功能性食品的毒理學(xué)及功能學(xué)評(píng)價(jià).ppt

1、第三章 功能性食品的評(píng)價(jià)、管理、配方、加工及檢測(cè)技術(shù),功能性食品與方便食品,毒理學(xué)評(píng)價(jià) 功能學(xué)評(píng)價(jià) 衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià),1,2020/8/1,毒性及功能檢驗(yàn)評(píng)價(jià)依據(jù),功能性食品與方便食品,1996年3月衛(wèi)生部保健食品的管理方法 保健食品的標(biāo)準(zhǔn)、功能評(píng)價(jià)、審批程序和監(jiān)督管理辦法 1996年7月GB15193食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法 衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法 僅包含了12項(xiàng)功能檢驗(yàn)及評(píng)價(jià)方法 2001年7月 衛(wèi)生部保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法 可受理和評(píng)價(jià)的功能調(diào)整到31項(xiàng) 2003年2月衛(wèi)生部保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范 將功能學(xué)、毒理學(xué)、功效成分及衛(wèi)生指標(biāo)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)方法三者合一,2

2、,2020/8/1,毒理學(xué)評(píng)價(jià)的四個(gè)階段,功能性食品與方便食品,第一階段：急性毒性試驗(yàn) 經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)：LD50，聯(lián)合急性毒性，一次最大耐受量試驗(yàn) 第二階段：遺傳毒性試驗(yàn)，30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，傳統(tǒng)致畸試驗(yàn) 遺傳毒性試驗(yàn)：原核細(xì)胞和真核細(xì)胞，體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)相結(jié)合 Ames或基因突變?cè)囼?yàn)；微核試驗(yàn)或染色體畸變?cè)囼?yàn)；精子畸變?cè)囼?yàn)等 第三階段：亞慢性毒性試驗(yàn) 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)、代謝試驗(yàn) 第四階段：慢性毒性試驗(yàn)（包括致癌試驗(yàn)）,3,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,一般無(wú)需進(jìn)行毒性試驗(yàn)的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)： 采用傳統(tǒng)的工藝及食用方式 水提取

3、物，常規(guī)服用量，無(wú)不安全性報(bào)道 來(lái)源、工藝和質(zhì)量符合國(guó)家要求的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑 或營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充劑,4,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,需進(jìn)行一階段和三項(xiàng)致突變毒性試驗(yàn)的原料或成分 屬于普通食品和衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的物質(zhì)且用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的： （1）服用量與常規(guī)用量相同 急性毒性、三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn) （2）服用量大于常規(guī)用量 還需加做30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，必要時(shí)進(jìn)行傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)和第三階段毒性試驗(yàn),5,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,需進(jìn)行一、二階段毒性試驗(yàn)的原料或成分 文獻(xiàn)顯示無(wú)危害，人群長(zhǎng)期食用； 具有國(guó)際性毒理學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果的已知的化學(xué)物質(zhì)，產(chǎn) 品質(zhì)量規(guī)格

4、與國(guó)外產(chǎn)品一致； 國(guó)外廣泛食用且能提供安全性評(píng)價(jià)資料； 衛(wèi)生部規(guī)定允許使用的動(dòng)植物及其提取物或微生物。,6,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,需進(jìn)行一至三階段毒性試驗(yàn)的情況： 一、二階段試驗(yàn)結(jié)果與國(guó)外產(chǎn)品不一致的 國(guó)外少數(shù)國(guó)家或地區(qū)食用的原料或成分 水提取物，大于常規(guī)服用量 用水提以外的其它常用工藝生產(chǎn)的，大于常規(guī)用量,7,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,需進(jìn)行一至四階段毒性試驗(yàn)的原料和成分 國(guó)內(nèi)外均無(wú)食用先例 敏感指標(biāo)及敏感試驗(yàn)的保健食品 不同食用人群和（或）不同功能的保健食品,8,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,保健食品新原料

5、 保健食品新原料（以下簡(jiǎn)稱新原料）是指不在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品、衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)可以食用以及生產(chǎn)普通食品的范圍內(nèi)，擬用于保健食品的原料。 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局和國(guó)家有關(guān)部門規(guī)定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作為新原料。,9,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,在已批準(zhǔn)的保健食品中使用過，或衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為新資源食品的原料，符合以下情況的仍按新原料進(jìn)行管理： 未列入國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局公布的可用于保健食品的物品名單； 尚未列入衛(wèi)生部公布或批準(zhǔn)的食品新資源或新資源食品名單內(nèi)； 衛(wèi)生部已批準(zhǔn)為食品新資源或新資源食品，但保健食品注冊(cè)申請(qǐng)人與食品新資

6、源或新資源食品生產(chǎn)批件中載明的申報(bào)單位不一致。,10,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 無(wú)食用史 需做四階段試驗(yàn) 局部地區(qū)有食用史 需做三階段試驗(yàn) 其中 ，100倍攝入量300倍 需做第四階段試驗(yàn) 有食用史 需做二階段試驗(yàn) 經(jīng)評(píng)價(jià)后 下一階段試驗(yàn) 廣泛食用的原料 二階段試驗(yàn) （食用史包括地區(qū)、年代、人群、食用量、頻率等情況）,11,2020/8/1,毒性試驗(yàn)原則,功能性食品與方便食品,新原料安全性毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的選擇 已知化學(xué)物: -1 可只做二階段實(shí)驗(yàn)的包括 已有權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià) 有資料證明所用原料與其一致 -2 如試驗(yàn)

7、結(jié)果與權(quán)威機(jī)構(gòu)進(jìn)行的評(píng)價(jià)不一致，需進(jìn)入下階段的試驗(yàn) 有新原料的保健食品: 根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果綜合分析。,12,2020/8/1,對(duì)受試保健食品的要求,功能性食品與方便食品,單一已知化學(xué)成分，應(yīng)提供物理和化學(xué)性質(zhì) 多種原料的配方產(chǎn)品，應(yīng)提供配方 配方產(chǎn)品，必要時(shí)還應(yīng)提供各組分，功效成分的 物理和化學(xué)性質(zhì)及其檢測(cè)報(bào)告 提供原料來(lái)源、生產(chǎn)工藝、人的可能攝入量。使 用說明書等有關(guān)資料 受試物應(yīng)符合既定配方和生產(chǎn)工藝的規(guī)格化產(chǎn)品,13,2020/8/1,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇及給樣量,功能性食品與方便食品,1.根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系。 2.動(dòng)物應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

8、管理?xiàng)l例 清潔級(jí)或清潔級(jí)以上 動(dòng)物合格證號(hào)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室合格證號(hào) 3.灌胃量,14,2020/8/1,樣品的預(yù)處理原則,1.介質(zhì)的選擇 應(yīng)選擇適合于受試動(dòng)物的溶劑、乳化劑、助懸劑，要求無(wú)毒、與受試物不發(fā)生反應(yīng)、穩(wěn)定性好。 常用的介質(zhì)有：蒸餾水、食用植物油、淀粉、明膠及羧甲基纖維素等。 2.液體類 受試物濃縮倍數(shù)應(yīng)符合試驗(yàn)要求。 濃縮方法不應(yīng)破壞其有效成份，常用的有6070減壓或常壓蒸發(fā)、冷凍干燥。 按工藝要求。,15,樣品的預(yù)處理原則,3.袋泡茶類 處理方法與產(chǎn)品推薦飲用方法相同 推薦用：80-90 常壓用水浸泡30min 水量為受試物的10倍，提取2次，2次提取液合并濃縮至所需濃度 標(biāo)明該濃縮

