臨床生物化學課件模板-042(共95)

1、臨床生物化學課件模板- 42，臨床生物化學 :二，采樣時間，二，采樣時間：TDM工作中的采樣時間對其測量結果的臨床價值有很大影響，是開展TDM工作必須考慮的基本問題。 根據TDM的目的和患者的具體情況，應用本章第二節(jié)介紹的藥代動力學理論，應根據以下原則確定采樣時間。 (1)為了計算個體的藥動學模型和參考，只能在兩點確定唯一的直線，這種情況下，血藥濃度測定的誤差、采樣時間是否合適對藥動學參數有明顯的影響。臨床生物化學 :二、采樣時間、二、采樣時間：血管外用藥和多室模型馀數法求藥代動力學參數時，假設時間t足夠大，解相方程式的計算可以不考慮吸收相和分布相的影響。 因此，采樣時間的選定應遵循以下兩個原

2、則：在與血藥濃度隨時間變化有關的指數方程式中，各指數項的采樣必須少于3點，即，各相的直線方程式的確定至少在3點以上，另外，在藥時曲線中，在轉折點附近至少為了更準確地判明轉折點去除相采樣時間盡可能長，時間寬度至少超過了兩個半壽命。臨床生物化學 :二、采樣時間、二、采樣時間：在實際工作中，可以根據上述原則，結合與藥物有關的集體藥代動力學模型和參數資料，具體決定采樣時間。 理想情況下，一次用藥就可以連續(xù)完成所有樣品。 如果條件不被認可，則多藥給藥后的分次抽樣累積法，也就是多藥給藥時，可以參考小組資料，推定達到穩(wěn)定狀態(tài)后，分別給藥后在不同的時間進行抽樣。 如果在采樣期間內各藥代動力學參數不變化，將每次

3、給藥前的血中濃度(Css)min視為零，則可以將這些點累積，并視為在一次給藥間隔時間內的不同時間進行處理。 臨床生物化學、采樣時間、2、采樣時間：此時，每次采樣時間的選定按照上述原則進行。 但是，本方法不可靠，特別是排除半壽命比給藥間隔近的人的話，誤差會變大。 (二)藥品監(jiān)測、調整方案應在達到穩(wěn)定濃度后進行采樣。 定速靜脈滴注時，穩(wěn)定血藥的濃縮幾乎維持在一定的水平，所以在達到穩(wěn)定后，隨時可以進行取樣測定。 多藥間隔給藥時，穩(wěn)態(tài)血藥濃度在一定范圍內變動，為了測定峰值濃度還是谷濃度，應根據臨床的需要決定。 臨床生物化學 :二，采樣時間，二，采樣時間： 4444444444444444航空航空航空在

4、此情況下，如果患者的個人藥代動力學參數已知，請在一個給藥間隔內的到達時間(tp )和下一次給藥前，分別采血、臨床生物化學 :二、采樣時間、二、采樣時間：雙室模型藥物(Css)max必須是去除相開始段。 如果參照患者個人藥動學參數不明，只參考組資料制定的藥品使用方案，大眾資料的平均到達峰值時間tp不一定代表具體的患者的tp。 但是，無論如何，任何藥物、任何身體都會每次給藥(Css)min，因此，在這種情況下，最好僅在給藥前對(Css)min進行采樣測定，根據(Css)min和有效血中濃度范圍，特別是下限的關系來調整給藥量。臨床生物化學 :二、采樣時間、二、采樣時間： 22222222222222

5、652若不知道個體的tp，則分別在與集團tp平均值鄰接前后的時間進行采樣測定，血中濃度是否接近最小中毒濃度(三)急性藥物中毒的診斷和處理應前后及時采樣測定，后者根據臨床需要，必要時采樣，監(jiān)測急救效果。在臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：TDM工作中，除了可以用少數方法將收集的樣品直接應用于測量外，還經常進行必要的預處理。 預處理的目的是以適當的方法盡量減少干擾成分，濃縮純化待測物質，提高檢測的靈敏度和特異性，減少對機器的損害，而不破壞待測藥物的化學結構。 預處理包括脫蛋白、提取和化學誘導化。 (1)脫蛋白TDM常用的血清(漿)、唾液和尿等含有或少量蛋白質，妨礙多種測定方法，造成機

6、器的污染損害。臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：脫蛋白的方法有沉淀離心法、色譜法、超濾法和速度離心法等。 其中沉淀離心法最簡便快捷，且可根據提取要求選擇合適的酸、堿和有機溶劑，與提取同步進行，所以最好選擇。 藥物與血漿蛋白質的結合多由離子鍵、氫鍵、VanderWaals引力等弱力形成。 蛋白質變性沉淀同時破壞該結合并釋放藥物，因此用沉淀離心法去除了蛋白質的體液標本，最后測定的藥物濃度是同時包含游離藥物和蛋白質結合的藥物的總濃度。臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：顯然，當需要單獨測定游離藥物濃度時，不能采用該方法，而應采用溫和復雜費時間的色譜、超濾法或速度離心法。 可

