感染性疾病實(shí)驗(yàn)診斷PPT參考課件.ppt

1、感染性疾病實(shí)驗(yàn)診斷,珠江醫(yī)院微生物室,1,主要學(xué)習(xí)內(nèi)容及要求,掌握： 感染性疾病的常用實(shí)驗(yàn)檢測(cè)項(xiàng)目及其臨床 意義和評(píng)價(jià)；各系統(tǒng)病原體檢查的處理步驟； 熟悉： 各系統(tǒng)感染的常見(jiàn)病原體、常見(jiàn)疾病及病 原學(xué)檢測(cè)； 了解： 當(dāng)今感染病特點(diǎn)與感染類(lèi)型，常見(jiàn)醫(yī)院感 染病原體及特點(diǎn)。,2,第一節(jié) 概述,3,一、感染性疾病的定義,又稱感染病，是由微生物（細(xì)菌、病毒、 真菌）和寄生蟲(chóng)感染人體后機(jī)體組織細(xì)胞受到 不同程度的損害并出現(xiàn)一系列的臨床癥狀和體 征。其中，有傳染性的感染性疾病稱為傳染病。,4,1、微生物變異所出現(xiàn)的新亞型、亞性、不典型株及耐藥株已成為當(dāng)今主要的病原體； 2、感染患者多因免疫防御能力的下降感

2、染； 3、內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加，其中腸道菌群和口咽部菌群是最重要的內(nèi)源性感染源。,二、感染病特點(diǎn),5,1、按病原體分類(lèi)：可分為細(xì)菌、病毒和真菌； 2、按病原體來(lái)源分類(lèi)：可分為內(nèi)源性感染和外源性感染； 3、按疾病特征分類(lèi)：A.隱性感染（亞臨床感染）、 B.潛伏感染、C.顯性感染（包括急性感染、慢性感染、局部感染、全身感染）、帶菌狀態(tài)、不感染。,三、感染類(lèi)型,6,醫(yī)院感染的定義： 指來(lái)自醫(yī)院或醫(yī)療機(jī)構(gòu)的感染，包括在醫(yī)院獲 得出院后才發(fā)生的感染，但不包括入院前已存在的 感染 ，入院時(shí)已處于潛伏期的感染。 入院48小時(shí)后發(fā)生的感染通常認(rèn)為是醫(yī)院感染。,四、醫(yī)院感染,7,院感的特點(diǎn)： 1、院

3、感的感染鏈由感染源、傳播途徑和易感宿主構(gòu)成，細(xì)菌是主要病原體，且多為異位菌和耐藥菌；為此，采集時(shí)要防止人體定值菌及環(huán)境污染菌對(duì)標(biāo)本的污染；鑒定時(shí)要鑒定到種并提供藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果； 2、所有分離自無(wú)菌部位的菌株、重要的耐藥株和流行病學(xué)重要的菌株都要保存35年；,四、醫(yī)院感染,8,四、醫(yī)院感染,院感的特點(diǎn)： 3、當(dāng)院感發(fā)生率增加而超過(guò)該時(shí)期的預(yù)計(jì)值時(shí)就稱為爆發(fā)，爆發(fā)時(shí)應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)檢測(cè)。,9,五、一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè),感染病的實(shí)驗(yàn)診斷包括一般實(shí)驗(yàn)室檢查和 病原學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷，前者是感染病的首要 檢測(cè)項(xiàng) 目，具有初篩的作用 ，常見(jiàn)項(xiàng)目如下： 1、C反應(yīng)蛋白：鑒別診斷細(xì)菌或病毒感 染的首選指標(biāo)，還可判斷

