4039 雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測(cè)定　液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法

1、ICS11.220B 41DB37山東省地方標(biāo)準(zhǔn)DB37/T 40392020雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法Determination of fipronil and its metabolite residues in chicken by liquid chromatography tandem mass spectrometry2020 - 07 - 09發(fā)布2020 - 08 - 09實(shí)施山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布DB37/T 40392020目次前言II1范圍12規(guī)范性引用文件13試驗(yàn)原理14試劑或材料15儀器設(shè)備26試樣的制備27試驗(yàn)步驟27.1提取27.2凈化

2、27.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備27.4測(cè)定28數(shù)據(jù)處理49檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度49.1準(zhǔn)確度49.2精密度4附錄A（資料性附錄）氟蟲腈及其代謝物參考質(zhì)量色譜圖5前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.12009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所、威海市畜牧業(yè)發(fā)展中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：尹伶靈、陳玲、李有志、楊修鎮(zhèn)、劉少寧、魏秀麗、牛華星、張呈軍、陳志強(qiáng)、趙國清。6雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞肉中氟蟲腈及其代謝物（氟甲腈、氟蟲腈硫醚和氟蟲腈砜）殘留量檢測(cè)的液相色譜

3、串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞肉中氟蟲腈及其代謝物殘留量的檢測(cè)。本方法檢出限為0.5 g/kg，定量限為2.0 g/kg。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。3 試驗(yàn)原理雞肉中的氟蟲腈及其代謝物經(jīng)乙腈提取后，加入氯化鈉進(jìn)行分層，經(jīng)PRiME HLB固相萃取柱凈化后，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜負(fù)離子模式測(cè)定，基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純。4.1 水：符合國標(biāo)GB/T 6682一級(jí)

4、水的規(guī)定。4.2 乙腈：色譜純。4.3 氯化鈉。4.4 20 %乙腈水溶液：準(zhǔn)確量取乙腈（4.2）20 mL，加水稀釋至100 mL。4.5 氟蟲腈對(duì)照品、氟蟲腈砜對(duì)照品、氟蟲腈硫醚對(duì)照品和氟甲腈對(duì)照品，含量95 %。4.6 氟蟲腈及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取氟蟲腈對(duì)照品、氟蟲腈砜對(duì)照品、氟蟲腈硫醚對(duì)照品和氟甲腈對(duì)照品（4.5）各10 mg，分別置于100 mL容量瓶中，用乙腈（4.2）配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100 g/mL)，轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中后，避光儲(chǔ)存于冰箱中(-20 )備用，有效期一年。4.7 氟蟲腈及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別精密吸取氟蟲腈和3種代謝物標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.6）各100

5、 L，置于同一10 mL容量瓶中，用20 %乙腈水溶液（4.4）稀釋至刻度搖勻，配制成濃度均為1 g/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，避光0 4 保存，有效期2周。4.8 PRiME HLB固相萃取柱1) 非商業(yè)性聲明：本試驗(yàn)是利用此固相萃取柱做的凈化處理，此處列出的固相萃取柱僅是為了提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同型號(hào)的固相萃取柱。)或性能相當(dāng)。4.9 有機(jī)濾膜：0.22 m。5 儀器設(shè)備5.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配電噴霧離子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g、0.01 g。5.3 均質(zhì)機(jī)。5.4 渦旋混合器。5.5 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4 000 r/min

6、。6 試樣的制備取適量新鮮或冷藏的雞肉，均質(zhì)機(jī)攪碎，-20 以下保存。7 試驗(yàn)步驟7.1 提取稱取試樣2 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管內(nèi)，加水10 mL，渦旋1 min。再加乙腈（4.2）10 mL，振蕩10 min。然后加入氯化鈉4 g（4.3），劇烈振搖1 min，4 000 r/min離心5 min。 7.2 凈化取上清液0.5 mL淋洗HLB固相萃取柱，流出液棄去。再加入上清液1.5 mL，過HLB固相萃取柱，收集流出液備用。精密吸取上述流出液0.5 mL加水定容至1.0 mL，0.22 m濾膜過濾后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。7.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備用基質(zhì)液分別制備成

7、系列濃度為：0.1 g/L、0.2 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。7.4 測(cè)定7.4.1 色譜參考條件色譜柱：C18 50 mm2.1 mm，粒徑1.7 m，或相當(dāng)者。流動(dòng)相：流動(dòng)相A：乙腈；流動(dòng)相B：水。流速：0.2 mL/min。進(jìn)樣量：2 L。柱溫：35 。流動(dòng)相梯度洗脫條件見表1。表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí)間min流速mL/minA相%B相%00.220802.00.27030表1流動(dòng)相梯度洗脫條件（續(xù)）時(shí)間min流速mL/minA相%B相%3.50.290104.50.220806.00

8、.220807.4.2 質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源。掃描模式：負(fù)離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)離子檢測(cè)（MRM）。脫溶劑氣、錐孔氣、碰撞氣均為高純氮或其他合適氣體。錐孔電壓、碰撞能量等應(yīng)優(yōu)化至最優(yōu)靈敏度。監(jiān)測(cè)離子參數(shù)情況見表2。表2 氟蟲腈及其代謝物的定性定量離子對(duì)以及錐孔電壓、碰撞能量藥 物定性離子對(duì)m/z定量離子對(duì)m/z錐孔電壓V碰撞能量eV氟蟲腈435.1329.9435.1329.9818435.1249.926氟蟲腈砜451281.7451281.7263245141524氟蟲腈硫醚419.1262419.1262834419.1383.116氟甲腈387350.9387350.9

9、2014387281.9487.4.3 定性測(cè)定通過試樣色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液各色譜峰的特征離子相對(duì)照定性。試料與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2.5 %；試料特征離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度偏差不超過表3的規(guī)定，則可判斷試料中存在氟蟲腈及其代謝物殘留。表3 定性測(cè)定時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（%）5020 至 5010 至 2010允許的相對(duì)偏差（%）202530507.4.4 定量測(cè)定取基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液和試料溶液，按外標(biāo)法，以峰面積定量，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液及試料溶液中的待測(cè)物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液中特征離子參考質(zhì)量色譜圖參見附錄A。8 數(shù)據(jù)處理試料中待測(cè)物的殘留量（g/kg）按式（1）計(jì)算：(1)式中：X 供試試料中待測(cè)物殘留量，單位為微克每千克（g/kg）；CS 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)物的濃度，單位為微克每升（g/L）；A 供試試料中待測(cè)物的色譜峰面積；AS 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液中待測(cè)物的色譜峰面積；V 試料溶液定容體積，單位為毫升（mL）；m 供試試料質(zhì)量，單位為克（g）；20樣品的稀釋倍數(shù)。注： 測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。9 檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度和精密度9.1 準(zhǔn)確度本方法在2.0 g/kg100 g/k