9、液與受試物的比例,16,樣品的預(yù)處理原則,4.含乙醇類 （1）不需濃縮的受試物 乙醇濃度15 乙醇濃度應(yīng)調(diào)至15 （2）需濃縮的受試物 乙醇濃度15 濃縮后調(diào)至15乙醇濃度 在進(jìn)行乙醇濃度調(diào)整時(shí)必須用原酒基,17,樣品的預(yù)處理原則,5.膨脹系數(shù)較高的受試物 選擇可溶性介質(zhì) 給受試物的方法：灌胃 其最高濃度最大灌胃量時(shí)達(dá)不到人體推薦量的100倍，按實(shí)際達(dá)到的倍數(shù) 標(biāo)明受試物的膨脹系數(shù),18,樣品的預(yù)處理原則,6.益生菌等微生物類保健食品 在進(jìn)行 Ames試驗(yàn)或體外細(xì)胞試驗(yàn)時(shí)需將受試物滅活。 需濃縮的應(yīng)采用低溫干燥法或由企業(yè)提供所需濃度的受試物（附方法、技術(shù)參數(shù)）。 7.以食品為載體的受試物 （1

10、）有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值：按設(shè)計(jì)量進(jìn)行飼料的營(yíng)養(yǎng)成份調(diào)整，提供詳細(xì)的說明。 （2）大豆蛋白、乳清蛋白 如質(zhì)量、工藝等符合食品標(biāo)準(zhǔn)和安全要求，允許去除。 如僅以該原料生產(chǎn)的，可申請(qǐng)免做毒理學(xué)試驗(yàn)。,19,毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目要點(diǎn)介紹,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn) 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn) 小鼠精子畸形試驗(yàn) 小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn) 30天喂養(yǎng)試驗(yàn),20,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),目的：測(cè)定LD50，毒性分級(jí)。了解毒性強(qiáng)度、性質(zhì)和可能的靶器官，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供劑量和觀察指標(biāo)的選擇依據(jù)。 原理： 急性毒性：經(jīng)口一次性、24h內(nèi)多次給予，短時(shí)間內(nèi)的毒性反應(yīng)。致死劑量通常用半數(shù)致死

11、劑量LD50表示。 急性聯(lián)合毒性：兩種或兩種以上的受試物，可能發(fā)生拮抗、相加或協(xié)同的聯(lián)合方式，可以根據(jù)一定的公式計(jì)算和判定標(biāo)準(zhǔn)來(lái)確定這三種不同的作用。,21,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為3周 3-5天，大、小鼠適應(yīng)期 7-14天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期 發(fā)生動(dòng)物死亡時(shí)，應(yīng)進(jìn)行大體解剖 觀察和評(píng)價(jià)指標(biāo)： 毒性反應(yīng)癥狀：各器官系統(tǒng)的反常表現(xiàn)（中樞、自主神經(jīng)、呼吸、心血管、胃腸、生殖泌尿系統(tǒng)、皮毛、粘膜等）及體重變化 死亡情況：死亡的時(shí)間、數(shù)量、性別、表現(xiàn)等。 大體尸檢結(jié)果：如果發(fā)生死亡動(dòng)物,22,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),23,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),24,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),25,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),26,急性經(jīng)

12、口毒性試驗(yàn),27,急性毒性（LD50）劑量分級(jí)表,28,急性毒性（LD50）劑量分級(jí)表,29,急性經(jīng)口毒性試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果的判定： 1. LD50人可能攝入量的100倍，放棄；反之繼續(xù)下一步試驗(yàn)。 2. LD5010g/kg體重或按最大耐受量染毒而未出現(xiàn)動(dòng)物死亡的，可繼續(xù)下一步試驗(yàn)。,30,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn),原理：檢測(cè)受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門氏菌組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株(his-)回復(fù)突變成野生型(his+)的能力。即組氨酸突變菌(his-) 在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上不能生長(zhǎng)；回復(fù)突變成野生型(his+)，可在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上生長(zhǎng)。 目的：檢測(cè)受試物的誘變性，預(yù)測(cè)其遺傳危害

13、和潛在致癌作用的可能性。,31,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為2周 第一周，鼠傷寒沙門氏菌種、試劑、培養(yǎng)基準(zhǔn)備 第二周，染毒，培養(yǎng)48h，讀平板，菌落計(jì)數(shù) 劑量設(shè)計(jì)： 決定受試物最高劑量的因素是對(duì)細(xì)菌的毒性及其溶解度。最低劑量為0.2ug/皿；最高劑量為5mg/皿，或最大溶解劑量，最大飽和劑量以及最小毒性劑量?？稍O(shè)五個(gè)劑量組，組間距不超過5倍。同時(shí)設(shè)：陽(yáng)性對(duì)照組，溶劑對(duì)照組和未處理對(duì)照組。,32,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn),33,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 各受試物組及三個(gè)對(duì)照組的四種菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分別在加和不加

14、S9情況下的菌落計(jì)數(shù)。 結(jié)果判斷: 只要在一種試驗(yàn)菌株得到陽(yáng)性結(jié)果，即認(rèn)為受試物是致突變物 僅當(dāng)四種試驗(yàn)菌株均得到陰性結(jié)果，才認(rèn)為受試物是非致突變物 不加S9 混合液得到陽(yáng)性結(jié)果，說明受試物是直接致突變物 加S9 混合液才得到陽(yáng)性結(jié)果，說明該受試物是間接致突變物,34,鼠傷寒沙門氏菌（Ames）試驗(yàn),評(píng)價(jià)（摻入法）： 受試物組回變菌落數(shù)增加一倍以上（即回變菌落數(shù)2未處理對(duì)照組數(shù)），并有劑量反應(yīng)關(guān)系或有可重復(fù)的陽(yáng)性反應(yīng)，即可判試驗(yàn)陽(yáng)性。,35,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),原理： 微核是在細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時(shí)，仍然留在細(xì)胞質(zhì)中的色單體或染色體的無(wú)著絲點(diǎn)斷片 。末期之后，單獨(dú)形

15、成一個(gè)或幾個(gè)規(guī)則的次核，被包含在細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，因比主核小，故稱為微核。 1 有絲分裂毒物的作用使個(gè)別染色體或帶著絲點(diǎn) 的染色體環(huán)和斷片在細(xì)胞分裂后期被滯留在細(xì)胞質(zhì)中 2 斷片或無(wú)著絲點(diǎn)染色體在細(xì)胞分裂后期不能定向移動(dòng)，從而遺留在細(xì)胞質(zhì)中,36,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),目的： 檢測(cè)整體動(dòng)物體內(nèi)骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物致突變的可能性。,37,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為2周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口染毒，30h給受試物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)置3個(gè)劑量，最高劑量組為動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重中毒表現(xiàn)和/或個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡的劑量。低劑量組應(yīng)不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。一般取

16、LD50的1/2、1/4、1/8作為三個(gè)劑量。當(dāng)受試物的LD5010g/kg.bw時(shí)，最高劑量通常采用10g/kg.bw。同時(shí)設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組和溶劑對(duì)照組。,38,骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 每只動(dòng)物計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞 ，記錄含有微核的細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算微核千分率。觀察嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比例。 結(jié)果評(píng)價(jià)： 受試物組與對(duì)照組微核率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,39,哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),目的：檢測(cè)受試物對(duì)整體動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變的致突變性，以評(píng)價(jià)其致突變的可能性。 原理：當(dāng)受試物作用于細(xì)胞周期G1期和S期時(shí)，可誘發(fā)染色體型畸變，而作用于G2

