(理科選修三)2.2.1動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)公開課.ppt

1、專題2動(dòng)物細(xì)胞工程，植物組織培養(yǎng)，植物體細(xì)胞雜交，1。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，2。動(dòng)物細(xì)胞融合，3。單克隆抗體的制備，4。核移植，綜述：動(dòng)物細(xì)胞工程的常用技術(shù)手段：植物細(xì)胞工程的常用技術(shù)手段是什么？(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是動(dòng)物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)，即從動(dòng)物體內(nèi)取出相關(guān)組織，將其分散成單細(xì)胞，然后將其置于合適的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和繁殖。1.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念：2。原理：細(xì)胞增殖。定義：人們通常稱動(dòng)物組織的原代培養(yǎng)為消化后培養(yǎng)。胰蛋白酶處理，取出幼小動(dòng)物的組織、胚胎或器官和組織，切割，單細(xì)胞，細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(貼壁生長，生長成單層細(xì)胞。有接觸抑制現(xiàn)象)。初級(jí)文化。過程，原代培養(yǎng)，增殖能力強(qiáng)，分裂旺盛

2、，分化程度低，易于培養(yǎng)。去除間質(zhì)蛋白并加入培養(yǎng)基。強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)：細(xì)胞粘附過程，細(xì)胞粘附：分散在培養(yǎng)瓶懸浮液中的細(xì)胞迅速粘附在瓶壁上，這就是所謂的細(xì)胞粘附。培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿壁要求：表面光滑，無毒，易于附著。當(dāng)粘附細(xì)胞分裂和生長，直到它們的表面相互接觸，細(xì)胞將停止分裂和增殖，這被稱為細(xì)胞接觸抑制。重點(diǎn)2:接觸抑制，細(xì)胞接觸抑制，定義：當(dāng)原代培養(yǎng)細(xì)胞處于接觸抑制狀態(tài)時(shí)，用胰蛋白酶處理，使細(xì)胞與瓶壁分離，然后加入新的培養(yǎng)基，細(xì)胞被分離和稀釋，然后從原始培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶。這個(gè)過程被稱為亞文化。(瓶培養(yǎng)過程)、繼代培養(yǎng)、4050代細(xì)胞(細(xì)胞株)分瓶繼代培養(yǎng)、胰蛋白酶、原代培養(yǎng)、接觸抑制、繼代培養(yǎng)、細(xì)胞株：

3、繼代培養(yǎng)細(xì)胞一般可傳至40-50代，遺傳物質(zhì)一般不變，這稱為細(xì)胞株。重點(diǎn)：細(xì)胞株，細(xì)胞系(你可以理解它，舊的教科書系統(tǒng))，細(xì)胞系：經(jīng)過50代的傳代，細(xì)胞生長又停滯了，一些細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化，從而可以連續(xù)傳代而獲得永生，稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系與細(xì)胞系的區(qū)別：細(xì)胞系的遺傳質(zhì)量發(fā)生改變，具有癌細(xì)胞的特征，失去接觸和抑制，易于傳代培養(yǎng)。接觸抑制，概述：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程，動(dòng)物胚胎或幼小動(dòng)物組織和器官，制備細(xì)胞懸液，用胰蛋白酶切割和處理，10代細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中，40-50代細(xì)胞，傳代培養(yǎng)，無限傳代培養(yǎng)，單細(xì)胞，加入培養(yǎng)液稀釋，在10代傳代培養(yǎng)內(nèi)，遺傳物質(zhì)保持不變和正常，傳代約10-50代，生長緩慢以致

4、完全停止，并且一些核類型可能改變(遺傳物質(zhì)可能改變)。為什么用胰蛋白酶治療？在單獨(dú)的瓶中傳代培養(yǎng)，原代培養(yǎng)特征：細(xì)胞粘附，接觸抑制，持續(xù)傳代培養(yǎng)少量細(xì)胞獲得永生，細(xì)胞突變，遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，相當(dāng)于癌細(xì)胞。細(xì)胞系：一般來說，遺傳物質(zhì)沒有改變，細(xì)胞系：遺傳物質(zhì)已經(jīng)改變，原代培養(yǎng)、多細(xì)胞動(dòng)物和人類細(xì)胞都生活在內(nèi)部環(huán)境中。基于此，我們認(rèn)為：1 .內(nèi)部環(huán)境穩(wěn)態(tài)包括哪些方面？適宜的溫度、酸堿度、滲透壓、營養(yǎng)和氧氣。2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？無菌無毒的環(huán)境。想想吧。3.在體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)該提供什么物質(zhì)？我們?nèi)绾未_保一個(gè)與內(nèi)部環(huán)境相似的營養(yǎng)環(huán)境？介質(zhì)應(yīng)該是液體還是固體？充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、酸

