中國藥典微生物培訓(xùn)培養(yǎng)基的配制及質(zhì)量控制.ppt

1、,培養(yǎng)基的配制及質(zhì)量控制 2010年06月,一、培養(yǎng)基的配制,培養(yǎng)基是絕大多數(shù)微生物試驗的基礎(chǔ)。因此，培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物試驗成功與否的關(guān)鍵因素。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質(zhì)量控制試驗是提供優(yōu)質(zhì)培養(yǎng)基的保證。,培養(yǎng)基可按處方制備也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基除附有處方和使用說明外還應(yīng)注明有效期、貯存條件、適用性試驗的質(zhì)控菌株和用途。配制時應(yīng)按使用說明上的要求操作，受潮結(jié)塊不能使用，以確保培養(yǎng)基的質(zhì)量符合要求。,配制培養(yǎng)基使用的容器應(yīng)是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角燒瓶、刻度吸管、試管、培養(yǎng)皿等。使用的器皿應(yīng) 洗凈，用蒸餾水沖凈，烘干后方可使用。禁

2、用金屬容器如鐵、銅、鋁容器，避免金屬離子與培養(yǎng)基成分結(jié)合，生成有害物質(zhì)，影響細(xì)菌生長。,培養(yǎng)基若于非潔凈的玻璃器皿中制備，可能導(dǎo)致抑菌物質(zhì)進(jìn)入培養(yǎng)基中。抑菌物質(zhì)可能是殘留的玻璃器皿清潔用的清潔劑或之前玻璃器皿所盛裝的物質(zhì)。因此。應(yīng)使用純化水完全沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質(zhì)的殘留，并進(jìn)行清除污物的確認(rèn)。, 配制培養(yǎng)基最常用的溶劑是純化水，特殊情況下需要用去離子水和蒸餾水，對熱敏感的培養(yǎng)基應(yīng)用滅菌水和無菌容器配制與分裝，配制時若需加熱助溶應(yīng)注意溫度不要過高,、對配制培養(yǎng)基的過程作詳細(xì)的記錄，記錄內(nèi)容包括：配制日期、培養(yǎng)基名稱、成分、配制數(shù)量、質(zhì)量監(jiān)控結(jié)果等進(jìn)行全面詳細(xì)記錄。,1、培養(yǎng)基的制備

3、方法,稱量 配制 分裝 矯正pH,2、培養(yǎng)基的滅菌,滅菌方法及條件不當(dāng)可直接影響培養(yǎng)基質(zhì)量，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應(yīng)通過無菌性試驗和促生長試驗進(jìn)行驗證，驗證方法同中國藥典2010年版附錄滅菌法。,不同種類培養(yǎng)基應(yīng)采用不同的滅菌方法，配制好的培養(yǎng)基滅菌一般多用流通蒸汽滅菌和濾膜過濾除菌. 流通蒸汽滅菌 濾膜過濾除菌,3、培養(yǎng)基的貯藏,商品化培養(yǎng)基應(yīng)根據(jù)使用說明書上的要求進(jìn)行儲存。培養(yǎng)基標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)有批號，生產(chǎn)日期、有效期及培養(yǎng)基的有關(guān)特性。所采用的保藏和運輸條件應(yīng)使培養(yǎng)基最低限度失去水分并提供機械保護(hù)。,配制好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225避光的環(huán)境。若保存于非密閉容器中，一般在三周內(nèi)使用；若保存于密閉容

4、器中，一般在一年內(nèi)使用，瓊脂培養(yǎng)基不得在0或0以下存放，防止冷凍破壞凝膠特性。若培養(yǎng)基要長期保存，瓊脂平板應(yīng)密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分流失。,培養(yǎng)基滅菌后應(yīng)立即取出，不得儲藏在高壓 菌器中，避免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。 制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225、避光的環(huán)境。 保存于密閉容器中，可防止水分流失以延長保存時間。,固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化應(yīng)在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進(jìn)行，只允許一次，融化的培養(yǎng)基應(yīng)放在4550的水浴中，不得超過8小時。,二、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制,目前，許多實驗室為了操作方便，多使用脫水 培養(yǎng)基進(jìn)行配制或購買已制備好的分裝于培養(yǎng)皿 或玻璃容器的商業(yè)培養(yǎng)基。 經(jīng)實驗室配制或由生產(chǎn)廠生