17、期時(shí)則誘發(fā)染色體單體型畸變。給動(dòng)物腹腔注射秋水仙素，抑制細(xì)胞分裂時(shí)紡錘體的形成，增加中期分裂相細(xì)胞的比例，并使染色體絲縮短、分散，輪廓清晰。在顯微鏡下便可觀察染色體數(shù)目和形態(tài)。,40,哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),時(shí)間周期：一般為3周 3-5天適應(yīng)期 小鼠或大鼠經(jīng)口染毒2-4次，每次間隔24h，在末次染毒18-24h進(jìn)行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，收集骨髓，制片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),41,哺乳動(dòng)物骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 每只動(dòng)物分析100個(gè)中期相細(xì)胞 ，每個(gè)劑量組不少于1000個(gè)。記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果評(píng)價(jià)： 受試物

18、組與對(duì)照組染色體畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,42,小鼠精子畸形試驗(yàn),目的： 檢測(cè)整體動(dòng)物體內(nèi)精子畸形發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物對(duì)體內(nèi)生殖細(xì)胞的致突變作用。 原理： 小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遺傳性，許多常染色體及X、Y性染色體基因決定精子形態(tài)。精子的畸形主要是指形態(tài)的異常，已知精子的畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此形態(tài)的改變提示有關(guān)基因及其蛋白產(chǎn)物的改變。,43,小鼠精子畸形試驗(yàn),時(shí)間周期：一般為7周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，于首次給樣后的35天處死動(dòng)物 取兩側(cè)附睪，收集精子，滴片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),44,小

19、鼠精子畸形試驗(yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 每只動(dòng)物檢查1000個(gè)精子 ，記錄精子畸形數(shù)目及類型。 結(jié)果評(píng)價(jià)： 受試物組與對(duì)照組精子畸變率相比，增高呈劑量反應(yīng)關(guān)系并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,45,小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),目的：檢測(cè)整體動(dòng)物睪丸染色體畸變發(fā)生率，以評(píng)價(jià)受試物對(duì)整體哺乳動(dòng)物睪丸生殖細(xì)胞的致突變性。 原理：不同周期的雄性生殖細(xì)胞對(duì)化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同，多數(shù)情況下化學(xué)誘變劑誘發(fā)染色體畸變必須經(jīng)過DNA復(fù)制期，故在前細(xì)線期處理。第1214d采樣，以觀察作用于前細(xì)線期引起的精母細(xì)胞染色體畸變效應(yīng)。,46,小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),時(shí)間周期：一般為7周 3-5天適應(yīng)期 小鼠經(jīng)口連續(xù)染毒5天，與首次

20、給樣后的12-14天處死動(dòng)物取材，（取材前6h，腹腔注 射秋水仙素）。取兩側(cè)睪丸，收集生殖細(xì)胞，滴片，染色，鏡檢 劑量設(shè)計(jì)：同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),47,小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 每只動(dòng)物分析100個(gè)中期相細(xì)胞 ，記錄染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)的改變（包括斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價(jià)體、性染色體單價(jià)體等）。 結(jié)果評(píng)價(jià)： 受試物組與對(duì)照組的斷片、易位、畸變細(xì)胞率、常染色體單價(jià)體、性染色體單價(jià)體等差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性。,48,遺傳毒性試驗(yàn)組合,試驗(yàn)結(jié)果的判定： 如三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)，微核或骨髓細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，精子畸形或睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn)）中，體外或體內(nèi)有一項(xiàng)或以

21、上陽(yáng)性，一般應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。 如三項(xiàng)試驗(yàn)均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性試驗(yàn)。,49,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),目的：急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，此試驗(yàn)可進(jìn)一步了解毒性作用，特別是觀察對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響，并可初步估計(jì)最大觀察到的無(wú)作用劑量，估計(jì)亞慢性攝入的危害性。 原理： 以不同劑量受試物每日經(jīng)口給予各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，連續(xù)30天。染毒期間每日密切觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)，染毒結(jié)束后進(jìn)行大體解剖、血生化及病理檢查，以此觀察重復(fù)喂食不同劑量的受試物對(duì)動(dòng)物引起的有害作用。,50,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),時(shí)間周期：在獲得了急性毒性數(shù)據(jù)后，一般為2月 3-5天，大鼠適應(yīng)期 30天，染毒及實(shí)驗(yàn)觀察期 再進(jìn)行大體解剖、血液、生化

22、、器官病 理檢查。,51,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),劑量設(shè)計(jì)：至少設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組。高劑量應(yīng)能引起動(dòng)物明顯毒效應(yīng)但不造成動(dòng)物死亡。低劑量應(yīng)不出現(xiàn)任何毒作用，同時(shí)在這二劑量之間設(shè)幾個(gè)中間劑量組。 對(duì)于能獲得LD50的受試物：最高劑量為1025的LD50，最低劑量組至少為人可能攝入量的3倍。 對(duì)于不能獲得LD50的受試物：最高劑量為人可能攝入量的100倍，或按最大灌胃劑量或在飼料中的最大摻入量。,52,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),觀察及評(píng)價(jià)指標(biāo)： 一般情況觀察：每日的表現(xiàn)、行為、中毒和死亡情況。每周1次體重及2次食物攝入量，計(jì)算食物利用率。 血液學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定血紅蛋白、紅和白細(xì)胞總數(shù)及分類，必要時(shí)測(cè)定血

23、小板或網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)等指標(biāo)。 生化學(xué)指標(biāo)：喂養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、總蛋白、膽固醇和甘油三酯。 病理檢查：大體解剖、臟器稱重、組織病理學(xué)檢查。,53,30天喂養(yǎng)試驗(yàn),試驗(yàn)結(jié)果的判定： 對(duì)于只要求進(jìn)行一、二階段試驗(yàn)者，最大未觀察到有害作用劑量人可能攝入量的100倍，綜合其它試驗(yàn)結(jié)果可初步做出安全性評(píng)價(jià)。 最小觀察到有害作用劑量人可能攝入量的100倍，或觀察到毒性反應(yīng)的最小劑量組其受試物在飼料中比例10，放棄。 在中低劑量組中個(gè)別指標(biāo)與對(duì)照組相比有差異，應(yīng)綜合分析，決定取舍或進(jìn)行下一步毒理試驗(yàn)。,54,其它試驗(yàn)結(jié)果判斷,傳統(tǒng)致畸試驗(yàn)： 需大于或等于人攝入量的1

24、00倍。在50倍至100倍之間需進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)，小于50倍需放棄。 90天喂養(yǎng)試驗(yàn)、繁殖試驗(yàn)： 1.僅在國(guó)外少數(shù)國(guó)家或國(guó)內(nèi)局部地區(qū)有食用歷史的原料或成分，需大于或等于人攝入量的100倍。 2.國(guó)內(nèi)外均無(wú)食用歷史的原料或成分時(shí)，需大于或等于人攝入量的300倍。在100倍至300倍之間需進(jìn)行慢性毒性試驗(yàn)，小于100倍需放棄。,55,其它試驗(yàn)結(jié)果判斷,慢性毒性試驗(yàn)： 以LD50或30天喂養(yǎng)試驗(yàn)的最大未觀察到有害作用劑量設(shè)計(jì)受試物各劑量組，未見有毒性作用。 致癌試驗(yàn)陽(yáng)性判定依據(jù)： 腫瘤只發(fā)生在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物，對(duì)照組中無(wú)腫瘤發(fā)生。 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均發(fā)生腫瘤，但實(shí)驗(yàn)組發(fā)生率高。 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組腫瘤發(fā)生率無(wú)明顯