4、抗生素療效和預(yù)后； 2、前降鈣素原：PCT的升高程度與感染嚴(yán) 重度及預(yù)后相關(guān)，在全身性細(xì)菌感染和膿血癥 的診斷方面有很高的臨床價(jià)值；,10,五、一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè),3、白細(xì)胞常規(guī)檢查： A.白細(xì)胞上升：急性細(xì)菌感染（如G+C）、 某些病毒感染（如傳單）； B.白細(xì)胞下降：G+b（如傷寒、副傷寒沙門(mén) 菌）、瘧疾、病毒感染； C.嗜酸性粒細(xì)胞：寄生蟲(chóng)??； D.單核細(xì)胞增多：亞急性心內(nèi)膜炎、瘧疾； E.淋巴細(xì)胞增多：病毒感染、某些桿（如 百日咳鮑特菌、結(jié)核桿菌、布氏桿菌）。,11,五、一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè),4.器官功能改變的檢測(cè)：不同系統(tǒng)感染導(dǎo)致檢測(cè)其器官功能改變的項(xiàng)目不一，如診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的還需做腦脊液常

5、規(guī)檢測(cè)。,12,第二節(jié) 感染性疾病的病原檢測(cè),13,一、標(biāo)本采集和運(yùn)輸,正確選擇、采集與運(yùn)輸標(biāo)本是病原學(xué)實(shí)驗(yàn) 診斷的第一步，留取標(biāo)本的質(zhì)量關(guān)系到實(shí)驗(yàn)診 斷的結(jié)果正確與否。 錯(cuò)誤的檢驗(yàn)結(jié)果主要是發(fā)生在檢驗(yàn)前，所 以對(duì)不合格的標(biāo)本要拒收并及時(shí)和臨床溝通！,14,二、病原檢測(cè)的方法,根據(jù)對(duì)與病原體相關(guān)的不同成分的檢測(cè)， 可以分為以下幾種檢測(cè)方法： 直接顯微鏡檢測(cè) 病原體分離培養(yǎng)和鑒定 病原體抗原檢測(cè) 病原體抗體檢測(cè) 病原體核酸檢測(cè) 細(xì)菌毒素的檢測(cè),15,1、直接顯微鏡檢查,包括以下四種方式：,16,2、病原體分離培養(yǎng)和鑒定,17,3、病原體抗原檢測(cè),用已知抗體，借助金標(biāo)免疫、熒光免疫、酶免 疫等技術(shù)

6、檢測(cè)未知的病原體抗原；,18,4、病原體抗體檢測(cè),用已知抗原，借助ELISA、凝集試驗(yàn)、膠體金 標(biāo)記EIA等技術(shù)檢測(cè)病原體的抗體,19,5、病原體核酸檢測(cè),病原體核酸檢測(cè)技術(shù)主要有PCR、實(shí)時(shí)熒 光定量PCR和DNA探針雜交技術(shù)； 評(píng)價(jià)：具有很高的敏感性，可用來(lái)判斷病 毒的活動(dòng)性感染，細(xì)菌的鑒定、耐藥基因檢測(cè) 和細(xì)菌分子流行病學(xué)調(diào)查，但容易造成假陽(yáng)性 或假陰性。,20,6、細(xì)菌毒素檢測(cè),內(nèi)毒素檢測(cè)：鱟實(shí)驗(yàn)是目前內(nèi)毒素檢測(cè)最敏 感、最常用的方法，有助于判斷細(xì)菌感染的 嚴(yán)重程度； 外毒素檢測(cè)：免疫法是檢測(cè)細(xì)菌外毒素最常 用的方法，可用來(lái)檢測(cè)艱難梭菌毒素A或B、 大腸埃希菌Vero細(xì)胞毒素、金葡的腸

7、毒素， 對(duì)抗生素相關(guān)性腸炎很有意義。,21,第三節(jié) 系統(tǒng)感染的實(shí)驗(yàn)診斷,22,一、血流感染,血流感染的定義： 病原生物通過(guò)各種途徑進(jìn)入血流，并通過(guò)血流 造成全身播散，引起各種臨床癥狀。 血流感染常見(jiàn)的病原菌包括： G+C如葡萄球菌、鏈球菌和腸球菌屬，G+b如腸 桿菌科細(xì)菌、銅綠假單胞菌和流感嗜血桿菌，白念 珠菌和脆弱桿菌也較常見(jiàn)。 檢測(cè)項(xiàng)目的選擇： 血常規(guī)+CRP+血培養(yǎng)鑒定,23,血流感染的標(biāo)本采集和運(yùn)送,血液標(biāo)本：盡量在抗菌藥物使用前采集，發(fā)熱寒戰(zhàn) 者在寒戰(zhàn)或體溫高峰前0.51h采集，也可以在寒 戰(zhàn)發(fā)熱1h后采集；一般24h內(nèi)周期性地收集23次血 標(biāo)本培養(yǎng)。 中心靜脈導(dǎo)管標(biāo)本：剪下5cm導(dǎo)

