徐康森 最新2010版藥典生化藥匯總.ppt

1、2010版藥典生化藥總結(jié)報告,徐康森,第一部分:生化藥的基本概況 第二部分:2010年版中國藥典生化藥歸總,第一部分：生化藥的基本概況,1、生化藥的定義 2、生化藥的發(fā)展,1、生化藥的定義,生化藥物是我國醫(yī)藥產(chǎn)品的一個大類。 生化藥主要從動、植物及微生物發(fā)酵提取的、化學(xué)合成、生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物重組技術(shù)制得的一類藥品 尤其對于嚴重危害人類健康和生命的疾病，如心腦血管病、癌癥、糖尿病和病毒疾患等有其獨特的治療效果。深受人民的歡迎和重視。,2、生化藥的發(fā)展歷程,醫(yī)藥行業(yè)的發(fā)展?fàn)顩r,第二部分：2010年版中國藥典生 化藥歸總,為貫徹黨的十七大精神，落實科學(xué)發(fā)展觀，建國以來的第九版藥典中國藥典

2、2010年版，已完成增修訂任務(wù)，目前已經(jīng)正式出版發(fā)行。,宗旨：,提高藥典質(zhì)量， 應(yīng)用高新技術(shù)， 解決安全隱患， 趕超國際水平。,本屆藥典生化藥修訂工作的特點,時間短 任務(wù)重 難度大 要求高,中國藥典2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)品種數(shù)匯總,一、氨基酸及其衍生物類,1、基本介紹 該類品種是組成蛋白質(zhì)的基本單位。組成人體蛋白質(zhì)的氨基酸只有20種左右，均為L-a-氨基酸（除甘氨酸外）。因為是人類健康的基本營養(yǎng)成分，故在救死扶傷中扮演十分重要角色。,臨床上除單方使用aa外，其還是復(fù)方aa注射液的主要組成成分。臨床上常用的氨基酸注射液有3aa、6aa、9aa、11aa、15aa、17aa、18aa（I-II）等。

3、 從1985年銷售100萬瓶，到2008年銷售量已經(jīng)達到2億萬瓶，市場潛力很大，前景美好。,2、2010年版中國藥典收載的氨基酸及其衍生物類品種,?；撬峒捌渲苿ㄆ?、散、顆粒、膠囊、滴眼液）；鹽酸精氨酸及其制劑（片、注射液）；色氨酸；谷氨酸（鈉）及其制劑（片、注射液、鉀注射液）；組氨酸及鹽酸組氨酸；脯氨酸；精氨酸；酪氨酸；絲氨酸；異亮氨酸；亮氨酸；賴氨酸（鹽酸、醋酸、芐達）；纈氨酸；門冬酰胺（片）、甘氨酸（沖洗液）、胱氨酸（片、鹽酸）、丙氨酸、甲硫氨酸（片）、蘇氨酸、苯丙氨酸、谷丙甘氨酸膠囊、乙酰半胱氨酸（滴眼液、顆粒）、乙酰谷氨酸（注射液）、羧甲司坦（口服溶液、片、顆粒）等53個品種。,3、

4、收載的氨基酸及其衍生物類藥品基本特點,幾乎包含了國內(nèi)外所有氨基酸類產(chǎn)品 方便臨床使用，該類產(chǎn)品呈現(xiàn)制劑系列化特點，如固體制劑包括：片、膠囊、顆粒、散、口含片；液體制劑有：口服溶液、滴眼液、注射液等,4、品種增修訂情況,增訂、修訂和統(tǒng)一有關(guān)檢查項目內(nèi)容、使得該類標(biāo)準(zhǔn)基本與國外同類標(biāo)準(zhǔn)接軌。,二、核酸及其衍生物類,1、簡介： 核酸是生命的最基本物質(zhì)，存在于一切生物細胞內(nèi)，DNA只要存在細胞的染色體中，RNA主要存在細胞的微粒體中。,2、2010年版藥典收載的核酸及其衍生物類藥品的品種,三磷酸腺苷二鈉、注射用ATP（注射液）、胞磷膽堿鈉（注射用、注射液）、肌苷（口服溶液、片、注射液、膠囊、注射用）、