25、差異，但實(shí)驗(yàn)組發(fā)生時(shí)間較早。 符合以上三項(xiàng)中的情況之一，并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可認(rèn)為致癌試驗(yàn)陽(yáng)性。,56,安全性評(píng)價(jià)的科學(xué)性和藝術(shù)性,安全性評(píng)價(jià)的藝術(shù)性： 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人必須考慮動(dòng)物與人的種屬差異； 2.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會(huì)經(jīng)濟(jì)基礎(chǔ)、技術(shù)能力的相符性； 3.安全性標(biāo)準(zhǔn)與社會(huì)和公眾利益之間的平衡性。 結(jié)論：在對(duì)化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行科學(xué)地安全性評(píng)價(jià)之后，應(yīng)結(jié)合試驗(yàn)的局限性，社會(huì)經(jīng)濟(jì)狀況，人們的生活習(xí)慣等因素，對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果作出一個(gè)合理的分析，為衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的制定提供具有實(shí)際指導(dǎo)意義的依據(jù)。,57,應(yīng)綜合考慮的問題,1.試驗(yàn)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和生物學(xué)意義 在分析試驗(yàn)組與對(duì)照組指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著性時(shí)，應(yīng)根據(jù)其

26、有無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系及與本實(shí)驗(yàn)室的歷史性對(duì)照值范圍比較的原則,來(lái)綜合考慮指標(biāo)差異有無(wú)生物學(xué)意義。 2.生理作用與毒性作用 對(duì)實(shí)驗(yàn)中某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析時(shí)要注意區(qū)分是生理學(xué)表現(xiàn)還是受試物的毒性作用。,58,應(yīng)綜合考慮的問題,3.時(shí)間-毒性效應(yīng)關(guān)系 對(duì)由受試物引起的毒性效應(yīng)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)時(shí)，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時(shí)間的變化情況。 4.特殊人群和敏感人群 對(duì)孕婦、乳母或兒童食用的保健食品，應(yīng)特別注意其胚胎毒性或生殖發(fā)育毒性、神經(jīng)毒性和免疫毒性。,59,應(yīng)綜合考慮的問題,5.人的可能攝入量較大的保健食品 應(yīng)考慮給予受試物量過大時(shí)，可能影響營(yíng)養(yǎng)素?cái)z入量及其生物利用率，從而導(dǎo)致某些毒理學(xué)表現(xiàn)

27、，而非受試物本身的毒性作用所致。 6.含乙醇的保健食品 對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，在結(jié)果分析評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)注意區(qū)分是乙醇本身還是其它成分的作用。,60,應(yīng)綜合考慮的問題,7.動(dòng)物年齡對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響 對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的某些指標(biāo)的異常改變，要考慮是否因動(dòng)物年齡選擇不當(dāng)所致。 8.安全系數(shù) 鑒于動(dòng)物、人的種屬和個(gè)體之間的生物學(xué)差異，安全系數(shù)通常為100。,61,應(yīng)綜合考慮的問題,9.人體資料 在評(píng)價(jià)保健食品的安全性時(shí)，應(yīng)盡可能收集人群食用受試物后反應(yīng)的資料。 10.綜合評(píng)價(jià) 在對(duì)保健食品進(jìn)行最后評(píng)價(jià)時(shí)，必須綜合考慮受試物的原料來(lái)源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點(diǎn)、蓄積性、接觸的人群范圍、食品中的使用范

28、圍、人的可能攝入量及保健功能等因素，確保其對(duì)人體健康的安全性。,62,應(yīng)綜合考慮的問題,11.保健食品安全性的重新評(píng)價(jià)：很早的毒性評(píng)價(jià)可 能因?yàn)楫?dāng)時(shí)科學(xué)水平和技術(shù)條件的限制，現(xiàn)已不適用需重新評(píng)價(jià)。 12.若受試物摻入飼料的最大加入量（10）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達(dá)不到最大觀察到有害作用劑量為人的可能攝入量的規(guī)定倍數(shù)時(shí)，如何綜合其它的毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。,63,審評(píng)結(jié)論的判定,1.認(rèn)可毒理學(xué)試驗(yàn)：試驗(yàn)設(shè)計(jì)合理，操作規(guī)范，試驗(yàn)結(jié)果能夠證明受試物的安全性。 2.屬以下幾種情況之一，補(bǔ)充資料后建議批準(zhǔn)： （1）檢驗(yàn)報(bào)告格式不規(guī)范，需要重新出具檢驗(yàn)報(bào)告毒理學(xué)試驗(yàn)報(bào)告。 （2）數(shù)據(jù)偏離歷史對(duì)照較大

29、，需檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)做出解釋。 （3）未提供某些試驗(yàn)數(shù)據(jù)，需要補(bǔ)充提供。,64,2020/8/1,審評(píng)結(jié)論的判定,3.重做試驗(yàn)，大會(huì)再審，屬以下幾種情況之一： （1）由于實(shí)驗(yàn)操作不規(guī)范，根據(jù)提供的檢驗(yàn)報(bào)告無(wú)法評(píng)價(jià)產(chǎn)品的安全性，需要做除30天/90天喂養(yǎng)試驗(yàn)以外的毒理學(xué)試驗(yàn)； （2）已有數(shù)據(jù)提示可能存在安全性問題，但難以下結(jié)論，需要重復(fù)試驗(yàn)。,65,2020/8/1,（1）毒理學(xué)評(píng)價(jià)的結(jié)果表明產(chǎn)品在推薦劑量下對(duì)人體具有一定的毒性，存在安全性問題。 （2）產(chǎn)品的原料、配方存在明顯的安全性問題，如配方含有“可用于保健食品的原料”名單以外的原料，且未進(jìn)行新資源食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)。 （3）選擇安全性毒理學(xué)試驗(yàn)

30、不符合程序規(guī)定，未完成相應(yīng)階段的毒理學(xué)試驗(yàn)。,4.對(duì)產(chǎn)品的安全性不予認(rèn)可的情況如下（一）：,66,2020/8/1,（4）毒理、功能、興奮劑與衛(wèi)生學(xué)、穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品的批號(hào)不一致。 （5）未按規(guī)定提供安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)資料的。 （6）30天/90天喂養(yǎng)試驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)不合理或某些指標(biāo)異常，結(jié)果不可信。,4.對(duì)產(chǎn)品的安全性不予認(rèn)可的情況如下(二)：,67,2020/8/1,功能性食品與方便食品,68,2020/8/1,69,功能食品的功能學(xué)評(píng)價(jià),對(duì)功能食品進(jìn)行功能學(xué)評(píng)價(jià)是功能食品科學(xué)研究的核心內(nèi)容，主要針對(duì)功能食品所宣稱的生理功效進(jìn)行動(dòng)物學(xué)甚至是人體試驗(yàn)。本節(jié)將介紹評(píng)價(jià)功能食品的統(tǒng)一程序和試驗(yàn)規(guī)程。,2

31、020/8/1,功能性食品與方便食品,一個(gè)保健食品最多可以申報(bào)兩個(gè)功能。 27個(gè)保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)的具體方法。其中有7個(gè)功能不需做人體試食試驗(yàn)。 功能學(xué)評(píng)價(jià) 增強(qiáng)免疫力 改善睡眠 緩解體力疲勞 提高缺氧耐受力 對(duì)輻射危害有輔助保護(hù)功能 增加骨密度 對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)功能 改善皮膚油份,70,2020/8/1,功能性食品與方便食品,5 個(gè)保健功能學(xué)評(píng)價(jià)只需進(jìn)行人體試食試驗(yàn)，不必進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn) 緩解視疲勞 祛痤瘡 祛黃褐斑 改善皮膚水份 改善皮膚油份,71,2020/8/1,72,一、功能學(xué)評(píng)價(jià)的基本要求,（一）對(duì)受試樣品的要求 1.學(xué)性質(zhì)（包括化學(xué)結(jié)構(gòu)、純度、穩(wěn)定性等）有關(guān)資料。 2.受試樣

