存，冷藏保存標(biāo)本時(shí)間不得超過(guò)8小時(shí)。,a,30,3分離培養(yǎng) 一般培養(yǎng): 用定量接種環(huán)或無(wú)菌微量加樣器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用抗生素患者),接種于血平板和麥康凱/中國(guó)蘭平板,不能定量時(shí)需用傾碟法記數(shù)，3537培養(yǎng)1824小時(shí)。 (2)特殊培養(yǎng): 對(duì)臨床要求真菌、淋病奈瑟菌及結(jié)核菌等培養(yǎng)者，根據(jù)細(xì)菌所需條件接種相應(yīng)特殊培養(yǎng)基，放置相應(yīng)條件下進(jìn)

15、行培養(yǎng)。,a,31,4結(jié)果分析及報(bào)告 結(jié)果分析: 一般單種細(xì)菌菌落數(shù)105cfu/ml可能為感染，需要進(jìn)一步鑒定和做藥敏試驗(yàn)；104cfu/ml可能為污染；在兩者之間需要根據(jù)病人的臨床表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)估。對(duì)于導(dǎo)尿標(biāo)本103cfu/ml即為感染；恥骨上膀胱穿刺標(biāo)本任意數(shù)目即為感染，均需進(jìn)一步鑒定和做藥敏試驗(yàn)。,a,32,(2)報(bào)告方式 初步報(bào)告：在分離出細(xì)菌后，進(jìn)行革蘭氏染色，作出初步報(bào)告。 最終報(bào)告：有意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告，應(yīng)報(bào)告菌落計(jì)數(shù)、細(xì)菌種名及藥敏結(jié)果。 無(wú)意義的陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告，報(bào)告菌落數(shù)、革蘭氏染色形態(tài)特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)。 陰性結(jié)果報(bào)告:應(yīng)報(bào)告無(wú)菌生長(zhǎng)和菌落計(jì)數(shù)1000cfu/m

16、l或 100cfu/ml尿。,a,33,（四）糞便 急性感染性腹瀉可以由細(xì)菌、病毒及原蟲引起，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查是細(xì)菌培養(yǎng)。每種感染性腹瀉的致病菌因其獨(dú)特的致病機(jī)理而引起一系列不同的典型癥狀，這些癥狀和詳細(xì)的病史能為診斷腹瀉疾病類型提供依據(jù)。因此，為了查找腹瀉病因，必須了解患者的病史即：癥狀、發(fā)病時(shí)間、年齡、旅游史、進(jìn)食情況和使用抗菌素情況。,a,34,致病菌能夠破壞宿主的防御系統(tǒng)，其致病機(jī)理是細(xì)菌產(chǎn)生毒素和對(duì)人體組織的侵襲性，值得注意的是有些細(xì)菌既具有侵襲性又能產(chǎn)生毒素?？股刂委熆梢云茐乃拗鞯恼＞?，導(dǎo)致某些細(xì)菌如艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和念珠菌等過(guò)度生長(zhǎng)，也可引起腹瀉。沙門氏

17、菌、志賀氏菌、氣單胞菌和鄰單胞菌應(yīng)作為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)培養(yǎng)的主要腹瀉病原菌。,a,35,糞便標(biāo)本中常見(jiàn)的病原菌 革蘭氏陽(yáng)性菌 革蘭氏陰性菌 金黃色葡萄球菌 傷寒及其他沙門菌 厭氧鏈球菌種 志賀菌屬 結(jié)核分枝桿菌 致病大暢埃希菌 產(chǎn)氣莢膜梭菌 弧菌屬菌種 艱難梭菌 氣單胞菌和鄰單胞菌 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 彎曲菌,a,36,2標(biāo)本的采集與運(yùn)送 糞便培養(yǎng)檢查的送檢指征(出現(xiàn)以下任何一種情況時(shí)建議做糞便培養(yǎng)) a.糞便涂片鏡檢白細(xì)胞5/HP b.重癥腹瀉 c.體溫38.5 d.血便 e.便中有膿液 f.未經(jīng)抗菌藥物治療的持續(xù)性腹瀉患者 g.來(lái)自疫區(qū)的患者,a,37,(2)標(biāo)本采集 a.標(biāo)本采集盡可能在發(fā)病早

18、期和使用抗菌藥物治療之前 b.自然排便采集糞便標(biāo)本時(shí)，取有膿血、粘液、組織碎片部分的糞便，液體糞便則取絮狀物 c.直腸拭子采集糞便標(biāo)本，適用于排便困難患者和嬰幼兒,a,38,標(biāo)本運(yùn)送 a.糞便標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，室溫條件下不能超過(guò)2小時(shí)。如不能及時(shí)送檢，可加入pH7.0的磷酸甘油或轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基，但不易超過(guò)24小時(shí) b.直腸拭子采集的標(biāo)本必須置于適當(dāng)?shù)倪\(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)，轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間不宜超過(guò)2小時(shí) c.高度懷疑霍亂弧菌感染的標(biāo)本運(yùn)送必須符合特殊標(biāo)本的安全要求,a,39,3. 分離培養(yǎng)與鏡檢 糞便標(biāo)本直接鏡檢找到大量多核白細(xì)胞，提示侵襲性致病菌感染。如果腸道菌群紊亂，革蘭氏染色鏡檢結(jié)果可以提示是酵母菌還是葡萄球菌