8、管尖端或近心端，及 時(shí)送到細(xì)菌室進(jìn)行半定量平板滾動(dòng)培養(yǎng)或定量培養(yǎng),24,血流感染的細(xì)菌檢驗(yàn)程序,25,血流感染的真菌檢驗(yàn)程序,26,血流感染的寄生蟲(chóng)檢驗(yàn),采血制作血涂片、固定與姬氏或瑞氏染色 可鏡檢找紅內(nèi)期階段的瘧原蟲(chóng)；對(duì)絲蟲(chóng)病、弓 形蟲(chóng)病和錐蟲(chóng)病的診斷也有價(jià)值。,27,血流感染檢查的臨床應(yīng)用,血培養(yǎng)陽(yáng)性：可確診血流感染，要及時(shí)涂片、革蘭 染色和鏡檢，報(bào)告到臨床并分離培養(yǎng)鑒定到種； 血培養(yǎng)陰性：血培養(yǎng)5d后仍未報(bào)陽(yáng)，可報(bào)告“培養(yǎng)5 天，未見(jiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)” 血培養(yǎng)應(yīng)注意假陽(yáng)性和一過(guò)性菌血癥，對(duì)比前后 分離的菌株有助于判別； 另外，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)BG的水平有助于判斷疾病的發(fā) 展和預(yù)后。,28,二、中樞神經(jīng)系

9、統(tǒng)感染,中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的定義： 指病原微生物侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)實(shí)質(zhì)、被膜及血 管等引起的急性或慢性炎癥性（或非炎癥）疾病，如 腦膜炎、病毒性腦炎和腦膿腫。 中樞感染的常見(jiàn)病原體： 腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、新 生隱球菌、乙型腦炎病毒、單詞皰疹病毒等； 檢測(cè)項(xiàng)目選擇： 血常規(guī)+CRP+腦脊液生化項(xiàng)目+病原學(xué)檢測(cè)（涂片鏡檢、培養(yǎng)鑒定、PCR、血清學(xué)試驗(yàn)等）,29,中樞感染的細(xì)菌和真菌檢驗(yàn)程序,30,中樞系統(tǒng)病毒和寄生蟲(chóng)檢測(cè)程序,病毒檢測(cè)程序：以血清學(xué)試驗(yàn)、核酸分子雜交 及核酸擴(kuò)增技術(shù)為主； 寄生蟲(chóng)檢測(cè)程序：取腦脊液沉渣涂片鏡檢，對(duì)阿米巴 滋養(yǎng)體、弓形蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、廣州管圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)有診斷

10、 意義。,31,中樞感染檢查臨床應(yīng)用,1、腦脊液分離培養(yǎng)陽(yáng)性：可確診中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。 抗酸染色查見(jiàn)抗酸桿菌，革蘭染色查見(jiàn)陰性雙球菌 ，墨汁染色查見(jiàn)透亮菌體和寬厚莢膜均可報(bào)告。 2、血清學(xué)有助于診斷，但要區(qū)分假陽(yáng)性和假陰性； 3、PCR對(duì)腸道病毒引起的病毒性腦膜炎很有意義； 4、病毒性腦炎確診有賴于腦活檢病理發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)包 涵體、病毒核酸或腦脊液檢測(cè)病毒抗原或抗體。,32,三、呼吸系統(tǒng)感染,呼吸系統(tǒng)感染：包括急性上呼吸道感染、急性氣管 支氣管炎、慢性支氣管炎和肺炎。 常見(jiàn)病原體： 急性上呼吸道感染90%由病毒引起， 細(xì)菌則以溶血性鏈球菌多見(jiàn)；肺炎80%由細(xì)菌引起 ，以肺炎鏈球菌、金葡、肺炎克雷伯