32、品必須是規(guī)格化的定型產(chǎn)品，即符合既定的配方、生產(chǎn)工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 3.提供受試樣品的安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)的資料以及衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)報(bào)告，受試樣品必須是已經(jīng)過食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)確認(rèn)為安全的食品。功能學(xué)評(píng)價(jià)的樣品與安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)、衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)的樣品必須為同一批次（安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)和功能學(xué)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)周期超過受試樣品保質(zhì)期的除外）。 4.應(yīng)提供功效成分或特征成分、營(yíng)養(yǎng)成分的名稱及含量。 5.如需提供受試樣品違禁藥物檢測(cè)報(bào)告時(shí)，應(yīng)提交與功能學(xué)評(píng)價(jià)同一批次樣品的違禁藥物檢測(cè)報(bào)告。,2020/8/1,73,（二）對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的要求,1.根據(jù)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的具體要求，合理選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推薦使用近交系動(dòng)

33、物。 2.動(dòng)物的性別、年齡依實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量要求為小鼠每組1015只（單一性別），大鼠每組812只（單一性別）。 3. 動(dòng)物應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的有關(guān)規(guī)定。,2020/8/1,74,（三）對(duì)給受試樣品劑量及時(shí)間的要求,1.各種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)至少應(yīng)設(shè)3組，必要時(shí)可設(shè)陽(yáng)性對(duì)照組或空白對(duì)照組。劑量選擇應(yīng)合理，盡可能找出最低有效劑量。在3個(gè)劑量組中，其中一個(gè)劑量應(yīng)相當(dāng)于人體推薦攝入量（折算為每公斤體重的劑量）的5倍（大鼠）或10倍（小鼠），且最高劑量不得超過人體推薦攝入量的30 倍（特殊情況除外），受試樣品的功能實(shí)驗(yàn)劑量必須在毒理學(xué)評(píng)價(jià)確定的安全劑量范圍之內(nèi)。 2.給受試樣品的時(shí)間應(yīng)根據(jù)具體

34、實(shí)驗(yàn)而定，一般為30天。當(dāng)給予受試樣品的時(shí)間已達(dá)30天而實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍為陰性時(shí)，則可終止實(shí)驗(yàn)。,2020/8/1,75,（四）對(duì)受試樣品處理的要求,1. 受試樣品推薦量較大，超過實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的灌胃量、摻入飼料的承受量等情況時(shí)，可適當(dāng)減少受試樣品的非功效成分的含量。 2.對(duì)于含乙醇的受試樣品，原則上應(yīng)使用其定型的產(chǎn)品進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)，其三個(gè)劑量組的乙醇含量與定型產(chǎn)品相同。如受試樣品的推薦量較大，超過動(dòng)物最大灌胃量時(shí)，允許將其進(jìn)行濃縮，但最終的濃縮液體應(yīng)恢復(fù)原乙醇含量，如乙醇含量超過15，允許將其含量降至15。調(diào)整受試樣品乙醇含量應(yīng)使用原產(chǎn)品的酒基。,2020/8/1,76,3.液體受試樣品需要濃縮時(shí)，應(yīng)盡可

35、能選擇不破壞其功效成分的方法。一般可選擇6070減壓進(jìn)行濃縮。濃縮的倍數(shù)依具體實(shí)驗(yàn)要求而定。 4.對(duì)于以沖泡形式飲用的受試樣品（如袋泡劑），可使用該受試樣品的水提取物進(jìn)行功能實(shí)驗(yàn)，提取的方式應(yīng)與產(chǎn)品推薦飲用的方式相同。如產(chǎn)品無(wú)特殊推薦飲用方式，則采用下述提取的條件：常壓，溫度8090，時(shí)間3060分鐘，水量為受試樣品體積的10倍以上，提取2次，將其合并濃縮至所需濃度。,2020/8/1,77,（五）對(duì)給受試樣品方式的要求 必須經(jīng)口給予受試樣品，首選灌胃。如無(wú)法灌胃則加入飲水或摻入飼料中，計(jì)算受試樣品的給予量。 （六）對(duì)合理設(shè)置對(duì)照組的要求 以載體和功效成分（或原料）組成的受試樣品，當(dāng)載體本身可

36、能具有相同功能時(shí)，應(yīng)將該載體作為對(duì)照。,2020/8/1,78,（七）人體試食試驗(yàn)規(guī)程,評(píng)價(jià)食品保健作用時(shí)要考慮的因素 1.人的可能攝入量 除一般人群的攝入量外，還應(yīng)考慮特殊的和敏感的人群(如兒童、孕婦及高攝入量人群)。 2.人體資料 由于存在動(dòng)物與人之間的種屬差異、在將動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果外推到人時(shí)，應(yīng)盡可能收集人群服用受試物的效應(yīng)資料，若體外或體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)未觀察到或不易觀察到食品的保健效應(yīng)或觀察到不同效應(yīng)，而有關(guān)資料提示對(duì)人有保健作用時(shí)，在保證安全的前提下，應(yīng)進(jìn)行必要的人體試食試驗(yàn)。 3. 結(jié)果的重復(fù)性和劑量反應(yīng)關(guān)系 在將評(píng)價(jià)程序所列試驗(yàn)的陽(yáng)性結(jié)果用于評(píng)價(jià)食品的保健作用時(shí)，應(yīng)考慮結(jié)果的重復(fù)性和劑量

37、反應(yīng)關(guān)系，并由此找出其最小有作用劑量。,2020/8/1,79,二、試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定,(一) 免疫調(diào)節(jié)作用 1.試驗(yàn)項(xiàng)目: （1）動(dòng)物試驗(yàn) 臟器/體重比值:a.胸腺/體重比值b.脾臟/體重比值 細(xì)胞免疫功能測(cè)定 a.小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)b.遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng) 體液免疫功能測(cè)定 a.抗體生成細(xì)胞檢測(cè)b.血清溶血素測(cè)定 單核巨噬細(xì)胞功能測(cè)定： a.小鼠碳廓清試驗(yàn)b.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn) NK細(xì)胞活性測(cè)定,2020/8/1,80,（2）人體試食試驗(yàn),細(xì)胞免疫功能測(cè)定外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 體液免疫功能試驗(yàn)單向免疫擴(kuò)散法測(cè)定IgG、IgA、IgM 非特異性免疫功能測(cè)定 吞噬與殺菌

38、試驗(yàn) NK細(xì)胞活性測(cè)定,2020/8/1,81,2.試驗(yàn)原則,要求選擇一組能夠全面反映免疫系統(tǒng)各方面功能的試驗(yàn)，其中細(xì)胞免疫、體液免疫和單核巨噬細(xì)胞功能三個(gè)方面至少各選擇1種試驗(yàn)，在確保安全的前提下盡可能進(jìn)行人體試食試驗(yàn)。,2020/8/1,82,3.結(jié)果判定,在一組試驗(yàn)中，受試物對(duì)免疫系統(tǒng)某方面的試驗(yàn)具有增強(qiáng)作用而對(duì)其他試驗(yàn)無(wú)抑制作用，可以判定該受試物具有該方面的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)；對(duì)任何一項(xiàng)免疫試驗(yàn)具有抑制作用可判定該受試物具有免疫抑制效應(yīng)。 在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核巨噬細(xì)胞功能及NK細(xì)胞功能檢測(cè)中，如有兩個(gè)以上(含兩個(gè))功能檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，即可判定該受試物具有免疫調(diào)節(jié)作用。,2020/