7、以去除蛋白質，不會釋放出結合蛋白質的藥。 (二)提取除免疫化學法外，還必須提取TDM中使用的多種檢測方法，以盡可能選擇性地濃縮測定成分，提高檢測靈敏度，改善檢測方法的特異性，減少干擾。 臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：提取方法分為液-液提取和液-固提取兩種。 液-液萃取多為有機化合物，其中弱酸、弱堿較多。 在pH不同的溶液中，會發(fā)生程度不同的解離。 因此，選擇對測定物的溶解度高，即使不與使用的標本混合也不乳化的有機溶劑，根據測定物的酸堿性和pKa、氧化或堿性樣品，使測定物以盡可能高的脂溶性分子狀態(tài)存在，主要分配到有機溶劑中。臨床生物化學、樣本預處理、三、樣本預處理：在此條件下可

8、以排除高極性的噪聲成分。 通過離心分離有機相和水相(樣品)，可以達到萃取的目的。 必要時，可以根據上述原理將待測成分再提到pH的適當水相中，進一步排除高脂溶性的干擾物質。 這種方法被稱為液-液提取，因為樣品和提取介質都是液相的。 液固提取也稱為固相柱提取，是近年來發(fā)展起來的提取方法。 臨床生物化學 :三，樣品預處理，三，樣品預處理：可以根據待測物體的理化性質選擇合適的常壓短柱，TDM中常用的是疏水填充柱。 目標標本(多進行脫蛋白質處理)通過該柱后，用適當強度的溶劑洗提，選擇性地收集含有目標成分的洗提液部分，可以達到理想的提取目的。 也可以用強度不同的溶劑階段性地溶出，僅收集溶出的測定對象成分。

9、 此種提取柱已經有幾種商品化生產，可供選擇。 臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：本方法比液-液提取麻煩，但具有回收率和提取特異性高的優(yōu)點。 (三)化學衍生化反應用分光法和色譜法測定藥物時，可以根據測定對象物的化學結構和測定方法的要求，通過化學衍生化反應特異地導入發(fā)色(可見光分光法)、發(fā)光(紫外、熒光、磷光)基，提高測定的靈敏度和特異性。 氣相色譜法時，對待測物進行甲硅烷化、烷基化、鹵化、?；?，提高待測物的熱穩(wěn)定性和揮發(fā)性，改善分離效果，適用于特殊的檢測器。臨床生物化學 :三、樣品預處理、三、樣品預處理：要用HPLC柱前誘導分離測定手性異構體藥物，需要在對象物中引入手性拆分基。

10、臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：本質上藥物為化學物質，其測定方法均為臨床化學常用技術。 但是，體液中的藥物多以g/ml或ng/ml水平存在，其檢查不僅受到同時存在的多種結構類似的內源性物質的干擾，也受到與原型藥只有很小差異的代謝物質的干擾。 部分藥物的TDM除原型藥外，還需要同時檢查具有藥理活性的代謝物。 另一方面，藥物的有效濃度范圍和中毒水平，結合很多臨床觀察確定，在任何實驗室建立的測定方法都需要較高的比較性。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：以下僅結合藥物測定的特殊要求，對常用臨床化學技術進行評價介紹。 (1)

11、分光法的很多藥物和代謝物本身在紫外光區(qū)域存在吸收峰值，如果一部分藥物和代謝物被激發(fā)，其本身就能發(fā)出熒光，另外，還有能通過分光法檢測特異的顯色反應的藥物。 但是，不論可見光分光光度法、紫外光度法、熒光光度法，用于體液中的藥物檢查時，存在靈敏度低、特異性差的缺點，特別容易被代謝物妨礙。臨床生物化學 :采用第六節(jié)藥物濃度測定常用技術、第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：提取、二波長、示差、導數分光光度法等試圖提高靈敏度和特異性，但根本無法克服上述缺點。 但是，光譜法操作簡單，必要的儀器配備在一般的臨床實驗室，檢測成本低，容易普及。 血藥濃度水平高，用適當的方法改良光譜法滿足臨床需求，成為阿司匹林、對乙酰氨基

12、酚、氨茶堿、苯內鈉、苯巴比妥鈉等目前仍可采用的方法。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：火焰輻射光譜法和原子吸收光譜法特異性和靈敏度高，操作簡便，但只能用于體內少量存在的含金屬離子的藥物。 在TDM中可以用于鋰鹽、鉑鹽的檢測。 (二)色譜也稱色譜。 色譜作用分離樣品中理化性質不同的成分，配合適當的檢測器可以同時進行定性和定量的工作。 特異性高，能同時檢測同一樣品中的不同成分，是色譜的共同優(yōu)點，在TDM中尤其有意義。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：薄層色譜(TLC )對定量點樣品技術進行了改進，使用掃描定量，但其靈敏

