需氧和兼性厭氧球菌的鑒定

1、微生物檢驗，第1、2章，需氧和兼性厭氧球菌的鑒定，返回總目錄，第3章，本章內(nèi)容，第4章，學習目標和要點，學習目標：1。掌握葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和奈瑟氏球菌的主要生物學特性和微生物學檢查，特別是它們的鑒定依據(jù)和要點。2.熟悉葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和奈瑟菌的臨床意義。本章的重點是：1 .葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和奈瑟氏球菌的主要生物學特性和微生物學檢驗。2.葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌和奈瑟菌的臨床意義。5.概述，球菌有很多種，根據(jù)革蘭氏染色的不同可分為革蘭氏陽性。致病性球菌說致病性球菌主要引起化膿性炎癥，也可稱為化膿性球菌。6.在第一部分，葡萄球菌，葡萄球菌屬細菌是一種革蘭氏陽性球菌，帶有陽性

2、觸酶，之所以命名是因為它們經(jīng)常堆積成葡萄串。廣泛分布于自然界，構成人體的正常菌群。它們大多數(shù)是非致病性的，少數(shù)引起化膿性感染。共有35種17亞種，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌和溶血性葡萄球菌。7.1.生物學特征1。形態(tài)和染色這個屬的大多數(shù)細菌是球形的，直徑為0515微米。葡萄球菌沒有鞭毛、孢子和莢膜。(1)在液體介質(zhì)上，它們排列成單鏈、雙鏈或短鏈。(2)在固體培養(yǎng)基上，它們排列成葡萄串。(3)在膿液標本中，它們排列成單個分散或很少的葡萄串。第一部分是金黃色葡萄球菌，顯微鏡下為金黃色葡萄球菌(膿)，純培養(yǎng)顯微鏡下為金黃色葡萄球菌。20%的CO2有利于毒素的形成。(1)在液體介質(zhì)

3、中，它變得均勻混濁。(2)在普通培養(yǎng)皿中，它形成12毫米、圓形、光滑、邊緣規(guī)則、不透明和有色的菌落。不同的菌株產(chǎn)生不同的脂溶性色素，如：金黃色、白色、檸檬色、金黃色葡萄球菌脂溶性色素9、第一節(jié)葡萄球菌、普通瓊脂平板上表皮葡萄球菌的白色色素、血平板上表皮葡萄球菌的白色色素2。培養(yǎng)特征，10、第一節(jié)葡萄球菌，(3)血平板上的金黃色葡萄球菌和溶血性葡萄球菌，可產(chǎn)生溶血性毒素。其他葡萄球菌沒有這種現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌菌落在血液板上放置24小時。2.文化特征。11.(4)在高鹽甘露醇平板上：大多數(shù)葡萄球菌具有很強的耐鹽性(在10%氯化鈉培養(yǎng)基中生長)。該平板常被用作選擇性培養(yǎng)基，細菌能分解甘露醇使指示劑

4、變黃。G-菌在這個平板上不生長，金黃色葡萄球菌在高鹽甘露醇平板上是一個淡黃色的菌落。2.培養(yǎng)特征，第一段葡萄球菌，12，第一段葡萄球菌，(5)蛋黃高鹽瓊脂平板：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生卵磷脂酶，其上可在菌落周圍形成白色沉淀環(huán)。表皮葡萄球菌也能生長，但沒有白色沉淀環(huán)。2。培養(yǎng)特性，金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌在蛋黃板上的生長，13。第一節(jié)葡萄球菌，3。生化反應：葡萄球菌具有很強的生化活性，能分解多種糖、蛋白質(zhì)和氨基酸，對觸酶呈陽性。觸酶陽性，陰性對照，發(fā)酵葡萄糖，14，第1節(jié)葡萄球菌，4。有兩種主要類型的細胞壁抗原，15，第1節(jié)葡萄球菌，5。分類葡萄球菌可以根據(jù)不同的方法進行分類，如基因同源性、色素、