5、堿度和氣體環(huán)境。加入動(dòng)物血清。介質(zhì)應(yīng)該是液體。思考：動(dòng)物血清的作用？它主要提供有利于細(xì)胞生長和增殖的激素和生長因子，或者提供合成培養(yǎng)基中缺乏的營養(yǎng)。確保細(xì)胞的順利生長和增殖。4.在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件下，胃蛋白酶能代替胰蛋白酶嗎？無菌、無毒環(huán)境，(加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)基)，營養(yǎng)，(葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清、微量元素等。)、溫度和酸堿度、溫度36.50.5、酸堿度7.27.4、氣體環(huán)境、O2和CO2(95%空氣和5%CO2)等。為了保證細(xì)胞的順利生長和增殖，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成分是葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清。(1)液體培養(yǎng)基和(2)動(dòng)物血清。大多數(shù)動(dòng)物體細(xì)

6、胞生活在液體環(huán)境中。植物組織培養(yǎng)怎么樣？無機(jī)鹽，蔗糖，維生素，生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，植物激素，成分比較：5。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：1的應(yīng)用。生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體2。在基因工程中的應(yīng)用主要作為受體細(xì)胞3。檢測有毒物質(zhì)，判斷某些物質(zhì)的毒性。細(xì)胞的生理、藥理和病理研究，如篩選抗癌藥物，1。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生變化的細(xì)胞有(a)細(xì)胞系，b細(xì)胞系，c原代細(xì)胞，d傳代細(xì)胞，2。動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：a .動(dòng)物細(xì)胞融合，b .單克隆抗體，c .胚胎移植，d. 3 .用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大多取自胚胎或出生不久的小動(dòng)物的器官或組織。主要原因是這種組織細(xì)胞很容易產(chǎn)生各種變異。

7、b有更強(qiáng)的通用性。獲得材料非常方便。d具有很強(qiáng)的分裂和增殖能力。D. 4 .動(dòng)物細(xì)胞工程中的下列工具是：(一)限制性內(nèi)切酶BDNA連接酶胰蛋白酶果膠酶。c，9。下圖顯示了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。請根據(jù)圖片回答：(1)動(dòng)物器官或組織放在容器a中，一般取自_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)先處理容器A中的動(dòng)物器官或組織，然后用酶處理，使細(xì)胞分散。這樣做的目的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行。瓶中的培養(yǎng)基有_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

8、 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _在此瓶中培養(yǎng)一段時(shí)間后，許多細(xì)胞因老化而死亡，此時(shí)的培養(yǎng)稱為_ _ _ _ _ _ _ _。 (4)為了將瓶B中的細(xì)胞裝入瓶C中，用_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _處理它們。(5)在C瓶中正常培養(yǎng)一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)所有細(xì)胞均死亡。原因是_ _ _

9、_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。幼小動(dòng)物的器官或組織、動(dòng)物胚胎、用剪刀切割的胰腺蛋白，使每個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液接觸，這便于獲得營養(yǎng)和排出代謝廢物、葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動(dòng)物血清、原代培養(yǎng)物、胰蛋白酶、細(xì)胞懸液、無癌變細(xì)胞、細(xì)胞全能性、細(xì)胞株、細(xì)胞系、植物或組織、培養(yǎng)結(jié)果、快速繁殖和培養(yǎng)。葡萄糖、動(dòng)物血清、蔗糖、植物激素、培養(yǎng)基的特定成分、液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、培養(yǎng)基性質(zhì)、細(xì)胞增殖、原理、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)、比較項(xiàng)目、植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)之間的比較、細(xì)胞分化程度、全能性恢復(fù)。第三，動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)，胚胎細(xì)胞核移植，體細(xì)胞核移植，細(xì)胞