11、菌、流感嗜血 桿菌、肺炎支原體和肺炎衣原體多見(jiàn)。 檢測(cè)項(xiàng)目選擇：血常規(guī)+CRP+痰培養(yǎng)鑒定+免疫學(xué) 及核酸檢測(cè),33,呼吸道標(biāo)本采集和運(yùn)送,呼吸道的標(biāo)本包括鼻咽拭子、痰、通過(guò)氣管收 集的標(biāo)本（氣管內(nèi)吸出物、氣管鏡采集法），后者是 理想標(biāo)本。 對(duì)于合格的痰標(biāo)本才接收,當(dāng)白細(xì)胞25個(gè)/LP， 鱗狀上皮細(xì)胞10個(gè)/LP,應(yīng)當(dāng)拒收； 下呼吸道標(biāo)本中一旦懷疑肺炎支原體、軍團(tuán)菌、 雙相型真菌、結(jié)核分支桿菌等即可認(rèn)為是合格標(biāo)本而 直接進(jìn)行病原鑒定。,34,呼吸系統(tǒng)細(xì)菌、真菌檢驗(yàn)程序,35,呼吸系統(tǒng)病毒和寄生蟲(chóng)檢驗(yàn),病毒檢驗(yàn)：主要采用病毒培養(yǎng)、免疫學(xué)和分子生物 學(xué)檢測(cè)方法。在流感季節(jié)，應(yīng)對(duì)免疫力正常成人進(jìn) 行

12、流感病毒的檢測(cè)；免疫力有缺陷的成人，應(yīng)采用 細(xì)胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)方法檢測(cè)；小于2歲的嬰幼兒 應(yīng)進(jìn)行呼吸道合胞病毒的檢測(cè)；小于10的兒童應(yīng)進(jìn) 行流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病 毒的檢測(cè)； 寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)：痰液鏡檢對(duì)溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體、 衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)、糞類(lèi)圓線蟲(chóng)幼蟲(chóng)、蛔蚴、鉤蚴等檢 出有一定的意義。,36,呼吸系統(tǒng)感染檢查的臨床應(yīng)用,痰涂片抗酸染色：對(duì)結(jié)核分枝桿菌有診斷意義； 痰中有顆粒狀、菌塊和干酪樣物質(zhì)：對(duì)放線菌病和 曲霉菌有診斷意義； 檢測(cè)出肺炎支原體、軍團(tuán)菌、雙相型真菌、結(jié)核分 枝桿菌：可認(rèn)為是肺部感染的病原體； 檢出與正常菌相同的菌：涂片有大量中性粒細(xì)胞， 培養(yǎng)后涂片鏡檢也為優(yōu)

13、勢(shì)菌則由診斷意義； 有感染癥狀、膿臭痰但普通細(xì)菌培養(yǎng)為陰性：提示 厭氧菌感染。,37,四、胃腸系統(tǒng)感染,胃腸道感染：是以嘔吐、腹痛、腹瀉為臨床特征的 常見(jiàn)感染病，有食物中毒、霍亂、傷寒、細(xì)菌性痢 疾、結(jié)腸炎、胃炎與抗生素相關(guān)性腹瀉等。 常見(jiàn)病原菌：A.侵襲性細(xì)菌：沙門(mén)菌、志賀菌（A 群）、空?qǐng)鰪澢⒋竽c埃希菌（EPEC、EIEC） 、幽門(mén)螺桿菌等；B.細(xì)菌毒素性細(xì)菌：霍亂弧菌、 志賀菌（B、C、D群），大腸埃希菌（ETEC、 EHEC、EAggEC）等；C.病毒：輪狀病毒、杯狀 病毒等；D.真菌：白念珠菌、曲霉等。 檢測(cè)項(xiàng)目選擇：血常規(guī)+免疫學(xué)+PCR/RTPCR+病 原體的分離培養(yǎng)鑒定,3