5、生化反應和是否產(chǎn)生凝固酶。6.耐藥葡萄球菌是最具耐藥性的無芽孢細菌。*根據(jù)是否產(chǎn)生凝固酶，凝固酶陽性凝固酶陰性凝固酶，葡萄球菌，16，2，臨床意義，第1節(jié)葡萄球菌，17，第1節(jié)葡萄球菌，18，微生物檢驗程序，標本，膿液，血液，剩余食物，嘔吐物等。直接涂片鏡檢、革蘭氏陽性球菌、分離培養(yǎng)、生長現(xiàn)象等。生化反應：血漿凝固酶、甘露醇、耐熱核酸酶、小貓試驗、報告、形態(tài)學染色：革蘭氏陽性球菌、葡萄球菌在1、19、1區(qū)。標本：主要是血液、尿液、痰液、腦脊液、穿刺液和濃縮液。3。微生物檢驗。直接涂片：直接涂片標本或增菌液，革蘭氏染色鏡檢可發(fā)現(xiàn)葡萄串排列的革蘭氏陽性球菌，并可作出“革蘭氏陽性球菌，葡萄串排列，疑

6、似葡萄球菌”的初步報告。第一節(jié)葡萄球菌，20，3。血樣的富集培養(yǎng)，培養(yǎng)后24小時，每天觀察富集液的變化。如果沒有變化，需要培養(yǎng)7天，包括盲傳2次。如果沒有細菌培養(yǎng)，可以報告“培養(yǎng)7天后血液樣本無菌生長”。出現(xiàn)混濁、蛋白胨樣凝塊等。可以進行進一步的分離培養(yǎng)和革蘭氏染色。4.分離培養(yǎng)(1)血液平板：351824小時(2)高鹽甘露醇平板或高鹽蛋黃平板(*葡萄球菌菌落特征綜述)，第1部分，葡萄球菌，21，5。生化反應：(1)酶接觸試驗：陽性。(2)凝固酶試驗：玻片法和試管法。葡萄球菌，22，5。生化反應(3)耐熱DNA試驗，表皮葡萄球菌耐熱DNA試驗(-)，金黃色葡萄球菌耐熱DNA試驗()，第1節(jié)，葡

7、萄球菌，23，5。生化反應，陽性反應，但陰性反應，Slidex Jusa Plus可以快速識別金黃色葡萄球菌，(4)乳膠凝集試驗，該試驗不僅可以檢測金黃色葡萄球菌凝固酶，還可以檢測葡萄球菌A蛋白(SPA)，第一段葡萄球菌，24，第一段葡萄球菌，25，5。生化反應。(6)腸毒素試驗：目前，免疫學方法用于快速檢測腸毒素，主要是酶聯(lián)免疫吸附試驗。(7)其他鑒定試驗：臨床常用的商業(yè)鑒定系統(tǒng)，如美國石油學會葡萄球菌鑒定試劑盒。(5)甘露醇發(fā)酵試驗：金黃色葡萄球菌陽性。第1部分，葡萄球菌，26，5。生化反應(8)其他非培養(yǎng)鑒定或檢查方法：1)免疫學方法：采用酶聯(lián)免疫吸附試驗或?qū)α髅庖唠娪緳z測金黃色葡萄球菌

8、抗體；2)分子生物學方法：用市售Accu探針鑒定培養(yǎng)物，用脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析葡萄球菌的質(zhì)粒和染色體。第一節(jié)葡萄球菌，27，6。藥物敏感性試驗，(1)藥物敏感性鑒定試驗-新霉素敏感性試驗，金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌r，第1節(jié)葡萄球菌，28，6。藥敏試驗，(2)藥敏試驗(抗菌藥物臨床選擇按CLSI)，第1節(jié)葡萄球菌，29、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和非耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，第1部分，葡萄球菌，30，7。根據(jù)科、屬和種的順序進行鑒定(1)科、微球菌、鏈球菌和奈瑟氏球菌之間的鑒定，第1節(jié)，葡萄球菌，31，7。按科、屬、種的順序進行鑒定，(2)屬間鑒定，葡萄球菌與微球菌的鑒定，