13、度和再現(xiàn)性還比其他色譜低，除用于毒物檢測外，在TDM工作中應用得很少由于60年代末期成熟的氣相色譜(GC )和高效液相色譜(HPLC )相繼發(fā)展，實現(xiàn)了高效的色譜分離和檢測，可以用微機控制色譜條件、程序和數據處理，其特異性、靈敏度和再現(xiàn)性臨床生物化學 :第六節(jié)常用藥物濃度測定技術，第六節(jié)常用藥物濃度測定技術：采用內標本法定量，可以消除部分操作誤差，提高檢測結果的可靠性。 HPLC與GC相比，由于不需要將樣品高溫氣化，所以一般不進行衍生化處理，另一方面，HPLC的固定相的種類多，流動相通過改變其構成成分和比例進一步變化。 兩者適當組合，可分離測定大多數有機化合物藥物。 實際上，PS和PS等先進可

14、靠的檢測方法的應用促進了TDM的形成和發(fā)展。臨床生物化學 :第六節(jié)常用藥物濃度檢測技術，第六節(jié)常用藥物濃度檢測技術：特別是HPLC已成為TDM的重要檢測技術，常被用作評價其他方法的參考方法。 當然，GC和HPLC一般要求樣品預處理，兩種方法使用的設備昂貴而難以普及。 但是，從發(fā)展角度來看，HPLC仍然是國內TDM的主要分析方法。 近年來發(fā)展起來的GC質譜、HPLC-質譜的在線檢測，大大提高了這種分析手段的性能。 臨床生物化學 :第6節(jié)藥物濃度測定常用技術，第6節(jié)藥物濃度測定常用技術：(3)免疫化學法很多藥物由于是半抗原或抗原，會引起過敏反應。 如果能調制出與這些藥物相對應的特異性抗體，就能根據

15、抗原抗體反應的特異性，用免疫化學法檢測出這些藥物。 TDM應用的免疫化學法一般采用競爭免疫分析，定量添加的少量特異抗體和標本中的相應抗原和半抗原性藥物與定量添加的標記藥物之間發(fā)生競爭結合，測定標記藥物和抗體結合的抑制程度，并與同樣處理的標準管進行比較，可以定量樣品中的藥物。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：免疫化學法靈敏度極高，多達到ng至pg檢測水平，能滿足所有藥物TDM要求的該方法所需標本量少，一般無需預處理，操作簡單，商品化試劑盒這些都是免疫化學法的優(yōu)點。 但是，TDM中免疫法存在的主要問題是特異性容易受到干擾。 干擾因素除來源于內源性物質外，都是

16、抗原性決定基沒有變化的被檢測藥物的代謝，或具有相同抗原性的其他藥物和代謝物。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：如強心藥地高辛、地高辛代謝物地高辛可與地高辛抗體結合。 很明顯，在體內代謝幾乎沒有變化而原型排泄的藥物，對代謝物的干涉很少，特別適用于慶大霉素等氨基糖苷類抗生素的免疫法檢查。 當然，如果不具備完全或半抗原性的藥物，制造出特異的抗體，就不能用免疫化學法進行TDM。 但總的來說，免疫化學方法的上述優(yōu)點是TDM檢測技術發(fā)展的主要方向。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：免疫化學法根據標記物的性質，可分為放射免疫法、

17、熒光免疫法和酶免疫法三種。 根據測定中是否分離與抗體結合的標記物，可分為多相(需要分離)和均勻相(不分離)免疫分析法兩種。 放射免疫法存在放射性污染，為多相系統(tǒng)，分離結合和未結合的標記物操作復雜，影響因素多，分離效果直接影響測定結果，但靈敏度高，標記技術比較成熟，國內生產的TDM試劑盒多。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：熒光免疫法根據反應系統(tǒng)和定量方法不同，還可以分為幾類。 與放射免疫法相比，熒光免疫法多無放射性污染，操作簡單，容易普及。 國外生產的TDM試劑盒，相當一部分屬于這一類，還由TDM熒光偏振光免疫分析裝置生產。 酶免疫分析法是目前國外TDM免疫分析中最常用的方法，特別是同質酶免疫分析法。 臨床生物化學 :第六節(jié)藥物濃度測定常用技術，第六節(jié)藥物濃度測定常用技術：本法除了具有熒光免疫法的優(yōu)點之外，還能選擇合適的標記酶，實現(xiàn)目前廣泛普及的多種自動分析儀的自動化操作，有利于其普及。特別是近年來，在TDM的酶免疫分析中，應用酶偶聯(lián)反應原理，用輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD )標記藥物，使葡萄糖氧化酶蛋白、偶聯(lián)輔助酶過氧化物酶及基質和顯色劑4 -氯1 -萘酚固化為薄膜臨床生物化學 :第六節(jié)藥