39、8/1,83,（二）延緩衰老作用, 1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物試驗(yàn) 生存試驗(yàn) a.小鼠生存試驗(yàn) b.大鼠生存試驗(yàn) c.果蠅生存試驗(yàn) 過氧化脂質(zhì)含量測(cè)定 a.血(或組織)中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量測(cè)定 組織中脂褐質(zhì)含量測(cè)定 抗氧化活力測(cè)定 a.血(或組織)中超氧化物歧化酶(SOD)活力測(cè)定 b.血(或組織)中谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX )活力測(cè)定,2020/8/1,84,（2）人體試食試驗(yàn),血中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛(MDA) 含量測(cè)定血中超氧化物歧化酶(SOD)活力測(cè)定血中谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)活力測(cè)定,2020/8/1,85,2.試驗(yàn)原則,衰老機(jī)制比較復(fù)雜，迄今尚

40、無(wú)一種公認(rèn)的衰老機(jī)制學(xué)說，因而無(wú)單一、簡(jiǎn)便、實(shí)用的衰老指標(biāo)可供應(yīng)用，應(yīng)采用盡可能多的試驗(yàn)方法，以保證試驗(yàn)結(jié)果的可信性。動(dòng)物試驗(yàn)，除上述生存試驗(yàn)，過氧化脂質(zhì)含量測(cè)定、抗氧化酶活力測(cè)定3個(gè)方面各選一項(xiàng)必做外，可能時(shí)應(yīng)多選擇一些指標(biāo)(如腦、肝組織中單胺氧化酶(MAO-B) 活力測(cè)定等)加以輔助。 生存試驗(yàn)是最直觀、最可靠的實(shí)驗(yàn)方法，果蠅具有自下而上期短，繁殖快，飼養(yǎng)簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，通常多選果蠅作生存試驗(yàn)，但果蠅種系分類地位與人較遠(yuǎn)，故必須輔助過氧化脂質(zhì)含量測(cè)定及抗氧化活力測(cè)定才能判斷是否具有延緩衰老作用。生化指標(biāo)測(cè)定應(yīng)選用老齡鼠，除設(shè)老齡對(duì)照外，最好同時(shí)增設(shè)少齡對(duì)照，以比較受試物抗氧化的程度，必要時(shí)可將

41、動(dòng)物試驗(yàn)與人體試食試驗(yàn)相結(jié)合綜合評(píng)價(jià)。,2020/8/1,86,3.結(jié)果判定,若大鼠或小鼠生存試驗(yàn)為陽(yáng)性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。 若果蠅生存試驗(yàn)、過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶三項(xiàng)指標(biāo)均為陽(yáng)性，即可判定該受試物具有延緩衰老的作用。 若過氧化脂質(zhì)和抗氧化酶兩項(xiàng)為陽(yáng)性，可判定該受試物具有抗氧化作用，并提示可能具有延緩衰老作用。,2020/8/1,87,（三）改善記憶作用,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物試驗(yàn) 跳臺(tái)試驗(yàn) 避暗試驗(yàn) 穿梭箱試驗(yàn) 水迷宮試驗(yàn) （2）人體試食試驗(yàn) 韋氏記憶量表 臨床記憶量表,2020/8/1,88,2.試驗(yàn)原則,（1）試驗(yàn)應(yīng)通過訓(xùn)練前、訓(xùn)練后及重測(cè)驗(yàn)前3種不同的給予受試物方法觀

42、察其對(duì)記憶全過程的影響。 （2）應(yīng)采用一組(2個(gè)以上)行為學(xué)試驗(yàn)方法，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。 （3）人體試食試驗(yàn)為必做項(xiàng)目，并應(yīng)在動(dòng)物試驗(yàn)有效的前提下進(jìn)行。 （4）除上述試驗(yàn)項(xiàng)目外，還可以選用嗅覺厭惡試驗(yàn)、味覺厭惡試驗(yàn)、操作式條件反射試驗(yàn)，連續(xù)強(qiáng)化程序試驗(yàn)、比率程序試驗(yàn)、間隔程序試驗(yàn)。,2020/8/1,89,3.結(jié)果判定,動(dòng)物試驗(yàn)2項(xiàng)或2項(xiàng)以上的指標(biāo)為陽(yáng)性，且2次或2次以上的重復(fù)測(cè)試結(jié)果一致，可以認(rèn)為該受試物具有改善該類動(dòng)物記憶作用； 人體試食試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，則可認(rèn)為該受試物具有改善人體記憶作用。,2020/8/1,90,（四）促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育作用,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 本功能試驗(yàn)研究是以動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)為研

43、究基礎(chǔ) （1）胎仔情況 包括活胎數(shù)、雌雄比例、死胎數(shù)、分娩胎仔總數(shù)。 （2）體重及食物利用率 記錄出生時(shí)及生后4、7、14、21、30、60d幼鼠的體重，計(jì)算斷乳后幼鼠的食物利用率。 （3）生理發(fā)育指標(biāo) 記錄耳廓分離、門齒萌出、開眼、長(zhǎng)毛時(shí)間、陰道開放、睪丸下降時(shí)間。 （4）神經(jīng)反射指標(biāo) 平面翻正、前肢抓力、懸崖回避、嗅覺定位、聽覺警戒、負(fù)趨地性、回旋運(yùn)動(dòng)、視覺發(fā)育、空中翻正、游泳發(fā)育。,2020/8/1,91,2.試驗(yàn)原則,（1）給受試物的時(shí)間可根據(jù)具體情況選擇在母鼠孕期或哺乳期至成年期。 （2）在神經(jīng)反射指標(biāo)中應(yīng)選擇一組(5個(gè)以上)的行為學(xué)試驗(yàn)方法，以保證結(jié)果的可靠性。,2020/8/1,

44、92,3.結(jié)果判定,在胎仔情況、體重及食物利用率、生理發(fā)育、神經(jīng)反射4類指標(biāo)中有3類以上(含3類) 指標(biāo)為陽(yáng)性，可認(rèn)為受試物有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的作用。,2020/8/1,93,（五）抗疲勞作用,本功能試驗(yàn)研究是以動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)為研究基礎(chǔ) 1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）運(yùn)動(dòng)試驗(yàn) a.負(fù)重游泳試驗(yàn) b.爬桿試驗(yàn) （2）生物化學(xué)指標(biāo)測(cè)定 a.血乳酸含量 b.血清尿素氮含量 c.肝/肌糖原比值測(cè)定,2020/8/1,94,2.試驗(yàn)原則 運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)與生化指標(biāo)檢測(cè)相結(jié)合。在進(jìn)行游泳或爬桿試驗(yàn)前，動(dòng)物應(yīng)進(jìn)行初篩。除以上生化指標(biāo)外，還可檢測(cè)血糖、乳酸脫氫酶、血紅蛋白以及磷酸肌酸等指標(biāo)。 3.結(jié)果判定 若1項(xiàng)以上(含1項(xiàng))運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)

45、和2項(xiàng)以上(含2 項(xiàng))生化指標(biāo)為陽(yáng)性，即可以判斷該受試物具有抗疲勞作用。,2020/8/1,95,（六）減肥作用,1.減肥原則 （1）減除體現(xiàn)人多余的脂肪，不單純以減輕體重為標(biāo)準(zhǔn)。 （2）每日營(yíng)養(yǎng)素的攝入量應(yīng)基本保證機(jī)體正常生命活動(dòng)的要求。 （3）對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯損害。,2020/8/1,96,2.試驗(yàn)項(xiàng)目,（1）動(dòng)物試驗(yàn)（首先建立動(dòng)物肥胖模型） 體重測(cè)定 體內(nèi)脂肪重量測(cè)定 （2）人體試食試驗(yàn) 主要測(cè)定指標(biāo)：體重、體重指數(shù)、腰圍、腹圍、臀圍、體內(nèi)脂肪含量。,2020/8/1,97,3.試驗(yàn)原則,在進(jìn)行減肥試驗(yàn)時(shí)，除上述指標(biāo)必測(cè)外，還應(yīng)進(jìn)行機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況檢測(cè)，運(yùn)動(dòng)耐力測(cè)試以及與健康有關(guān)的其它指標(biāo)的