9、第1節(jié)，葡萄球菌，引起臨床感染的五種最常見葡萄球菌的鑒定要點，第1節(jié)，葡萄球菌，33，返回第1章內(nèi)容，第1節(jié)，葡萄球菌，34，第2節(jié)，鏈球菌屬細菌是一種革蘭氏陽性球菌，具有陰性觸酶，廣泛分布于自然界、人和動物的腸道及健康人的鼻咽部。光鏡下鏈球菌形態(tài)學(革蘭氏染色)，電鏡下鏈球菌形態(tài)學，35，1短菌株由48種細菌組成，舊菌株可達2030種細菌。(2)在固體培養(yǎng)基或膿液標本中，呈短鏈、成對或單分散排列。1.生物學特征。甲類鏈球菌，肺炎鏈球菌，乙類鏈球菌，第二季度鏈球菌，36。當鏈球菌年輕時，可以看到莢膜。當連續(xù)培養(yǎng)后莢膜消失時，肺炎鏈球菌往往呈雙重排列，故又稱肺炎球菌。在動物體內(nèi)，它能形成無鞭毛的

10、厚莢膜鏈球菌、孢子和肺炎鏈球菌。第2節(jié)鏈球菌，37，2。它對培養(yǎng)特性要求高，在5%CO2環(huán)境中生長較好，(1)液體培養(yǎng)基(血清肉湯):沉淀生長(上清液澄清/微混合)，(2)血平板：小菌落，灰色和白色。有-溶血，-溶血和-溶血(非溶血)，-溶血-溶血，鏈球菌，第2節(jié)，38，3。生化活動活躍：觸酶陰性，葡萄糖，菊粉，(1)甲組鏈球菌：桿菌肽S，甲、乙、丁組鏈球菌桿菌肽試驗，甲組桿菌肽S，第四組鏈球菌：PYR，七葉皂苷，乙組環(huán)磷酸腺苷，丁組鏈球菌七葉皂苷(一)，甲組鏈球菌七葉皂苷-(二)，思維：環(huán)磷酸腺苷原理？鏈球菌，第2部分，40，3。生化反應，(4)肺炎鏈球菌：光欽鏈球菌，膽汁溶解，菊粉，肺炎鏈

11、球菌光欽鏈球菌，膽汁溶解(平板法)，膽汁溶解(試管法)，鏈球菌，第2節(jié)，41，4。分類根據(jù)以下傳統(tǒng)分類如鏈球菌的溶血特性和蘭斯菲爾德血清學，(1)根據(jù)培養(yǎng)基上的溶血特性，第二部分為鏈球菌，42；(2)從抗原結構來看，銀鏈球菌的結構復雜，含有許多抗原，主要包括：(1)銀鏈球菌群中，90%的致病者屬于甲群，乙、丙、丁、氟、庚群常感染化膿性疾病。鏈球菌，第2、43節(jié)，(4)溶血、耐藥性和生化反應的綜合分類，(3)根據(jù)鏈球菌的需氧量，可分為三類：需氧型、厭氧型和微需氧型鏈球菌，鏈球菌，第2、44節(jié)，臨床意義，鏈球菌，第2、45節(jié)，血毒素O:含-SH基團的耐熱蛋白分子量低，對氧穩(wěn)定，由其引起的血片溶血可

12、幫助診斷鏈球菌感染后的風濕熱、腎小球腎炎等鏈球菌疾病。秒。鏈球菌，46，秒。鏈球菌，47，微生物檢驗程序，標本，血液，尿液，傷口標本，化膿性分泌物等。直接涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、鏈球菌分組、鑒定、生長現(xiàn)象、溶血類型、生化反應：觸酶、PYR、七葉皂苷、菊粉、膽汁裂解物等。形態(tài)學染色：革蘭氏陽性球菌，藥敏試驗，報告，血清學試驗，抗“O”試驗，蘭斯菲爾德分組，第2節(jié)鏈球菌3。微生物檢驗。直接涂片：將標本或富集液直接涂片，革蘭氏染色鏡檢發(fā)現(xiàn)呈鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，或革蘭氏陽性球菌成對排列，細菌周圍有透明環(huán)，可制成“革蘭氏陽性球菌，鏈狀排列，疑似鏈球菌”；或初步報告“革蘭氏陽性球菌成對發(fā)現(xiàn)，懷疑是肺炎鏈

