實(shí)驗(yàn)七、革藍(lán)氏染色法.ppt

1、生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Exp. 4 Gram Stain,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Aim,Learn and practice Grams stain Learn the principle of Grams stain Know its importance in Bacteria taxonomy,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Introduction of Gram stain,Development of Gram stain the principle of Gram stain Importance of Gram stain for Microbiolo

2、gy,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Material,菌種: 參考菌：G+：Staphylococcus aureus, G-: Escherichia coli 待測(cè)菌：Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus 儀器 顯微鏡； 材料 載玻片，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，染色缸等。 染料 草酸銨結(jié)晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番紅染色液；,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Methods,涂片 初染 媒染 脫色 復(fù)染 鏡檢,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Development of Gram stain,Gram s

3、tain was developed by CGram a Denmark pathologist in1884. Bacteria can be divided into two group: one is Gram positive bacteria, the other is Gram negative bacteria.,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,革藍(lán)氏陽(yáng)性和陰性菌細(xì)胞壁成分比較,成分 占細(xì)胞壁干重的% 革藍(lán)氏陽(yáng)性菌 革藍(lán)氏陰性菌 肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（10） 磷壁酸 含量較高（50） 無(wú) 類脂質(zhì) 一般無(wú)（ 2） 含量較高（20） 蛋白質(zhì) 無(wú) 含量較高,生命

4、科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,Principle,G-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，增加了細(xì)胞壁的通透性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復(fù)染后就成紅色。 G菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細(xì)菌仍保留初染時(shí)的顏色。,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,革藍(lán)氏染色的意義,細(xì)菌分類鑒定 指導(dǎo)臨床用藥,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,微生物分類鑒定的特征,形態(tài)學(xué)和生理生化特征 血清學(xué)實(shí)驗(yàn)和噬菌體分型 氨基酸序列和蛋白質(zhì)分析 核酸堿基組

5、成和序列分析,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,形態(tài)學(xué)特征,培養(yǎng)特征、菌落的形狀、大小、顏色、表面特征、光澤等 細(xì)胞形態(tài)：形狀、大小、排列方式 特殊結(jié)構(gòu)：鞭毛、芽孢、孢子、莢膜等 細(xì)胞內(nèi)涵物 染色反應(yīng)：革藍(lán)氏染色、抗酸性染色 運(yùn)動(dòng)性,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,涂片,要用活躍生長(zhǎng)期的幼培養(yǎng)物作革蘭氏染色; 注意練習(xí)無(wú)菌操作； 在載玻片上滴半滴生理鹽水； 取菌不要貪多，接種環(huán)上肉眼可見(jiàn)菌苔痕跡即可； 菌苔在生理鹽水中涂片要均勻，局部不宜過(guò)厚,以免脫色不完全造成假陽(yáng)性。,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,初染 將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液(加量以蓋滿菌膜為度)，染色1-2min。傾去染色液，用自來(lái)水小心地沖洗。 媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。 脫色 滴加95%乙醇，脫色20-25s立即水洗，以終止脫色。 復(fù)染 滴加蕃紅，染色2-3min，水洗。最后用吸水紙輕輕吸干。,生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)教研室YJH,干燥后，置油鏡觀察