免疫比濁法檢測免疫球蛋白.ppt

1、a，1，免疫比濁法是免疫球蛋白、免疫系統(tǒng)、a，2、實驗原理、免疫濁度法是可溶性抗原，抗體在液相中特異性結(jié)合，產(chǎn)生一定大小的復(fù)合物，形成光的折射和吸收，測定該折射和吸收后的透射光和散射光作為計算單位。a、3、免疫比濁法分類，一條光線通過溶液受到光散射和光吸收兩個因素的影響而減弱光強度后，透射率濁法：是在光源光路方向(00 )上測定透射光強度與被檢測溶液微粒濃度的關(guān)系的方法。 散射比濁法：是在光源光路方向(50-960 )角的方向上測定透射光強度和被測溶液中的微粒濃度的關(guān)系的方法.a，4，透射率濁法和散射比濁法的光路，檢測器a，檢測器b，IC，I0，I，透射率濁法，散射比濁法，a，5，(1)基本原

2、理是極其簡單的方法。 抗原過剩時，與檢測樣品中的對應(yīng)Ig發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，形成可溶性復(fù)合體，改變反應(yīng)介質(zhì)的濁度。 測定方法用分光光度計測定吸收的量。 讀取值由吸收單位(a )或OD值表示，a值反映了入射光和透射光的比率。 測量對象物中的Ig含量可以根據(jù)標準曲線計算出來。 所測樣品中抗原的含量與吸光度成正比，與透射光成反比。 在PEG的作用下，反應(yīng)會加速復(fù)合體的形成。免疫透過率濁法、a、6、透過率濁法的測定原理、誘導(dǎo)劑、a、7、透過率濁法的測定原理、a、8、透過率濁法的缺陷：(1)溶液中存在的抗原抗體復(fù)合體分子足夠大，分子太小的話無法阻止光線通過。 (2)溶液中抗原抗體復(fù)合體的數(shù)量足夠多。 數(shù)量

3、太小，溶液濁度的變化太小，對光束的影響不大。 (3)透過率渾濁是根據(jù)透過光變?nèi)醯脑磉M行定量的，所以只能測定抗原抗體反應(yīng)的第二階段，檢測需要抗原抗體溫度培養(yǎng)反應(yīng)時間，檢測時間很長。 光束是每單位時間到達、離開或通過曲面的光能，以a、9、原理、散射比濁法、入射光的某一角度檢測來自粒子的散射光，散射光的強度與IC的含量成比例。a，10，散射比濁法測定原理，誘導(dǎo)劑，a，11，散射光測定，a，12，速度散射比濁法(1)的基本原理是測定抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動態(tài)過程。 速度是抗原抗體在單位時間內(nèi)結(jié)合形成復(fù)合體的速度。 將各單位時間內(nèi)形成復(fù)合體的速度和測定的散射信號連接起來，即動態(tài)的速度比濁分析。 如果測量在

4、某個時間內(nèi)形成的速度的下降，則出現(xiàn)速度的峰值，該峰值的高低表示所測量的抗原的量。 方法評價：靈敏度高(不需要平衡)的抗原抗體鍵的動態(tài)測定，理論上不受背景散射信號的影響，可以檢測微量樣品，a、15、原理、2 .終點散射比濁法，使抗原抗體作用一定時間進行平衡IC的濁度不再受時間的影響，但在反應(yīng)IC聚合產(chǎn)生棉狀沉淀之前進行了濁度測定。 a、16、散射比濁法的缺陷是，(1)一次測定光吸收值，因此沒有考慮所測定的每個樣品的吸收和散射效果，測定結(jié)果不正確(2)測定的是抗原抗體反應(yīng)的第二階段，不適合迅速測定。 (3)終點法存在反應(yīng)背景，測定樣品含量越低，背景比例越大，因此微量測定時，背景干擾是影響正確測定的

5、重要因素。 a、17、影響免疫比濁測定的因素，1、抗原抗體比率2、抗體質(zhì)量抗體的特異性、有效值、親和力3、反應(yīng)溶液4、增濁劑的使用、a、18、1，透過率濁操作簡便，適用于普通的自動生化分析器和普通的分光光度計，可在大部分實驗室展開。 不足的靈敏度和精度都不理想，需要的抗血清量多，檢查周期長。 2、散射比濁的優(yōu)點是靈敏度、精度高、檢測快。 其缺點是需要特定的分析儀器，試劑價格很高。比較透射率濁法和散射比濁法的優(yōu)缺點，a、19，免疫濁度法測定中應(yīng)注意的問題1，假濁度的影響假濁度形成原因復(fù)雜，主要是抗血清中含有非特異性交叉反應(yīng)性雜抗體成分的增稠劑濃度和反應(yīng)時間掌握不適當?shù)臉悠纷陨頋岫忍幚聿贿m當?shù)脑噭?/p>

6、的污染和變質(zhì)器材，特別是比色卡2、非特異性散射光的影響免疫濁度法很好地受到內(nèi)源性光散射的影響，為了避免這些非特異性光散射的影響，應(yīng)用透射率濁法必須保證抗體成分在3以下，散射比濁法在0.5以下。 a、20，本實驗使用的聚乙二醇生理特性聚乙二醇是一種中性、無毒、獨特的理化性質(zhì)和良好的生物相容性的高分子聚合物，聚乙二醇PEG具有高親水性，水溶液中有大的水動力學(xué)體積，無免疫原性。 藪結(jié)合在藥物分子或藥物表面時，可以給予其優(yōu)良性質(zhì)的藥物分子，改變其在水溶液中的生物分配行為和溶解性，在該修飾藥物周圍形成空間屏障，減少藥物的酶解，防止腎臟代謝立即消除，使藥物被免疫系統(tǒng)的細胞認識、a、21、材料、1 .免疫球蛋白試劑a、m、G 2.免疫球