13、球菌”，第二節(jié)鏈球菌，49，3。微生物學檢查，3富集培養(yǎng)：以下生長現(xiàn)象有助于區(qū)分不同的鏈球菌，一般細菌培養(yǎng)持續(xù)7天，但如無現(xiàn)象，需盲目通過2次亞急性細菌性心內(nèi)膜炎血液培養(yǎng)4周，每周移植一次平板。如果有生長，移植到血瓊脂平板，第2節(jié)鏈球菌，50，4。隔離培養(yǎng)條件：應添加血清、血液和其他營養(yǎng)物質(zhì)。37天后進行12天的好氧和厭氧培養(yǎng)。觀察菌落特征和溶血情況。注：關鍵點、培養(yǎng)條件、培養(yǎng)基、溶血試驗、第一代分離應置于510的CO2環(huán)境中，可使用二氧化碳培養(yǎng)箱或燭缸。血盤羊血盤：有助于識別和進一步鑒定其溶血特性。a組鏈球菌主要產(chǎn)生溶血毒素“s”，但一般來說，鏈球菌只產(chǎn)生溶血毒素“o”。第2節(jié)鏈球菌，51，

14、5鑒定實驗鏈球菌的鑒定應根據(jù)其菌體形態(tài)、菌落形態(tài)和溶血特性，結合以下鑒定試驗進行。(1)與其他革蘭氏陽性球菌的鑒別：在檢測溶血毒素“O”時，必須降低氧分壓，如厭氧培養(yǎng)、倒平板倒放或穿刺接種，使只產(chǎn)生溶血毒素“O”的鏈球菌也能出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。第二節(jié)鏈球菌，52，5鑒定實驗，(2)屬內(nèi)鑒定：1)分類(綜述)蘭斯菲爾德聚類試劑盒，第二節(jié)鏈球菌，53，蘭斯菲爾德血清學凝集試驗，第二節(jié)鏈球菌，54，肺炎鏈球菌和D群鏈球菌被鑒定，其他統(tǒng)稱為綠色鏈球菌?？乖M(甲、乙、丙、庚)由溶血性鏈球菌鑒定.類別1:b型溶血性鏈球菌：a、b、c、d、f、g組，ii類鏈球菌，55，青霉素6.5%NaCL肉湯，d類鏈球菌S-

15、腸球菌r，類別3:其他草綠色溶血性鏈球菌，類別2:膽汁正水解的鳥鏈escin:q組，其他d類，ii類鏈球菌，56， (3)其他鑒定試驗1)鏈激酶A組2)牛奶亞甲藍試驗糞便鏈和牛奶鏈不受抑制3)馬尿酸鈉水解試驗B組4)肺炎鏈球菌莢膜腫脹試驗，抗“O”試驗，原理：中和試驗方法：間接凝集結果：效價大于400單位含義：風濕熱及其活性的輔助診斷，6。 血清學診斷，鏈球菌在第二季度，57鏈球菌侵入人體產(chǎn)生SLO，這刺激身體產(chǎn)生相應的抗體ASO。中和后，加入SLO膠乳試劑。由于患者血清中含有大量的抗動脈粥樣硬化抗體，未被中和的抗動脈粥樣硬化抗體與乳膠試劑反應，產(chǎn)生清晰的凝集反應，為抗“0”試驗陽性；無凝集，

16、陰性。7。藥敏試驗(1)藥敏鑒定試驗(2)藥敏試驗，抗“O”試驗原理，回章，第2節(jié)鏈球菌，58，第3節(jié)腸球菌，腸球菌原屬D群鏈球菌(血清學分類)，1984年從鏈球菌中分離出來，成為獨立的細菌，廣泛分布于自然界和人類。過去認為腸球菌對人類無致病作用，但近年來， 研究證實，腸球菌是需氧和兼性厭氧球菌中最重要的醫(yī)院感染病原體，在尿路感染、腹部感染和菌血癥中更常見。 沒有孢子，沒有膠囊，沒有鞭毛。2.培養(yǎng)特性的營養(yǎng)要求高，有些菌株可以在麥康凱板等選擇性培養(yǎng)基上生長。它能在高鹽(6.5%氯化鈉)、堿性(pH9.6)和高膽汁(40%)培養(yǎng)基上生長?？稍?0和45時生長，培養(yǎng)24小時，腸球菌血片可在物鏡下染色。第三節(jié)腸球菌，60，1，生物學特性，在血瓊脂平板上培養(yǎng)1824小時后，可形成灰白色、圓形、不透明、光滑的菌落，直徑為0 . 51.0毫米，不溶血或不溶血，少數(shù)出現(xiàn)溶血，但不同于第三節(jié)腸球菌，61，3。生化反應涉及