5、產(chǎn)的培養(yǎng)基的質(zhì)量高度依賴于其如何制備，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復(fù)蘇，從而影響試驗結(jié)果的可靠性。,所有配制好的培養(yǎng)基均應(yīng)進(jìn)行驗證，驗證方法參照中國藥典2010年版附錄無菌檢查或微生物限度檢查項下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是外觀、性狀、pH、促生長試驗、定期的穩(wěn)定性檢查以及培養(yǎng)基有效期的確定。,培養(yǎng)基的有效期是指已通過促生長試驗的培養(yǎng)基在整個有效期內(nèi)均需符合這些相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)。每批培養(yǎng)基儲存的時間將取決于一定存放條件（包括容器和密封性）的培養(yǎng)基組成成分的穩(wěn)定性。,當(dāng)批培養(yǎng)基不符合促生長試驗，應(yīng)尋找造成不合格的原因。這個調(diào)查包括采取適當(dāng)?shù)男袆右苑乐箚栴}的重復(fù)出現(xiàn)

6、。如果未找到原因或還沒有解決有關(guān)培養(yǎng)基的促生長問題，那么任何不符合要求的批次均不能使用。,一些用于進(jìn)一步鑒定微生物的診斷試劑，如革蘭染色、氧化酶試驗試劑等。它們與培養(yǎng)基相似點可能是質(zhì)量控制試驗。在試劑用于未知樣品鑒定前，選擇正確的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌，按使用說明上的要求進(jìn)行質(zhì)控試驗。,用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基應(yīng)特別小心防護(hù)。,1、測定PH值 2、一般性狀 制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應(yīng)檢查 固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基 其他,3、培養(yǎng)基的促生長和抑制性能試驗,無菌檢查用培養(yǎng)基 適用性試驗 無菌性檢查和靈敏度檢查,靈敏度檢查,參照 2010年版中國藥典中培養(yǎng)基靈敏度檢查試驗,微生物限度檢查(計數(shù)培養(yǎng)基) 培養(yǎng)基的適

7、用性檢查 促生長、抑制及指示能力檢查,菌種 大腸埃希菌 CMCC（B）26003 金黃色葡萄球菌 CMCC（B）26003 枯草芽孢桿菌CMCC(B)63501 白色念珠球菌 CMCC（B）98001 黑曲霉 CMCC（F）98003,菌懸液制備后在室溫下放置應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在28可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在 28，在驗證過的貯存期內(nèi)使用。,結(jié)果判定,被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不得小于對照培養(yǎng)基菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。,控制菌檢查用培養(yǎng)基的適用性檢查,控制菌檢查用培養(yǎng)基的促生長、抑制及指示能力檢查 控

8、制菌檢查 培養(yǎng)基 特性 試驗菌株 大腸埃希菌 膽鹽乳糖 促生長能力 大腸埃希菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 MUG 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 曙紅亞甲藍(lán) 或麥康凱 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 大腸菌群 乳糖膽鹽 促生長能力 大腸埃希菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 乳糖發(fā)酵 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌 曙紅亞甲藍(lán) 或麥康凱 促生長能力+指示能力 大腸埃希菌,沙門菌 營養(yǎng)肉湯 促生長能力 乙型付傷寒沙門菌 四硫磺酸鈉亮綠 促生長能力 乙型付傷寒沙門菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 膽鹽硫乳瓊脂或沙門、 志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基 促生長能力+指示能力 乙型付傷寒沙門菌 曙紅亞甲藍(lán)瓊脂 或麥康凱

9、瓊脂 培養(yǎng)基 促生長能力+指示能力 乙型付傷寒沙門菌 三糖鐵瓊脂 培養(yǎng)基 指示能力 乙型付傷寒沙門菌 銅綠假單 膽鹽乳糖 促生長能力 銅綠假單胞菌 胞菌 抑制能力 金黃色葡萄球菌 溴化十六烷基三 促生長能力 銅綠假單胞菌 甲銨瓊脂 抑制能力 大腸埃希菌 綠膿菌素測定 用培養(yǎng)基 促生長能力+指示能力 銅綠假單胞菌,金黃色葡 亞碲酸鹽肉湯 促生長能力 金黃色葡萄球菌 萄球菌 抑制能力 大腸埃希菌 卵黃氯化鈉瓊脂促生長能力+指示能力 金黃色葡萄球菌 或甘露醇鹽瓊脂 抑制能力 大腸埃希菌 梭菌 梭菌增菌培養(yǎng)基 促生長能力 生孢梭菌 哥倫比亞瓊脂 促生長能力 生孢梭菌 白色念 沙氏葡萄糖肉湯 促生長能力 白色念珠菌 珠菌 沙氏葡萄糖瓊脂 促生長能力+指示能力 白色念珠菌 念珠菌顯色培養(yǎng)基 促生長能力+指示能力 白色念珠菌 吐溫80玉米瓊脂 促生長能力+指示能力 白色念珠菌,檢查方法,1、液體培養(yǎng)基促生長能力檢查 2、固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 3、培養(yǎng)基抑制能力