10、分化程度，全能性恢復(fù)。通過核移植獲得的動(dòng)物被稱為克隆動(dòng)物。1.概念：動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核被轉(zhuǎn)移到去核的卵母細(xì)胞中，從而重組并發(fā)育成新的胚胎，最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。、低、易、高、難、卵母細(xì)胞、黑面母羊、白面母羊、乳腺細(xì)胞、核移植、早期胚胎、母羊子宮、胚胎移植、多利羊、分娩、妊娠、融合卵母細(xì)胞、2。體細(xì)胞核移植過程、使用去核的減數(shù)分裂第二中期細(xì)胞(中期M)。為什么？激活方法：激活目的：融合促進(jìn)方法：電刺激，胚胎移植到代孕受體，妊娠，分娩，體細(xì)胞核移植過程，供體：優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)奶牛，受體：普通奶牛(卵母細(xì)胞收集和培養(yǎng))，1。體積大，操作方便。2.含有促進(jìn)細(xì)胞核全能性表達(dá)的物質(zhì)和營養(yǎng)條件。有人說它有三個(gè)母親，對嗎

11、？核移植、胚胎移植、體細(xì)胞核移植過程(體細(xì)胞克隆動(dòng)物)，以及在核移植之前，為什么要去除受體卵母細(xì)胞的細(xì)胞核？為了使細(xì)胞核遺傳物質(zhì)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)移，動(dòng)物全部來自有價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。用于核移植的供體細(xì)胞通常選擇10代以內(nèi)的細(xì)胞。為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞保持正常的二倍體核型。3.核移植產(chǎn)生的克隆動(dòng)物能100%復(fù)制體細(xì)胞供體動(dòng)物嗎？為什么？不，克隆動(dòng)物的大部分脫氧核糖核酸來自供體細(xì)胞核，但細(xì)胞核外的少量脫氧核糖核酸(如線粒體脫氧核糖核酸)來自受體卵母細(xì)胞。在克隆羊多莉成功繁育之前，胚胎核移植技術(shù)已經(jīng)取得了很大進(jìn)展。事實(shí)上，多莉的克隆遵循了核移植技術(shù)中胚胎核移植的整個(gè)過程，但這并沒有降低多莉的意義，因?yàn)?/p>

12、她是世界上第一個(gè)通過體細(xì)胞核移植出生的動(dòng)物，這是克隆技術(shù)研究的一大突破。這一重大進(jìn)展意味著，像植物細(xì)胞一樣，分化的動(dòng)物細(xì)胞核在理論上也是全能的。4.動(dòng)物克隆有很多例子。為什么多莉聞名于世？2.體細(xì)胞核移植的應(yīng)用前景，你還擔(dān)心被禁用嗎？你還擔(dān)心找不到合適的器官移植捐贈(zèng)者嗎？我們不能再這樣下去了。看看我們的體細(xì)胞核移植技術(shù)。我們只需要從你身上取一小塊體細(xì)胞，通過核移植培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞，然后用胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成各種組織和器官。這些器官的組織相容性抗原和你的完全一樣。如果我們用這種器官進(jìn)行器官移植，根本不會(huì)有免疫排斥。毫不夸張地說，如果這項(xiàng)技術(shù)研究成熟了，改變胳膊和腿就像在未來為汽車換輪胎一樣。你明白

13、嗎？這不是幻想。偉大的前景就在眼前。你還在等什么？現(xiàn)在，是的，現(xiàn)在，加入生命科學(xué)的研究！4.體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景。加快家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群的培育。保護(hù)瀕危物種，增加幸存動(dòng)物的數(shù)量。克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器來生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)?？勺鳛楫惙N移植供體移植組織和器官。體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題胚胎移植動(dòng)物幼體的產(chǎn)率概率為10?？寺?dòng)物存在健康問題?？寺?dòng)物的食品安全是有爭議的。1.(浙江李忠，2009)動(dòng)物和植物成體的體細(xì)胞用于體外培養(yǎng)。以下陳述是正確的： (一)需要CO2培養(yǎng)箱，乙需要液體培養(yǎng)基，丙需要在無菌條件下進(jìn)行，丁可以反映細(xì)胞的全能性。動(dòng)物和植物成體體細(xì)胞的體外培養(yǎng)必須在無菌條件下