5、環(huán)磷腺苷（注射用）、鹽酸阿糖胞苷（注射用）、腺苷鈷胺（片）、更昔洛韋（注射液、注射用）、利巴韋林原料及其制劑、阿昔洛韋原料及其制劑、泛昔洛韋（片、膠囊）、鹽酸伐昔洛韋（片、膠囊）等51個品種。,3、收載的核酸及其衍生物類藥品品種的基本特點,臨床上治療病毒疾患為主，部分治療心血管及腦損傷、缺氧等疾病。 如早期阿糖胞苷酸是治療威脅人類健康的病毒疾患的首創(chuàng)藥物；第一代核苷酸類藥物利巴韋林，第二代阿昔洛韋、更昔洛韋直至泛昔洛韋等。 該類產(chǎn)品大部分是微生物發(fā)酵或半合成的，化學(xué)結(jié)構(gòu)清楚、成分明白、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)較完善。 2010年版藥典收載的核酸類藥物品種較為齊全，尤其制劑，劑型完整，低的2-3種，多的7-8種

6、。如利巴韋林有11種：固體制劑有4種，片、口含片、膠囊、顆粒；液體制劑有7種，滴眼液、滴鼻液、口服溶液、注射劑、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液、注射用。,4、品種增修訂情況,該類藥品大部分標(biāo)準(zhǔn)項目比較完善，大部分未增訂和修訂，少部分進行了增修訂。,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,鹽酸阿糖胞苷（上海所起草，標(biāo)準(zhǔn)已全面達到或超過國外標(biāo)準(zhǔn)，有代表意義值得借鑒） 修訂了含量測定為HPLC法，限度達到98%-102% 增訂項目共6項：氯含量（因鹽酸鹽）、溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、熾灼殘渣、重金屬、殘留溶劑等。,特別是其中的氯含量測定、有關(guān)物質(zhì)檢查、 殘留溶劑檢查等很重要 氯含量：電位滴定法測定，回收

7、率100.4%，RSD=0.8%（n=6）； 有關(guān)物質(zhì)：對阿糖腺苷、尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷等進行考察，采用2種C18色譜柱進行系統(tǒng)適用性考察，得出相應(yīng)結(jié)果。經(jīng)天津所和廣東所復(fù)核，結(jié)果一致； 殘留溶劑：對5個企業(yè)的8種溶劑進行考察（聚乙二醇毛細管柱，進行系統(tǒng)適用性、回收率和最低檢出限進行考察）。經(jīng)天津所和廣東所復(fù)核，結(jié)果一致。,鹽酸阿糖胞苷質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對比,三、酶及其輔酶類,1、簡介： 酶是生物體內(nèi)的催化劑，參與一切代謝過程。酶的組成為單純蛋白質(zhì)和結(jié)合蛋白質(zhì)。后者為酶蛋白，非蛋白部分為輔酶或輔基。酶又可以按照各種催化反應(yīng)分類，如氧化還原酶、轉(zhuǎn)移酶、水解酶、異構(gòu)酶、合成酶等。,2、2010年版藥典收載

8、的酶及輔酶類藥品品種,胰酶（腸溶片、腸溶膠囊）、胰蛋白酶（注射用）、糜蛋白酶（注射用）、胃蛋白酶（片、顆粒、含糖胃蛋白酶）、玻璃酸酶（注射用）、抑肽酶（注射用）、凝血酶凍干粉、尿激酶（注射用）、門冬酰胺酶、*（注射用）、細胞色素C（注射用、注射液）、烏司他丁*（溶液、注射用）、輔酶Q10（片、注射液、膠囊、軟膠囊）、激肽原酶*等34個品種。 *為新增品種,3、收載的酶及輔酶類品種的基本特點,國外藥典收載的品種，本次藥典大部分均已收入。 大部分是生物體某些組織中提取、純化和精制的；另一部分是微生物經(jīng)發(fā)酵、破壁后再從發(fā)酵液中提取、純化和精制而成的。 酶是蛋白質(zhì)，具有生物活性，通常用于提純和純化蛋白

9、質(zhì)的方法都適用于酶。 質(zhì)量指標(biāo)的制定中注意酶的總活性和比活力純度的關(guān)系。 新增訂的藥品品種僅有3個。,4、增修訂情況,溶液的顏色 高分子物質(zhì)檢查 有關(guān)物質(zhì) 異常毒性 細菌內(nèi)毒素 微生物限度 無菌 過敏,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,抑肽酶 該品種由上海藥檢所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收載， 本版繼續(xù)收載，但依據(jù)USP作了三個方面的修訂。 1.檢查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì) 參照USP32采用附錄新技術(shù)毛細管電法：這是我國第一個用該法上藥典 的品種。 柱：石英毛細管分離柱 毛細管溫度： 30 電極液：磷酸二氫鉀溶液 分離壓：12KV 波長：214