46、觀察。該功能的人體試食試驗(yàn)為必做項(xiàng)目，動(dòng)物試驗(yàn)與人體試食試驗(yàn)相結(jié)合，綜合進(jìn)行評(píng)價(jià)。,2020/8/1,98,4.結(jié)果判定,在動(dòng)物試驗(yàn)中，體重及體內(nèi)脂肪重量2個(gè)指標(biāo)均陽(yáng)性，并且對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯損害，即可初步判定該受試物具有減肥作用。 在人體試食試驗(yàn)中，體內(nèi)脂肪量顯著減少，且對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯損害，可判定該受試物具有減肥作用。,2020/8/1,99,（七）耐缺氧作用,本功能試驗(yàn)研究是以動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)為研究基礎(chǔ) 1.試驗(yàn)項(xiàng)目 小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 2.結(jié)果判定 耐缺氧實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性，說明該受試物具有耐缺氧作用。,2020/8/1,100,（八）抗輻射作用,本功能試驗(yàn)研究是以動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)為研究基礎(chǔ) 1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （

47、1）亞急性試驗(yàn) 30天存活率或平均存活時(shí)間 白細(xì)胞總數(shù) （2）亞慢性或慢性試驗(yàn) 小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn) 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn),2020/8/1,101,2.試驗(yàn)原則,較高劑量一次輻射，選擇亞急性試驗(yàn)；小劑量多次輻射，選擇亞慢性或慢性試驗(yàn)。,2020/8/1,102,3.結(jié)果判定,亞急性試驗(yàn)項(xiàng)目中2項(xiàng)結(jié)果為陽(yáng)性，則可判定該受試物對(duì)較高劑量一次輻射有拮抗作用。 亞慢性或慢性試驗(yàn)中2項(xiàng)結(jié)果為陽(yáng)性，則可判定該受試物對(duì)小劑量多次輻射有拮抗作用。,2020/8/1,103,（九）抗突變作用,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 Ames試驗(yàn)或V79細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn) 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn) 小鼠睪丸染色體畸變?cè)囼?yàn),2020/8/1,

48、104,2.試驗(yàn)原則 Ames試驗(yàn)與V79細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)任選一項(xiàng)，采用體內(nèi)與體外試驗(yàn)相結(jié)合的原則。 3.結(jié)果判定 抗突變?nèi)?xiàng)試驗(yàn)中有兩項(xiàng)為陽(yáng)性時(shí)，則可判定該受試物具有抗突變作用。,2020/8/1,105,（十）抑制腫瘤作用,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 (1) 動(dòng)物誘發(fā)性腫瘤試驗(yàn) (2) 動(dòng)物移植性腫瘤試驗(yàn) (3) 免疫功能試驗(yàn) NK細(xì)胞活性測(cè)定 單核巨噬細(xì)胞功能測(cè)定,2020/8/1,106,2.試驗(yàn)原則 動(dòng)物誘發(fā)性腫瘤試驗(yàn)及動(dòng)物移植性腫瘤試驗(yàn)兩項(xiàng)中任選一項(xiàng)，同時(shí)必做2項(xiàng)免疫功能試驗(yàn) 3.結(jié)果判定 動(dòng)物誘發(fā)性腫瘤試驗(yàn)及動(dòng)物移植性腫瘤試驗(yàn)兩項(xiàng)試驗(yàn)中有一項(xiàng)為陽(yáng)性，并且對(duì)免疫功能無(wú)抑制作用，則可判定該受試物具

49、有抑制腫瘤的作用。,2020/8/1,107,（十一）輔助降血脂,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 體重 血清總膽固醇 甘油三酯 高密度脂蛋白膽固醇 （2）人體試食試驗(yàn) 血清總膽固醇 甘油三酯 高密度脂蛋白膽固醇,2020/8/1,108,2.試驗(yàn)原則,（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必測(cè)項(xiàng)目。 （2）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選用脂代謝紊亂模型法，預(yù)防性或治療性任選一種。用高膽固醇和脂類飼料喂養(yǎng)動(dòng)物可形成酯代謝紊亂動(dòng)物模型，再給予動(dòng)物受試樣品或同時(shí)給予受試樣品，可檢測(cè)受試樣品對(duì)高脂血癥的影響，并可判定受試樣品對(duì)脂質(zhì)的吸收、脂蛋白的形成、脂質(zhì)的降解或排泄產(chǎn)生的影響。,2020/8/1,109,（3）在進(jìn)行人

50、體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察后進(jìn)行。選擇單純血脂異常的人群，保持平常飲食，半年內(nèi)采血2次，如兩次血清總膽固醇（TC）均為5.26.24mmol/L或血清甘油三酯（TG）1.652.2mmol/L，均可作為備選對(duì)象，受試者最好為非住院的高血脂癥患者，自愿參加試驗(yàn)。受試期間保持平日的生活和飲食習(xí)慣，空腹取血測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。但年齡在18歲以下或65歲以上者、妊娠或哺乳期婦女、對(duì)功能食品過敏者、合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病、精神病患者、短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對(duì)結(jié)果的判斷者、未按規(guī)定食用受試樣品，無(wú)法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者不可作為人體試食試

51、驗(yàn)對(duì)象。,2020/8/1,110,3.結(jié)果判定,（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 輔助降血脂結(jié)果判定檢測(cè)中血清總膽固醇和甘油三酯二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品輔助降血脂動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。 輔助降低甘油三酯結(jié)果判定 甘油三酯二個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性；甘油三酯一個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)高密度脂蛋白膽固醇結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品輔助降低甘油三酯動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。 輔助降低血清總膽固醇結(jié)果判定 血清總膽固醇二個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性；血清總膽固醇一個(gè)劑量組結(jié)果陽(yáng)性，同時(shí)高密度脂蛋白膽固醇結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品輔助降低血清總膽固醇動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。,2020/8/1,111,（2）人體試食試驗(yàn),血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋

52、白膽固醇三項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)中，血清總膽固醇和甘油三酯二項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有輔助降血脂作用；血清總膽固醇、甘油三酯兩項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性，同時(shí)高密度脂蛋白膽固醇結(jié)果陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有輔助降低血清總膽固醇或輔助降低甘油三酯作用。,2020/8/1,112,（十二）清咽功能,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物試驗(yàn) 大鼠棉球植入試驗(yàn) 大鼠足趾腫脹試驗(yàn) （2）人體試食試驗(yàn) 咽部癥狀、體征,2020/8/1,113,2.試驗(yàn)原則,（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)為必做項(xiàng)目。 （2）大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)和大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)任選其一。 （3）在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察后進(jìn)行。選擇

53、慢性咽炎人群，主觀癥狀有咽痛、咽癢、咽干、干咳、異物感、多言加重等。,2020/8/1,114,3.結(jié)果判定,（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)或大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，可判定受試樣品清咽動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性。 （2）人體試食試驗(yàn) 咽部癥狀、體征明顯改善，癥狀、體征的改善率明顯增加，可判定受試樣品具有清咽的作用。,2020/8/1,115,（十三）調(diào)節(jié)血糖,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 高血糖模型動(dòng)物的空腹血糖值、糖耐量試驗(yàn)。 正常動(dòng)物的降糖試驗(yàn)。 （2）人體試食試驗(yàn) 空腹血糖值、糖耐量試驗(yàn)、胰島素測(cè)定、尿糖測(cè)定。,2020/8/1,116,2.試驗(yàn)原則,（1）建立高血糖動(dòng)物模型，常用四氧嘧啶作為