14、進(jìn)行。體外培養(yǎng)植物成體體細(xì)胞獲得新個(gè)體體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性，而體外培養(yǎng)動(dòng)物體細(xì)胞主要是獲得細(xì)胞代謝產(chǎn)物。答：C，7，(2008年寧夏高考)回答以下關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：(1)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到細(xì)胞表面時(shí)，細(xì)胞停止分裂和增殖，稱為細(xì)胞。此時(shí)，瓶壁上形成的細(xì)胞數(shù)為_ _ _ _ _ _ _ _ _。為了將貼壁細(xì)胞從瓶壁上分離，需要進(jìn)行酶處理，可用的酶是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，大部分細(xì)胞停止分裂，出現(xiàn)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _現(xiàn)象。然而，很少有細(xì)胞能夠持續(xù)增殖， 其中一些將變成_ _ _

15、 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，相互接觸，接觸抑制，胰島蛋白酶，單層，還原，不朽，還原，衰老，甚至死亡。 (3)當(dāng)使用一些大分子染料染色細(xì)胞時(shí)，觀察到死亡細(xì)胞被染色，而活細(xì)胞未被染色。原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(5)在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞通常在_ _ _ _ _ _的條件下保存。在這種情況下， _ _ _ _

16、 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (6)將細(xì)胞培養(yǎng)形成的皮膚組織移植給患者后，由于身體以_ _ _ _ _ _ _ _ _的形式攻擊移植的皮膚組織而發(fā)生排斥反應(yīng)。酶，因?yàn)樗劳黾?xì)胞的細(xì)胞膜已經(jīng)失去了它的選擇性滲透性，大分子染料可以進(jìn)入死亡細(xì)胞并染色，中低溫，代謝，抗原，6(海南高考)當(dāng)一個(gè)研究小組進(jìn)行藥物試驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物肝細(xì)胞被用作材料來確定藥物對體外培養(yǎng)細(xì)胞的毒

17、性。有兩種細(xì)胞可供培養(yǎng)：一種是肝腫瘤細(xì)胞，另一種是正常肝細(xì)胞。請回答以下關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的問題：(1)在相同的培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件下，將等量的甲細(xì)胞和乙細(xì)胞放入培養(yǎng)瓶中。一段時(shí)間后，觀察到細(xì)胞數(shù)量為_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。(2)在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，通常向合成培養(yǎng)基中加入適量的血清。原因是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)在含5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。血清可以補(bǔ)充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，維持培養(yǎng)基的酸堿度。(3)在兩種細(xì)胞的生長過程中，當(dāng)B細(xì)胞鋪滿瓶壁時(shí)，它們就生長了。藥物試驗(yàn)需要大

18、量細(xì)胞，兩種細(xì)胞經(jīng)常傳代，A細(xì)胞的傳代次數(shù)為_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _。如果肝細(xì)胞懸液是由動(dòng)物肝組織塊制成的，則需要用_ _ _ _ _ _消化。(4)為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中的細(xì)菌污染，可以在培養(yǎng)基中加入適量的_ _ _ _ _ _ _ _。(5)已知癌基因X的過表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。為了測試抗腫瘤藥物Y對A細(xì)胞生長的影響，可將A細(xì)胞分為兩組：A組和B組，其中_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _胰蛋白酶、聚、抗生素、終止劑、基因、蛋白質(zhì)、藥物Y、2.2.2動(dòng)物細(xì)胞融合物和單克隆抗體1。定義：指通過自然或人工方法將兩個(gè)或多個(gè)不同細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的過程。1.動(dòng)物細(xì)胞融合(也稱為細(xì)胞雜交)，2。原理：細(xì)胞膜流動(dòng)性，細(xì)胞a，細(xì)胞b，雜交細(xì)胞，滅活病毒，物理和化學(xué)方法，用滅活病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過程，病毒顆粒粘附于細(xì)胞表面，細(xì)胞膜被病毒顆粒穿透，細(xì)胞膜連接，細(xì)胞融合和雜交細(xì)胞形成，意義：細(xì)胞融合技術(shù)的突破人們獲得抗體的傳統(tǒng)方式是什么？將抗原注射到動(dòng)物體內(nèi)