10、nm 結(jié)果：去丙aa抑肽酶抑肽酶RT0.99（上海所0.989） 去丙aa-去甘aa-抑肽酶抑肽酶RT0.98（上海所0.978） （兩相關(guān)物分離度1.40，去丙aa-抑肽酶抑肽酶分離度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8）,對照品圖,供試品圖,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,2.檢查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關(guān)物（參照USP32） 色譜柱：TSK-GEL IC-Cation-SW 柱溫：40 流動相：磷酸二氫鉀緩沖液 流速：1.0ml/min 梯度洗程序 結(jié)果：N-焦谷氨酰-抑肽酶抑肽酶 RT0.9 （分離度2.2，抑肽酶拖尾因子0.92，最低檢出量：82ng）,對照品圖,供試品圖,Chp201

11、0版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,3.檢查高分子蛋白（USP32） 關(guān)鍵是采用三根串聯(lián)Gel色譜柱（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35， 流速1.0ml/min,二聚體相對RT0.9，分離度1.4，拖尾因子0.91。 以上用新技術(shù)的三項檢查，有效控制抑肽酶產(chǎn)品的純度，使產(chǎn)品質(zhì)量有一個飛躍，使標(biāo)準(zhǔn)的制定達到或超過國外標(biāo)準(zhǔn)。,對照品圖,供試品圖,抑肽酶國內(nèi)外質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較,四、多肽、蛋白類,1、簡介： 肽類是氨基酸相互結(jié)合成多肽鏈。 蛋白質(zhì)就是由多個氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個aa殘基，分子量為5733的Insulin劃分，高于此分子量的稱為蛋白，小于的為肽類。,肽鍵(peptide bond)的

12、形成,2、2010年版藥典收載的多肽及蛋白類藥品品種,尿促性素、注射用HMg、絨促性素、注射用HCg、醋酸丙氨瑞林、注射用醋酸丙氨瑞林、硫酸魚精蛋白及其注射液、五肽胃泌素及其注射液、縮宮素注射液、鮭降鈣素及其注射液、生長抑素及其注射用、甲狀腺素片、醋酸奧曲肽（注射液、注射用）、胸腺法新（注射用）、胰島素（系列產(chǎn)品）、重組人生長激素（注射用）等30個品種。,3、收載多肽及蛋白類品種的基本特點,本次藥典收載的產(chǎn)品中少部分為臟器提取的激素、肽類。安全性無法保障的品種如垂體后葉粉、注射液；縮宮素溶液；甲狀腺粉等刪除。 部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鑒別由化學(xué)測定法代替。 本次藥典收載的合成肽類藥

13、品，純度較高、質(zhì)量優(yōu)良，大部分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國際接軌。,生物測定法修訂情況,*暫未修訂,4、增修訂情況,高分子蛋白 有關(guān)物質(zhì) 相關(guān)蛋白 含量測定：HPLC 金屬離子：吸收光譜 細菌內(nèi)毒素 異常毒性 微生物限度 過敏,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,（一）生長抑素 BP09；EP60有收載；ChP和USP均未收載 浙江省所參照各國藥典，進口標(biāo)準(zhǔn)等進行起草。 1、含量限度：同國外使用HPLC法，C18柱，進樣量少，等度洗脫。 2、鑒別：TLC法，點樣量改成10ul，Rf=0.25，展開劑改為冰醋酸。 3、有關(guān)物質(zhì)：無中間體、粗品，故進行強制降解試驗，最低檢測限為0.1ug 4、氨基酸組成：經(jīng)方法學(xué)

14、改進采用二硫代二丙酸先與半胱氨酸結(jié)合再水解進行測定。 5、醋酸：參照國內(nèi)外合成肽有關(guān)方法，用HPLC法進行方法學(xué)研究。210nm檢測，梯度洗脫，線性10-500ug/ml，回收率101.6%（n=3），檢測限2.5ng，定量限7.6ng。 6、細菌內(nèi)毒素：方法學(xué)研究包括限值與熱原對比，靈敏度、干擾試驗、確證試驗等。 7、殘留溶劑：進行了乙腈、甲醇、乙醚、三乙胺、二甲基甲酰胺進行測定,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,（二）胰島素 ChP2010版依據(jù)USP33、EP6.0標(biāo)準(zhǔn)，參照2005版分別對來源、性狀、鑒別 、 檢查項下含量測定項、活性檢查作了修訂和補充 ，（該品種江蘇所起草，檢定所復(fù)

