微生物學(xué) 實(shí)驗(yàn)1普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察

1、實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的使用及細(xì)菌形態(tài)的觀察，主要有：文晴生命學(xué)學(xué)院，2020/7/15，實(shí)驗(yàn)課的要求，制圖要求：實(shí)驗(yàn)報(bào)告用藍(lán)色或黑色的鋼筆、圓珠筆或簽字筆作成，用鉛筆作成(包括視野、觀察結(jié)果、倍率等)。 值班要求：四人一組，包括退貨、黑板、地面、柜臺(tái)等，值班結(jié)束后經(jīng)老師同意可以離開(kāi)。 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怙@微鏡的結(jié)構(gòu)和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法學(xué)習(xí)油鏡的原理和使用方法，掌握并觀察細(xì)菌的三種基本形態(tài)，目鏡、鏡筒、轉(zhuǎn)換器、物鏡、通光孔、聚光器、壓板回形針、反射鏡、鏡座、粗準(zhǔn)焦螺旋、細(xì)焦點(diǎn)，以及普通光學(xué)顯微鏡的基本實(shí)驗(yàn)原理：顯微鏡的工作原理，物鏡上的標(biāo)識(shí)牌，顯微鏡的總倍率=物鏡倍率x目鏡倍率，油

2、鏡的倍率可達(dá)100，倍率這一大透鏡，焦距長(zhǎng)度短，直徑小，但所需照度最大。從低倍鏡向高倍鏡移動(dòng)時(shí)，通過(guò)增加照明強(qiáng)度、增大虹膜光圈，來(lái)增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。 從標(biāo)本的玻璃板透過(guò)來(lái)的光線，根據(jù)介質(zhì)密度(從玻璃板進(jìn)入空氣，進(jìn)入鏡頭)，一部分光線由于折射和全內(nèi)反射不能進(jìn)入鏡頭，使用油鏡入射的光線很少，物體像不清楚。 為了不損害通過(guò)的光，使用油鏡時(shí)，在油鏡和玻璃板之間必須加入接近玻璃折光率的鏡油(通常使用瀝青膠，其折光率為n=1.52 )。 增加視野的入光量，使物像更鮮明。 顯微鏡的極限分辨率和極限分辨率(resolution or resolving power )是指顯微鏡能夠判別兩點(diǎn)間的最小

3、距離的能力。 從物理上看，光學(xué)顯微鏡的極限分辨率受光的干涉現(xiàn)象和所使用的物鏡鏡頭性能的限制可以表示為，式中，D=顯微鏡極限分辨率2點(diǎn)間的最短距離=光波波長(zhǎng)(平均0.55m) NA=物鏡的數(shù)值孔徑。 顯微鏡的性能、數(shù)值孔徑取決于物鏡的鏡角和玻璃板與透鏡之間介質(zhì)的折光率，NA=n sin(/2) n:可表示為物鏡與被檢體之間介質(zhì)的折光率：鏡嘴角。 以香柏油為介質(zhì)的油鏡能夠達(dá)到的數(shù)值孔徑(NA通常為1.21.4 )高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡(NA均小于1.0 )。 數(shù)值孔徑通常為0.65左右的高倍鏡只能識(shí)別距離為0.4m以上的物體，但油鏡的極限分辨率可達(dá)到0.2m左右。三、實(shí)驗(yàn)器材1、標(biāo)本片：四聯(lián)球菌

4、、枯草芽孢桿菌2、試劑：瀝青膠、混合二甲苯3、儀器及其他用具：顯微鏡、擦鏡紙等，四、實(shí)驗(yàn)步驟1、顯微鏡觀察步驟1 )低倍鏡觀察(10 ) :打開(kāi)電源， 打開(kāi)顯微鏡的電源開(kāi)關(guān)3 .將低倍鏡移動(dòng)到鏡筒正下方的旋轉(zhuǎn)變換器4 .一邊調(diào)節(jié)光源的強(qiáng)度，一邊對(duì)準(zhǔn)目鏡，仔細(xì)觀察，視野亮度均勻5 .將標(biāo)本放置在載物臺(tái)上，旋轉(zhuǎn)促動(dòng)器，使觀察的目標(biāo)物位于圓孔的正中間7 .用左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗的、細(xì)的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋，直到目標(biāo)物清晰為止。(注意：用眼睛注視物鏡，以免物鏡與載玻片碰撞。) 、用高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。 旋轉(zhuǎn)變換器將低倍鏡變換成高倍鏡(注意：變換物鏡時(shí)，為了避免透鏡和標(biāo)本片碰撞，從側(cè)面觀察，如果高倍鏡接觸標(biāo)本片

5、，請(qǐng)立即停止旋轉(zhuǎn)，用低倍鏡重新對(duì)焦)對(duì)焦。 調(diào)節(jié)光圈，使光的亮度變得適當(dāng)，然后調(diào)節(jié)細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋直到目標(biāo)物清晰為止進(jìn)行觀察。移動(dòng)促動(dòng)器，找到合適的目標(biāo)物，移動(dòng)到視野中心進(jìn)行觀察。 (高倍鏡看不到目標(biāo)物的話，可以更換油鏡進(jìn)行觀察)，切換油鏡的操作1 .油鏡。 調(diào)節(jié)粗對(duì)準(zhǔn)螺旋，載物臺(tái)下降約2 cm，切換油鏡鏡頭2 .加香瀝青膠。 從樣品片的鏡檢部滴下瀝青膠的側(cè)面看，用粗的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋慢慢抬起載物臺(tái)，將油透鏡浸泡在油中，正好接近載玻片3 .對(duì)焦。 使聚光器上升，使虹膜光圈大幅打開(kāi)，緩慢調(diào)節(jié)細(xì)微的準(zhǔn)焦點(diǎn)螺旋，直至一盞茶上照明的物體像清晰為止。 4 .觀察。 多觀察一些視野，選擇菌體分布均勻的視野進(jìn)行菌體形態(tài)和序列方式的觀察。 2、將顯微鏡用完畢后的處理光強(qiáng)度調(diào)節(jié)到最弱，拔掉電源開(kāi)關(guān)，降低電源插頭，降低載物臺(tái)，漂亮地擦拭鏡頭上的瀝青膠，沾一點(diǎn)混合二甲苯，擦拭鏡頭上的剩馀油跡，擦拭剩馀的混合二甲苯，使顯微鏡的各部分恢復(fù)原狀，使物鏡“八” 擦拭鏡體、五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及處理結(jié)果，繪出油鏡下觀察的兩種細(xì)菌的形態(tài)及不同的細(xì)菌細(xì)胞球的排列方式。 四聯(lián)球菌(10100 )桿菌120(10100 )，六、思考和討論用油鏡觀察時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題是什么？在載玻片和鏡片之間注入什么油？ 起什么作用？