14、8,胃腸道標(biāo)本采集和運(yùn)送,應(yīng)取膿血或粘液糞便置于清潔容器中盡快送檢 （不能超過(guò)2h），然后接種于選擇培養(yǎng)基上； 對(duì)于傳染性腹瀉患者需3次送檢糞便進(jìn)行培養(yǎng)； 疑為寄生蟲(chóng)感染者，要盡快運(yùn)送水樣便以保持 原蟲(chóng)滋養(yǎng)體活力，若不能及時(shí)送檢，應(yīng)用含10%甲 醛和聚乙烯醇的小螺口塑料容器保存。,39,胃腸道細(xì)菌檢驗(yàn)程序,40,胃腸道病毒和寄生蟲(chóng)檢驗(yàn),病毒檢驗(yàn)：主要采用ELISA或乳交凝集試驗(yàn)檢測(cè)病 毒抗原、用核酸雜交、PCR和RTPRC法檢測(cè)病毒 核酸；血清學(xué)多用于流行病學(xué)調(diào)查。 寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)：通過(guò)檢測(cè)糞便中寄生蟲(chóng)的蟲(chóng)卵、幼蟲(chóng) 、滋養(yǎng)體等對(duì)寄生蟲(chóng)感染進(jìn)行診斷。,41,胃腸道感染檢查的臨床應(yīng)用,糞便的直接鏡檢意

15、義不大，胃腸道感染的診斷 有賴于細(xì)菌分離與培養(yǎng)； 胃粘膜活檢標(biāo)本直接鏡檢對(duì)幽門(mén)螺桿菌較大的 意義； 鏡檢觀察各菌落的數(shù)量與球菌與桿菌的比例對(duì) 診斷抗生素相關(guān)性腹瀉有診斷價(jià)值； 細(xì)胞毒素試驗(yàn)檢測(cè)艱難梭菌的毒素是診斷引起 抗生素相關(guān)性腹瀉的金標(biāo)準(zhǔn)。,42,五、肝臟感染,肝臟感染：是由病毒、細(xì)菌和其他病原體引起的肝 臟炎性損傷，主要包括肝炎和肝膿腫。 常見(jiàn)病原體：肝炎主要由病毒和毒素所致，包括 HAV、HBV、HCB、HDV、HEV和CMV；肝膿腫以 細(xì)菌性多見(jiàn)，主要是化膿性細(xì)菌，阿米巴肝膿腫也 較為常見(jiàn)。 檢測(cè)項(xiàng)目選擇： 血、尿、便、常規(guī)+肝功能生化+PCR+病原體 涂片分離培養(yǎng)鑒定,43,肝臟感

16、染標(biāo)本采集和運(yùn)送,肝炎病毒是肝臟感染的主要病原體，血清是檢測(cè) 肝臟病毒的最常用標(biāo)本； 細(xì)菌性肝膿腫多以兼性厭氧菌與厭氧菌混合感染 為主，應(yīng)注意厭氧菌的標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢驗(yàn)方法,44,肝臟感染的病毒檢驗(yàn)程序,45,肝臟感染細(xì)菌和真菌檢驗(yàn),抽取肝膿腫的膿液，涂片、染色，顯微鏡檢查， 再根據(jù)鏡檢結(jié)果對(duì)標(biāo)本中可能的細(xì)菌或真菌種類(lèi)進(jìn)行 初步估計(jì)；然后行病原體分離培養(yǎng)，根據(jù)菌落形態(tài)、 涂片染色鏡檢和生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定； 阿米巴肝膿腫可在肝膿腫的膿液中查見(jiàn)阿米巴包 囊和滋養(yǎng)體。,46,肝臟感染檢查的臨床應(yīng)用,病毒性肝炎 的診斷主要檢查病毒的抗原抗體， 免疫學(xué)檢測(cè)主要有ELISA、免疫膠體金法、免疫熒 光法等方