19、感染。,a,40,腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng) 腹瀉病原菌種類繁多,實(shí)驗(yàn)室不可能對(duì)所有可能引起腹瀉的病原菌都進(jìn)行培養(yǎng)。為保證獲得較高的檢出率,可以對(duì)患者進(jìn)行腹瀉病原菌常規(guī)培養(yǎng),包括沙門氏菌、志賀氏菌、氣單胞菌、鄰單胞菌、弧菌，也包括可引起菌群失調(diào)的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和酵母菌。糞便標(biāo)本至少接種SS、中國(guó)蘭等培養(yǎng)基，必要時(shí)加血平板，培養(yǎng)1824小時(shí)觀察結(jié)果。,a,41,(2)腹瀉病原菌特殊培養(yǎng) 根據(jù)所疑病原菌的生長(zhǎng)要求,選擇合適的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行分離培養(yǎng)鑒定。,a,42,4結(jié)果分析及報(bào)告 陽(yáng)性結(jié)果：報(bào)告細(xì)菌種名和藥敏結(jié)果 陰性結(jié)果：常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)陰性應(yīng)報(bào)告“未檢出常規(guī)培養(yǎng)病原菌” 特殊細(xì)菌培養(yǎng)陰性應(yīng)報(bào)

20、告“相應(yīng)細(xì)菌陰 性篩選結(jié)果”,a,43,（五） 膿汁（病灶分泌物） 微生物存在于周圍環(huán)鏡中，也存在于皮膚、粘膜表面，它們通過(guò)破損的皮膚或粘膜進(jìn)入通常無(wú)菌的組織引起感染，在一個(gè)或多個(gè)解剖部位形成小膿庖或包裹性膿腫。細(xì)菌和真菌（條件致病菌或致病菌）都可導(dǎo)致炎性滲出，滲出物由白細(xì)胞、入侵病原體、體液及纖維蛋白混合組成，即：膿汁。病毒感染很少出現(xiàn)膿性分泌物。,a,44,1膿汁（含創(chuàng)傷分泌物）中常見(jiàn)的病原菌 革蘭氏陽(yáng)性菌 革蘭氏陰性菌 葡萄球菌 腸桿菌科細(xì)菌 鏈球菌 假單胞菌 消化鏈球菌 腐敗謝瓦納拉菌 炭疽芽胞桿菌 擬桿菌 破傷風(fēng)芽胞梭菌 梭桿菌 產(chǎn)氣莢膜梭菌 嗜血桿菌 潰瘍棒狀桿菌 產(chǎn)堿桿菌 結(jié)核分

21、枝桿菌 無(wú)色桿菌 放線菌、奴卡菌 弧菌屬細(xì)菌 念珠菌 氣單胞菌,a,45,2標(biāo)本采集與運(yùn)送 標(biāo)本采集與運(yùn)送 膿腫包括閉合和開放性，即感染傷口、穿透?jìng)凇⑿g(shù)后傷口、燒傷及褥瘡等。在采集膿汁標(biāo)本前，用無(wú)菌生理鹽水擦去表面分泌物以避免污染。開放性傷口盡量抽吸深部膿液，閉合性膿腫抽吸膿腫壁。若需要厭氧培養(yǎng)，最好進(jìn)行床前接種迅速放入?yún)捬醮鼮楹谩?(2)標(biāo)本運(yùn)送 膿汁或厭氧袋，室溫下2小時(shí)內(nèi)，最長(zhǎng)不超過(guò)24小時(shí)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。,a,46,3分離培養(yǎng)與鏡檢 膿汁標(biāo)本在培養(yǎng)的同時(shí)應(yīng)涂片做革蘭氏染色鏡檢，特殊情況或醫(yī)生要求，需行直接鏡檢及抗酸染色鏡檢。革蘭氏染色鏡檢有助于確定培養(yǎng)檢查范圍，評(píng)價(jià)標(biāo)本質(zhì)量。若見(jiàn)大量上皮

22、細(xì)胞，則很可能為表皮污染，此時(shí)生長(zhǎng)的菌落意義較??；大量多形核白細(xì)胞或吞噬細(xì)胞則提示有感染存在。,a,47,根據(jù)鏡檢檢查結(jié)果和/或感染部位，選擇接種合適的培養(yǎng)基。所有膿汁或滲出液標(biāo)本應(yīng)至少接種三種培養(yǎng)基。 營(yíng)養(yǎng)血瓊脂培養(yǎng)基：分離葡萄球菌及鏈球菌等。有條件最好置含510%二氧化碳環(huán)境中，3537孵育至少48小時(shí)。 (2)選擇培養(yǎng)基（麥康凱或伊紅美藍(lán)瓊脂等）：分離革蘭氏陰性桿菌。3537孵育至少48小時(shí)。 營(yíng)養(yǎng)肉湯管：如巰基乙酸鹽肉湯或庖肉培養(yǎng)基，供需氧菌及厭氧菌生長(zhǎng)，3537孵育，至少培養(yǎng)10天。,a,48,4結(jié)果分析及報(bào)告 陰性結(jié)果：培養(yǎng)48小時(shí)后，平皿和肉湯均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告“48小時(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)”。特殊原因，培養(yǎng)基放置更長(zhǎng)時(shí)間仍無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告為“X天無(wú)菌生長(zhǎng)”。 陽(yáng)性結(jié)果：根據(jù)鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告。,a,49,四、 臨床常見(jiàn)細(xì)菌的分離鑒定 1形態(tài)與培養(yǎng)特性 革蘭氏染色：在生長(zhǎng)有細(xì)菌的平皿上挑取可疑病原菌純菌落涂片,革蘭氏染色,在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)特征：球狀、桿狀、弧狀等，識(shí)別是革蘭氏陽(yáng)性還是革蘭氏陰性菌，確定下一步的鑒定路線。 (2)氧化酶試驗(yàn)：對(duì)革蘭氏陰性桿菌，首先要做氧化