熒光探針課件

1、熒光探針,熒光探針就是以熒光物質(zhì)作為指示劑,并在一定波長光的激發(fā)下使指示劑產(chǎn)生熒光,通過檢測所產(chǎn)生的熒光實(shí)現(xiàn)對(duì)被檢測物質(zhì)的定性或者定量分析。 熒光探針受到周圍環(huán)境的影響，使其發(fā)生熒光發(fā)射發(fā)生變化，從而使人們獲知周圍環(huán)境的特征或者環(huán)境中存在的某種特定信息。,什么是熒光探針？,熒光探針的優(yōu)點(diǎn),靈敏度高 選擇性好 使用方便 成本低 不需預(yù)處理 不受外界電磁場影響 遠(yuǎn)距離發(fā)光 特別是在分子生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域中有較廣泛的應(yīng)用。,熒光分子探針的結(jié)構(gòu),熒光分子探針通常由三部分組成： 識(shí)別基團(tuán)（receptor） 熒光基團(tuán)（fluorophore） 連接體部分（spacer）,識(shí)別基團(tuán)決定了探針分子

2、的選擇性和特異性，熒光基團(tuán)則決定了識(shí)別的靈敏度，而連接體部分則可起到分子識(shí)別樞紐的作用。,熒光基團(tuán)和識(shí)別基團(tuán)二者連接在同一個(gè)共軛體系中，熒光基團(tuán)是該體系中最基本的組成部分，一般為芳香族的稠環(huán)化合物，其目的是將分子識(shí)別轉(zhuǎn)換成不同形式的熒光信號(hào)，如熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)或減弱、熒光壽命的變化、光譜的移動(dòng)等。識(shí)別基團(tuán)是為了實(shí)現(xiàn)這一選擇性識(shí)別而合成的探針結(jié)構(gòu)單元，是決定熒光分子探針和被檢測體結(jié)合的靈敏度與選擇性的部分，通常也稱為受體。,香豆素作為熒光基團(tuán)的，鄰氨基苯硫醚作為識(shí)別基團(tuán)，兩者以席夫堿相連，加入鋅離子后，與硫醚上的硫原子、席夫堿上的氮原子及香豆素上的氧原子配位得到結(jié)構(gòu)2，抑制了席夫堿上c=n鍵的旋轉(zhuǎn)

3、，實(shí)現(xiàn)了熒光從無到有的變化,鋅離子熒光探針,新型熒光探針-分子信標(biāo),分子信標(biāo)是一種基于熒光能量轉(zhuǎn)移原理而設(shè)計(jì)的發(fā)夾型寡聚核酸熒光探針。它通過與核酸等靶分子相互作用后發(fā)生構(gòu)象的變化而產(chǎn)生熒光信號(hào)，對(duì)靶分子的檢測具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、適合于活體實(shí)時(shí)檢測等優(yōu)點(diǎn)。分子信標(biāo)技術(shù)的建立正是滿足了人們 迫切需要一種具有高靈敏度和高親和力的生物分子探針的需求，因而這種技術(shù)很快就廣泛地應(yīng)用于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)等諸多領(lǐng)域。,分子信標(biāo)是一種由寡聚核酸形成的發(fā)夾型分子。它包括一個(gè)環(huán)，環(huán)由與靶分子互補(bǔ)的核酸堿基序列組成；干為兩列互補(bǔ)的堿基序列，在分子信標(biāo)中，熒光基團(tuán)共價(jià)地連接在其干部分的一個(gè)末端，猝滅基團(tuán)也靠共價(jià)鍵連接

4、在干部分的另一末端。,分子信標(biāo)未與靶分子結(jié)合時(shí)，由于干部分兩列互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵連接，使得熒光基團(tuán)與猝滅基團(tuán)距離很近，熒光基團(tuán)將能量轉(zhuǎn)移給猝滅基團(tuán)而發(fā)生熒光猝滅；當(dāng)分子信標(biāo)與序列互補(bǔ)的靶分子結(jié)合時(shí)，環(huán)與靶序列雜交而形成了比干部分更長更穩(wěn)定的堿基對(duì)氫鍵連接，分子信標(biāo)發(fā)生構(gòu)型的變化，干部分被打開，從而使熒光基團(tuán)遠(yuǎn)離猝滅基團(tuán)，熒光基團(tuán)產(chǎn)生的熒光得到幾乎100%恢復(fù)，且所檢測到的熒光強(qiáng)度與溶液中靶標(biāo)的量成正比。,經(jīng)典分子信標(biāo)結(jié)構(gòu),分子信標(biāo)在生物分子檢測中的應(yīng)用,實(shí)時(shí)監(jiān)測聚合酶鏈反應(yīng) 基因變異的檢測 分子信標(biāo)生物傳感器 活細(xì)胞中rna的檢測 dna與蛋白質(zhì)相互作用研究,展望,隨著熒光探針技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,必然會(huì)給目前較為熱門的基因組學(xué)、蛋白質(zhì)