17、法； HAV和HEV的診斷都主要依賴lgM，HBV主要檢 查“乙肝兩對(duì)半”，HCV主要用ELISA初篩，用免 疫印跡法確診,HDV多用ELISA法檢測(cè)； 另外，PCR法也較常應(yīng)用，以熒光實(shí)時(shí)定量 PCR應(yīng)用最為廣泛。,47,六、泌尿系統(tǒng)感染,泌尿系統(tǒng)感染：是由于大量微生物在泌尿系統(tǒng)中生 長(zhǎng)繁殖而引起的泌尿系統(tǒng)炎癥，分為上尿路感染和 下尿路感染。絕大多數(shù)是單一病原體感染，培養(yǎng)3 種細(xì)菌及念珠菌的多為污染所致。 常見(jiàn)病原體：大腸埃希菌、腸球菌屬、奇異變形桿 菌、銅綠假單胞菌和凝固酶陰性葡萄球菌。 檢測(cè)項(xiàng)目選擇：尿常規(guī)+尿沉渣鏡檢、分離培養(yǎng) 尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送：多以中段尿?yàn)橹?，?duì)于厭氧 菌可采用膀胱

18、穿刺法收集、無(wú)菌厭氧小瓶運(yùn)送；若 是乳糜尿，需加等量乙醚震蕩再進(jìn)行寄生蟲(chóng)檢查。,48,泌尿系統(tǒng)細(xì)菌和真菌檢驗(yàn)程序,49,泌尿系統(tǒng)感染檢查的臨床應(yīng)用,在臨床診斷的基礎(chǔ)上，符合以下4條中的1條即可診 斷為泌尿系統(tǒng)感染： 1、膀胱穿刺尿培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)103CFU/ml； 2、清潔中段尿或?qū)蛄羧∧蛞号囵B(yǎng)G+C菌數(shù)104 CFU/ml、G+b菌數(shù)105CFU/ml； 3、尿沉渣用相差顯微鏡檢查（x400）在30個(gè)視野 中有過(guò)半都能見(jiàn)到細(xì)菌； 4、無(wú)癥狀性菌尿癥患者在近期（1w）有內(nèi)鏡檢查或留置導(dǎo)尿史的，尿液培養(yǎng)G+C菌數(shù)104 CFU/ml、G+b菌數(shù)105CFU/ml；,50,七、皮膚及軟組織感染,當(dāng)皮

19、膚屏障受損，外界環(huán)境中的微生物即可通過(guò) 破損的皮膚侵入引起皮膚和軟組織感染，或發(fā)生全 身感染時(shí)，某些微生物也可以經(jīng)血液擴(kuò)散至皮膚或 皮下組織引起感染。 常見(jiàn)病原體：包括金黃色葡萄球菌、化膿性鏈 球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和 皮膚念珠菌等。 檢測(cè)項(xiàng)目選擇：細(xì)菌感染多采用膿性分泌物涂 片染色和分離鑒定；病毒和寄生蟲(chóng)則主要依賴臨床 表現(xiàn)。,51,皮膚及軟組織感染標(biāo)本采集和運(yùn)送,1、采集時(shí)，首先要對(duì)皮膚表面進(jìn)行消毒； 2、開(kāi)放性膿腫要用無(wú)菌棉拭采取膿液及病灶深部分泌物，封閉性膿腫則以無(wú)菌干燥注射器穿刺抽?。?3、懷疑是厭氧菌感染者，取膿液后要立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無(wú)菌橡皮塞送檢； 4、用于病毒檢測(cè)的組織標(biāo)本應(yīng)放在有滅菌鹽水紗布的培養(yǎng)皿內(nèi)或病毒運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)運(yùn)送，勻漿、離心、過(guò)濾后做病毒分離鑒定。,52,皮膚及軟組織細(xì)菌真菌檢驗(yàn)程序,53,皮膚及軟組織細(xì)菌真菌檢驗(yàn)程序,54,皮膚及軟組織感染檢驗(yàn)臨床應(yīng)用,1、鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲與孢子即可診斷真菌感染，若沒(méi)找到而臨床