15、核） 1.肽圖分析：經(jīng)V8酶水解胰島素、對其分子碎片中的肽圖進行分析， 該法能確定不同種屬的胰島素，該法專屬性強。,人胰島素酶解-HPLC肽圖,豬胰島素酶解-HPLC肽圖,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,胰島素 2.相關(guān)蛋白：參照USP32、EP6.0由SDS-PAGE改為分離度較好的HPLC法，梯度洗脫及系統(tǒng)適用性試驗，使A21脫酰胺胰島素0.5%，其它相關(guān)蛋白限值5.0%，而實測樣前者0.5%；后者3.94.0%。 3.高分子蛋白：將一般柱色譜改為分子排阻色譜，色譜條件和系統(tǒng)實用 性試驗均與ChP2005重組人胰島素標(biāo)準(zhǔn)一致。,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,胰島素 4.含量測定：

16、用HPLC法代替生物測定法。ChP 2010版考慮到胰島素生物活性的重要性，故除改用HPLC法外，原料在檢查項中再加生物活性測定，參考USP32，動物數(shù)減半，生物統(tǒng)計簡化，作限度實驗，為常規(guī)測定用，該法既能省時、省力、省成本，又能有效控制質(zhì)量。,五、多糖、脂類,1、簡介： 糖類是自然界中一類重要的含碳化合物，主要生物學(xué)功能是在機體代謝中提供能源和碳源，也是組織和細胞結(jié)構(gòu)的主要組成成分。 主要分類有單糖（簡單的多羥基醛或酮）和聚糖（單糖縮合而成，20個單糖結(jié)構(gòu)以下的為低聚糖，20個以上的為多糖。低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖 ；純多糖：右旋糖酐、香菇多糖；雜多糖：肝素、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸）,2、2

17、010年版藥典收載的糖及脂類品種,硫酸軟骨素片、膠囊 肝素鈉、注射液、乳膏 右旋鐵、片、注射液 右旋糖酐20、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐40、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐70、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液 前列地爾、注射用前列地爾 多烯酸乙酯、軟膠囊,3、收載的糖及脂類品種的主要特點,采用高科技、新方法，是質(zhì)量顯著提高（如肝素、硫酸軟骨素等） 脂類，采用新的質(zhì)控指標(biāo)是多烯酸乙酯的質(zhì)量與EP、JP等基本一致。,4、增修訂情況,金屬離子：吸收光譜 有關(guān)物質(zhì)：HPLC 比活 含量測定：HPLC、GC 比旋度 殘留溶劑 甲氧基苯胺值 不皂化值 細菌內(nèi)毒素,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例

18、介紹,（一）肝素鈉 （中檢所起草） 比活：從原150u/mg提高到170u/mg(USP32180，BP2008為150，JP15為130)產(chǎn)品純度提高 比旋度：從原+35到+50（因雜質(zhì)嚴控，故該項提高） 吸收度：260nm、280nm是核酸和蛋白質(zhì)吸收峰，因雜質(zhì)嚴控，260nm 吸收度從原0.20到0.10，280nm吸收度從原0.15到0.10 說明雜質(zhì) 減少。 Na+：用原子吸收光譜限度9.5-12.5%（同EP） 有機殘留：甲醇，乙醇，丙酮中國藥典規(guī)定 細菌內(nèi)毒素：原1單位0.015Eu到1單位0.01Eu 以上六項標(biāo)準(zhǔn)均有十分明顯的提高,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,（一）肝

19、素鈉 （中檢所起草） 有關(guān)物質(zhì)：應(yīng)用離子色譜HPLC，使雜質(zhì)硫酸皮膚軟骨素5.0%，多硫酸軟骨素不得檢出。 該法USP,EP,BP,JP均沒訂。美國藥典論壇可能要采用該法，因該法能十分清晰分析：肝素，硫酸皮膚素，多硫軟骨素，可代替昂貴核磁共振及毛細管電泳。ChP 2010的該項目超過國際水平，有十分重要的意義。,Chp2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)實例介紹,（二）硫酸軟骨素（中檢所起草） 該品質(zhì)量指標(biāo)有顯著性提高，從含量原來40%左右直提至90%（口服），直接與國際接軌。 除標(biāo)準(zhǔn)中來源豬、紅外、吸收度、細內(nèi)、有機殘留增修有提高外，主要含量測定：用專一性很強且靈敏的酶解法分離硫酸軟骨素呈A、B、C。再用離