54、建模藥物。 （2）人體試食試驗(yàn)是必須項(xiàng)目，在動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)有效基礎(chǔ)上并對(duì)受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察后進(jìn)行。試驗(yàn)人群為型糖尿病患者，除測(cè)定規(guī)定的指標(biāo)外，應(yīng)加測(cè)一般健康指標(biāo)。,2020/8/1,117,3.結(jié)果判定,（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 動(dòng)物學(xué)試驗(yàn)有一項(xiàng)指標(biāo)陽(yáng)性； （2）人體試食試驗(yàn)的空腹血糖值、糖耐量試驗(yàn)兩項(xiàng)指標(biāo)中有一項(xiàng)陽(yáng)性，胰島素又未升高，可判定受試樣品有降血糖作用。,2020/8/1,118,（十四）改善胃腸道功能,改善胃腸功能表現(xiàn)在多方面：促進(jìn)消化吸收功能、改善胃腸道菌群功能、潤(rùn)腸通便、保護(hù)胃粘膜功能。分述如下： 1.促進(jìn)消化吸收功能 （1）試驗(yàn)項(xiàng)目 動(dòng)物試驗(yàn) 體重、食物利用率、胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

55、、消化酶活性、小腸吸收實(shí)驗(yàn) 人體實(shí)驗(yàn) 食欲、食量、胃脹腹感、大便性狀與次數(shù)、體征癥狀、體重、血紅蛋白、胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、小腸吸收實(shí)驗(yàn)。,2020/8/1,119,（2）試驗(yàn)原則,動(dòng)物試驗(yàn)與人體試驗(yàn)中的所列項(xiàng)目均為必做項(xiàng)目，人體試驗(yàn)還應(yīng)增加一般健康指標(biāo)。 針對(duì)糾正兒童食欲不良或成人消化不良者可從所列項(xiàng)目中選擇重點(diǎn)項(xiàng)目。,2020/8/1,120,（3）結(jié)果判定,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、消化酶活性、小腸吸收實(shí)驗(yàn)三項(xiàng)中一項(xiàng)陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果判定為陽(yáng)性。 針對(duì)糾正兒童食欲不振時(shí)，重點(diǎn)觀察人體試驗(yàn)中食欲、食量明顯增加，體重、血紅蛋白項(xiàng)中有一項(xiàng)陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果判定為有促進(jìn)消化吸收功能。 針對(duì)成人消化不良時(shí)， 項(xiàng)目中

56、體征癥狀、胃腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、小腸吸收實(shí)驗(yàn)項(xiàng)中一項(xiàng)陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果判定為有促進(jìn)消化吸收功能。,2020/8/1,121,2.改善胃腸道菌群功能,（1）試驗(yàn)項(xiàng)目（腸道菌群以cfu/g糞便計(jì)） 動(dòng)物試驗(yàn) 雙歧桿菌、乳桿菌、腸球菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。 人體實(shí)驗(yàn) 雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。 （2）試驗(yàn)原則 動(dòng)物與人體所列檢驗(yàn)項(xiàng)目均為必測(cè)項(xiàng)目。 人體試驗(yàn)為必做項(xiàng)目，還可以加測(cè)一般健康指標(biāo)。 動(dòng)物可用正常動(dòng)物或腸道菌群紊亂動(dòng)物模型。,2020/8/1,122,（3）結(jié)果判定,動(dòng)物試驗(yàn) A雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加，腸球菌、腸桿菌增加但幅度小于雙歧桿菌、乳桿菌的增幅，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無(wú)變化；B雙歧

57、桿菌、乳桿菌明顯增加而產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無(wú)變化、腸球菌、腸桿菌無(wú)變化。上兩項(xiàng)中一項(xiàng)符合可判定為陽(yáng)性。 人體試食試驗(yàn) A雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加，腸球菌、腸桿菌增加但幅度小于雙歧桿菌、乳桿菌的增幅，產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無(wú)變化；B雙歧桿菌、乳桿菌明顯增加而產(chǎn)氣莢膜梭菌減少或無(wú)變化、腸球菌、腸桿菌無(wú)變化。上兩項(xiàng)中一項(xiàng)符合可判定有改善胃腸道菌群,2020/8/1,123,3.潤(rùn)腸通便功能,（1）試驗(yàn)項(xiàng)目 動(dòng)物試驗(yàn)：體重、小腸吸收實(shí)驗(yàn)(小腸推進(jìn)速度)、排便時(shí)間、糞便重量或粒數(shù)、糞便性狀。 （2）試驗(yàn)原則 制造便秘動(dòng)物模型，與正常對(duì)照動(dòng)物一起實(shí)驗(yàn)。 不得引起動(dòng)物腹瀉。 （3）結(jié)果判定 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):糞便重量或粒

58、數(shù)明顯增加，小腸吸收實(shí)驗(yàn)、排便時(shí)間一項(xiàng)陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果判定為有潤(rùn)腸通便功能。,2020/8/1,124,4.保護(hù)胃粘膜功能,（1）試驗(yàn)項(xiàng)目 動(dòng)物試驗(yàn) 胃粘膜損傷情況（損傷面積、潰瘍情況）。 人體試驗(yàn) 胃部癥狀、體征、X線鋇餐或胃鏡檢查胃粘膜情況。 （2）試驗(yàn)原則 人體試驗(yàn)為必測(cè)項(xiàng)目。 人體試驗(yàn)還可加測(cè)一般健康狀況指標(biāo)。,2020/8/1,125,（3）結(jié)果判定,動(dòng)物試驗(yàn) 胃粘膜損傷情況有明顯改善，判定為陽(yáng)性。 人體試食試驗(yàn) 胃部癥狀、體征明顯改善，胃粘膜損傷癥狀好轉(zhuǎn)，可判定為有保護(hù)胃粘膜功能。,2020/8/1,126,（十五）改善睡眠,1.試驗(yàn)項(xiàng)目 動(dòng)物試驗(yàn): 體重。 睡眠時(shí)間。 睡眠發(fā)生率。

59、 睡眠潛伏期。 觀察指標(biāo):給被檢樣品在閾上劑量有催眠作用下是否延長(zhǎng)睡眠時(shí)間;在閾下劑量作用下是否加快入睡時(shí)間。,2020/8/1,127, 2.試驗(yàn)原則 (1)體重及另三項(xiàng)為必測(cè)項(xiàng)目。 (2)觀測(cè)被檢樣品對(duì)催眠劑(巴比妥或戊巴比妥) 在閾上或閾下劑量時(shí)的催眠作用。 3.結(jié)果判定 體重以外三項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目中兩項(xiàng)為陽(yáng)性，檢測(cè)結(jié)果判定為有改善睡眠功能。,2020/8/1,128,（十六）改善營(yíng)養(yǎng)性貧血, 1.試驗(yàn)項(xiàng)目 （1）動(dòng)物試驗(yàn)（所列項(xiàng)目均為必測(cè)項(xiàng)目） 體重 血紅蛋白 紅細(xì)胞壓積 血清鐵蛋白 紅細(xì)胞游離原卟啉 組織細(xì)胞鐵 （2）人體試驗(yàn) 體重 血紅蛋白 紅細(xì)胞壓積 血清鐵蛋白,2020/8/1,129,2.試驗(yàn)原則 (1)所列項(xiàng)目均為