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文檔簡(jiǎn)介
1、實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察,主要有:文晴生命學(xué)學(xué)院,2020/7/15,實(shí)驗(yàn)課的要求,制圖要求:實(shí)驗(yàn)報(bào)告用藍(lán)色或黑色的鋼筆、圓珠筆或簽字筆作成,用鉛筆作成(包括視野、觀察結(jié)果、倍率等)。 值班要求:四人一組,包括退貨、黑板、地面、柜臺(tái)等,值班結(jié)束后經(jīng)老師同意可以離開(kāi)。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怙@微鏡的結(jié)構(gòu)和各部分的作用,掌握顯微鏡的使用方法學(xué)習(xí)油鏡的原理和使用方法,掌握并觀察細(xì)菌的三種基本形態(tài),目鏡、鏡筒、轉(zhuǎn)換器、物鏡、通光孔、聚光器、壓板回形針、反射鏡、鏡座、粗準(zhǔn)焦螺旋、細(xì)焦點(diǎn),以及普通光學(xué)顯微鏡的基本實(shí)驗(yàn)原理:顯微鏡的工作原理,物鏡上的標(biāo)識(shí)牌,顯微鏡的總倍率=物鏡倍率x目鏡倍率,油
2、鏡的倍率可達(dá)100,倍率這一大透鏡,焦距長(zhǎng)度短,直徑小,但所需照度最大。從低倍鏡向高倍鏡移動(dòng)時(shí),通過(guò)增加照明強(qiáng)度、增大虹膜光圈,來(lái)增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。 從標(biāo)本的玻璃板透過(guò)來(lái)的光線,根據(jù)介質(zhì)密度(從玻璃板進(jìn)入空氣,進(jìn)入鏡頭),一部分光線由于折射和全內(nèi)反射不能進(jìn)入鏡頭,使用油鏡入射的光線很少,物體像不清楚。 為了不損害通過(guò)的光,使用油鏡時(shí),在油鏡和玻璃板之間必須加入接近玻璃折光率的鏡油(通常使用瀝青膠,其折光率為n=1.52 )。 增加視野的入光量,使物像更鮮明。 顯微鏡的極限分辨率和極限分辨率(resolution or resolving power )是指顯微鏡能夠判別兩點(diǎn)間的最小
3、距離的能力。 從物理上看,光學(xué)顯微鏡的極限分辨率受光的干涉現(xiàn)象和所使用的物鏡鏡頭性能的限制可以表示為,式中,D=顯微鏡極限分辨率2點(diǎn)間的最短距離=光波波長(zhǎng)(平均0.55m) NA=物鏡的數(shù)值孔徑。 顯微鏡的性能、數(shù)值孔徑取決于物鏡的鏡角和玻璃板與透鏡之間介質(zhì)的折光率,NA=n sin(/2) n:可表示為物鏡與被檢體之間介質(zhì)的折光率:鏡嘴角。 以香柏油為介質(zhì)的油鏡能夠達(dá)到的數(shù)值孔徑(NA通常為1.21.4 )高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡(NA均小于1.0 )。 數(shù)值孔徑通常為0.65左右的高倍鏡只能識(shí)別距離為0.4m以上的物體,但油鏡的極限分辨率可達(dá)到0.2m左右。三、實(shí)驗(yàn)器材1、標(biāo)本片:四聯(lián)球菌
4、、枯草芽孢桿菌2、試劑:瀝青膠、混合二甲苯3、儀器及其他用具:顯微鏡、擦鏡紙等,四、實(shí)驗(yàn)步驟1、顯微鏡觀察步驟1 )低倍鏡觀察(10 ) :打開(kāi)電源, 打開(kāi)顯微鏡的電源開(kāi)關(guān)3 .將低倍鏡移動(dòng)到鏡筒正下方的旋轉(zhuǎn)變換器4 .一邊調(diào)節(jié)光源的強(qiáng)度,一邊對(duì)準(zhǔn)目鏡,仔細(xì)觀察,視野亮度均勻5 .將標(biāo)本放置在載物臺(tái)上,旋轉(zhuǎn)促動(dòng)器,使觀察的目標(biāo)物位于圓孔的正中間7 .用左眼觀察目鏡,調(diào)節(jié)粗的、細(xì)的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋,直到目標(biāo)物清晰為止。(注意:用眼睛注視物鏡,以免物鏡與載玻片碰撞。) 、用高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。 旋轉(zhuǎn)變換器將低倍鏡變換成高倍鏡(注意:變換物鏡時(shí),為了避免透鏡和標(biāo)本片碰撞,從側(cè)面觀察,如果高倍鏡接觸標(biāo)本片
5、,請(qǐng)立即停止旋轉(zhuǎn),用低倍鏡重新對(duì)焦)對(duì)焦。 調(diào)節(jié)光圈,使光的亮度變得適當(dāng),然后調(diào)節(jié)細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋直到目標(biāo)物清晰為止進(jìn)行觀察。移動(dòng)促動(dòng)器,找到合適的目標(biāo)物,移動(dòng)到視野中心進(jìn)行觀察。 (高倍鏡看不到目標(biāo)物的話,可以更換油鏡進(jìn)行觀察),切換油鏡的操作1 .油鏡。 調(diào)節(jié)粗對(duì)準(zhǔn)螺旋,載物臺(tái)下降約2 cm,切換油鏡鏡頭2 .加香瀝青膠。 從樣品片的鏡檢部滴下瀝青膠的側(cè)面看,用粗的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋慢慢抬起載物臺(tái),將油透鏡浸泡在油中,正好接近載玻片3 .對(duì)焦。 使聚光器上升,使虹膜光圈大幅打開(kāi),緩慢調(diào)節(jié)細(xì)微的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋,直至一盞茶上照明的物體像清晰為止。 4 .觀察。 多觀察一些視野,選擇菌體分布均勻的視野進(jìn)行菌體形態(tài)和序列方式的觀察。 2、將顯微鏡用完畢后的處理光強(qiáng)度調(diào)節(jié)到最弱,拔掉電源開(kāi)關(guān),降低電源插頭,降低載物臺(tái),漂亮地擦拭鏡頭上的瀝青膠,沾一點(diǎn)混合二甲苯,擦拭鏡頭上的剩馀油跡,擦拭剩馀的混合二甲苯,使顯微鏡的各部分恢復(fù)原狀,使物鏡“八” 擦拭鏡體、五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理結(jié)果,繪出油鏡下觀察的兩種細(xì)菌的形態(tài)及不同的細(xì)菌細(xì)胞球的排列方式。 四聯(lián)球菌(10100 )桿菌120(10100 ),六、思考和討論用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題是什么?在載玻片和鏡片之間注入什么油? 起什么作用?
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