薄層層析技術(shù).ppt

1、薄層層析技術(shù),定義,英文為thin layer chromatography 又稱薄層色譜，色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種重要實驗技術(shù)，屬固液吸附色譜，兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時，把吸附層加厚加大，因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。是將吸附劑、載體或其他活性物質(zhì)均勻涂鋪在平面板（如玻璃板、塑料片、金屬片等）上，形成薄層（常用厚度為0.25毫米左右）后，在此薄層上進行層析分離的分析方法。,薄層層析的分析程序,將樣品溶液用毛細管點在薄層

2、板的一端，置密閉槽中,加入適宜溶劑為流動相。由于毛細管原理，溶劑被吸上，沿板移動，并帶動樣品中各組分向前移動，這個過程稱為展開。由于各組分性質(zhì)不同，移動距離不同，展開一定距離后，即得互相分離的組分斑點?？捎眠m當方法使各組分在板上顯示其位置，如組分本身有顏色，即可直接觀察，否則可噴顯色試劑或在紫外燈下觀察熒光等辦法確定斑點位置。,薄層層析方法,薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為硅膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣，除吸附法外，也可進行分配、離子交換、分子排阻等機理的層析，即將鋪制薄層的材料相應(yīng)換為涂以固定相的載體離子交換劑、凝膠等，其操作與吸附法基本相同。,通常用比移值Rf表示

3、組分移動的特性，其定義為： Rf組分移動的距離溶劑前沿移動的距離原點至組分斑點中心的距離原點至溶劑前沿的距離。 在薄層、溶劑、溫度等各項實驗條件恒定的情況下，各物質(zhì)的Rf值是不變的，它不隨溶劑移動距離的改變而變化。Rf與分配系數(shù)K的關(guān)系： Rf1(1+K),是由薄層性質(zhì)決定的一個常數(shù)。由此可見，K值愈大，溶質(zhì)分配于固定相的趨勢愈大，而Rf值愈?。环粗?，K值愈小，則分配于流動相的趨勢愈大，Rf值是定性分析的重要指標。在流動相、固定相和展開條件固定時，Rf值是組分的特性，可用以進行定性鑒別。實用時也常將樣品與已知純物質(zhì)同時展開，比較二者移動情況，進行定性分析。,（一）制版,鋪制薄層板時，要求基底板

4、潔凈平整，可用干法或濕法鋪制。現(xiàn)常用濕法制板，即將吸附劑和粘合劑（如燒石膏）按一定比例混合，加入適量水調(diào)勻，用涂布器將此勻漿緩慢地移過基底板，放置晾干，再經(jīng)適當烘烤活化后即可使用。如不加粘合劑和水，直接將吸附劑均勻地鋪成薄層，則為干法制板?，F(xiàn)在市場上已有各種制好的薄層板出售，統(tǒng)稱預(yù)制板。,（二）展開,有多種方式，以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置，將展開溶劑加于低部，使之自下向上移動。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端，使其自上向下流動。 平行展開時，將板平放，溶劑被吸上至薄層板點有樣品的一端,進行展開。,使用圓形薄層板時,將樣品點在圓心附近，使溶劑自圓心向圓周方向移動，稱為環(huán)形展開或徑

5、向展開；將樣品點在圓周位置，使溶劑自圓周向圓心移動的為向心展開，適用于f值大的組分的分離。將點樣品處附近的吸附劑刮去，使溶劑只能通過樣品點附近的較窄部分前進展開，因而溶劑前緣呈弧形的展開方式，也稱徑向展開，這種方式對較難分離的組分可能效果好些。,展開一次后取出薄層板使溶劑揮發(fā)，再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向展開的稱多次展開。將樣品點在方形薄層板的一角，先沿著一個方向展開，然后將板轉(zhuǎn)動 90，再沿著另一方向展開的為雙向展開。多次展開和雙向展開都可加強分離效果。,特點,操作簡便，設(shè)備簡單，除光密度計外，不需特殊設(shè)備，分離效果較好，時間較短，一塊板上可同時分離許多樣品。除低沸點物質(zhì)外，各種無機和有機化合物都可進行分離。,應(yīng)用和發(fā)展,廣泛應(yīng)用于石油、化工、醫(yī)藥、生化等方面。樣品用量一般為幾至幾