20、子色譜柱法很好分離硫酸軟骨素成B、C和A。使硫骨素含量為90%（固）、95%（固）、97%（注、眼）。 該法的特點，抵能測豬軟骨素（A/C有固定值 ），因國外來源很雜（牛、豬、禽、海洋動物），靈敏度優(yōu)于USP 和EP的電泳法、EP為滴定時，因無專屬性使將其它多糖混雜于方法中，使硫酸軟骨素含量偏高。,2010版藥典生化藥完成情況總結(jié),1、標(biāo)準(zhǔn)和品種完成情況 標(biāo)準(zhǔn)完成191個規(guī)格，增加36個，增加率（與chp2005年版比較）為22.6% 品種完成72個、增加12個新品種，增加率（與chp2005年版比較）為19.6% 刪除標(biāo)準(zhǔn)共5個,2、附錄和指導(dǎo)原則增訂情況,（1）蛋白質(zhì)含量測定（提供六種可選

21、擇的方法，適應(yīng)各有關(guān)品種的選擇） （2）多肽醋酸含量測法（為合成肽的檢查項提供統(tǒng)一的方法） （3）電泳附錄中等點聚焦法（電泳附錄中增加先進技術(shù)及常用方法） （4）氨基酸分析中的衍生法（為考慮各有關(guān)單位習(xí)慣等） 其中的（4）為指導(dǎo)原則中增訂,（1）蛋白質(zhì)含量測定方法,第一法：凱氏定氮法（提供了非蛋白氮供試品制備方法）。靈敏度較低，適用于0.2-2.0mg氮。換算系數(shù)因蛋白質(zhì)所含氨基酸結(jié)構(gòu)差異會稍有區(qū)別。 第二法：福林酚法（Lowry法）。靈敏度高，測定范圍通?？蛇_20-250ug。干擾物質(zhì)較多（還原物質(zhì)、酚類、檸檬酸、硫酸銨、Tris緩沖液、甘氨酸、甘露醇、糖類、甘油等） 第三法：雙縮脲法?？焖?/p>

22、、靈敏度低，測定范圍為1-10mg。干擾物質(zhì)有硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸,第四法：2,2-聯(lián)喹啉-4,4-二羧酸法（BCA法）。靈敏度較高，測定范圍80-400ug。樣品中不能有還原劑和銅螯合物。 第五法：考馬斯亮藍法（Bradford法）。靈敏度高，可測定1-200ug蛋白量。干擾物質(zhì)有去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉等。樣品緩沖液呈強堿性也會影響顯色。 第六法：紫外分光光度 法。干擾因素多，常用于純化蛋白質(zhì)的微量測定,（2）合成多肽中的醋酸測定法,采用液相色譜法測定合成多肽中的醋酸或醋酸鹽的含量。 C18柱、210nm檢測、梯度洗脫。 醋酸峰的保留時間約為3-4分鐘

23、。,（3）增訂了電泳法,增訂第六法等電聚焦水平板電泳法 用于檢測蛋白類和肽類供試品的等電點。 原理：兩性電解質(zhì)在電泳場中形成一個pH梯度，由于蛋白質(zhì)為兩性化合物，所帶電荷與介質(zhì)的pH值有關(guān)，帶電的蛋白質(zhì)在電泳中向極性相反的方向遷移，到達等電點（此處的pH值使相應(yīng)的蛋白質(zhì)不再帶電荷）時，電流達到最小，不再移動。,（4）氨基酸分析法,第一法：PITC柱前衍生氨基酸分析法 第二法：AQC柱前衍生氨基酸分析法 第三法：OPA和FMOC柱前衍生氨基酸分析法 第四法：DNFB柱前衍生氨基酸分析法 第五法：茚三酮柱后衍生氨基酸分析法,3、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平狀況,緊跟國際水平，與國際USP、BP和EP同標(biāo)準(zhǔn)接軌，盡可能就高不就低。 Chp2010版藥典生化藥中氨基酸類、核酸類、多肽、蛋白、酶、輔酶和脂類品種其中大部分或絕大部分產(chǎn)品已趕上或有的項目已超過國外標(biāo)準(zhǔn)。,4、標(biāo)準(zhǔn)方法和技術(shù),應(yīng)有高新技術(shù)使Chp2010版更專屬、