腫瘤精準靶向治療PPT課件.ppt

1、腫瘤治療相關基因檢測,2. 腫瘤個體化治療發(fā)展趨勢,循環(huán)腫瘤細胞,臨床上治療腫瘤的方法,患者對藥物是否敏感？毒性是否可耐受？ 患者治療后轉移復發(fā)風險有多高？,個體化治療：醫(yī)學概念。應用它不僅降低并發(fā)癥的發(fā)生,還降低醫(yī)療費用。,腫瘤標準化治療 期患者：手術/化療 、期患者：放/化療+手術 局部晚期患者：手術、化療、放療、靶向,腫瘤個體化治療 標本基因檢測遺傳特性選擇化療/靶向藥物,病理分型,分子分型,已發(fā)現并確認至少9種EML4-ALK融合基因的突變體：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7 檢測方法：RT-PCR, FISH, PCR-測序等,EML4和ALK兩個基因分別

2、位于人類2號染色體的p21和p23帶,克唑替尼的靶標EML4-ALK融合基因,靶向EGFR的抗腫瘤藥物,類別一：小分子酪氨酸激酶抑制劑（ EGFR TKI) 作用機制：抑制EGFR胞內區(qū)酪氨酸激酶活性，阻斷EGFR信號通路； 藥物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄羅替尼（羅氏）。 類別二：單克隆抗體(mAb) 作用機制：與EGFR胞外區(qū)結合，阻斷配體與EGFR的結合； 藥物代表：西妥昔（默克）；貝伐單抗（羅氏）。,基因EGFR熱點突變位點,EGFR主要突變在：外顯子18，19，20，21 耐藥突變：T790M,靶向藥物西妥昔單抗靶標K-ras基因檢測,NCCN明確指出西妥昔單抗（愛必妥）用藥之前須

3、檢測K-ras基因突變檢測； K-ras突變型患者并不能從抗EGFR治療（愛必妥）中獲益,反而徒增不良反應危險和治療費用； 中國人群中K-ras基因突變率15% ！ 15%的病人不應該使用愛必妥！,World J Gastroenterol. 2011 November 21; 17(43): 4779-4786.,基因KRAS熱點突變位點,10,KRAS主要突變在： 外顯子2（密碼子12，13 ），3（密碼子61）,個體化檢測平臺,基因突變檢測 ARMS技術，測序等,ARMS技術普通PCR,等位基因特異性擴增法（Allele Specific Amplification，ASA）建立于198

4、9年，是PCR技術應用的發(fā)展，也稱擴增阻滯突變系統(tǒng)（Amplification Refractory Mutation System，ARMS）、等位基因特異性PCR（Allele Specific PCR，ASPCR）等。,方法： 2條正向引物（針對正常DNA，突變DNA） 1條反向引物 2個平行的PCR反應 普通PCR儀,應用：對微量突變進行檢測。,TaqMan-ARMS技術,TaqMan-ARMS探針技術基于實時PCR平臺，結合了ARMS突變富集和Taqman-MGB特異性熒光檢測兩種技術。,Taqman-MGB：針對SNP位點特異性擴增的探針，可區(qū)分一個堿基的突變。,一個PCR體系中：

5、1對引物，1條探針 每個位點需要做至少兩管PCR擴增！,SNP位點檢測應用,EGFR基因突變檢測方法靈敏度的比較,測序技術發(fā)展歷程,Sanger Sequencing （1977）,Ion Semiconductor Sequencing （2011）,Next-Gen Sequencing （2005以后）,Ion Torrent半導體測序原理,Ion Torrent半導體測序平臺及芯片,PI芯片：sequence exomes and whole transcriptomes（5Gb）,目前成熟的腫瘤分子靶向藥物敏感性基因檢測,基因表達量（mRNA）檢測 指導個體化化療,可使標準化療方案得

6、到個體化應用,mRNA檢測主要技術特色,采用熒光定量PCR技術，采用內參比RNA作為質控對照，應用beta-actin作為內對照，定量檢測檢測目的基因mRNA表達水平。 適用于各種腫瘤組織檢測，包括石蠟標本、穿刺標本、冰凍活檢標本等。 國內采用校準RNA（Calibrator RNA）方法進行基因表達定量。,23,基礎：5000例樣本 人種：中國患者樣本 標準：正態(tài)分布 定位：精確到1% 統(tǒng)計：p0.05,Q-PCR檢測基因表達數據庫,NCCN 2012年版臨床治療指南明確指出： 患者接受吉西他濱化療前進行RRM1 mRNA檢測可提高治療有效率和患者生存率。,RRM1表達與吉西他濱療效相關的臨

7、床數據,ERCC1表達與鉑類藥物療效相關的臨床數據,ERCC1低表達患者，能從鉑類輔助化療中獲益.,BRCA1/2表達與鉑類藥物療效 相關的臨床數據,BRCA1過度表達 鉑類耐藥的預測因子 抗微管類藥物的敏感因子,28,低TS mRNA水平的腫瘤患者接受氟類化療的效果較好，中位生存期較長。 TS低表達的患者對培美曲賽的療效好。,TS高表達影響氟類和培美曲塞藥效,Shirota Y et al. J Clin Oncol. 2001;19:4298-304,TUBB3高表達對紫杉醇和長春堿類不敏感,TUBB3陽性表達是抗微管類藥物敏感預測因子,30,STMN1表達檢測意義,預后： 表達水平越高，

8、患者的生存率越低，腫瘤發(fā)生轉移的風險越高。,療效： 低表達接受長春瑞濱/順鉑治療的效果較好，中位生存期較長； STMN1高表達接受長春瑞濱/順鉑的療效較差。,Elizabeth A et al. Cancer Res. 2002;62:6864-6869,乳腺癌患者預后指標及曲妥珠單抗治療的靶點 胃癌曲妥珠單抗靶向治療的靶點,HER2基因檢測,FDA 2013年關于胃癌HER2檢測流程建議,ASCO/CAP2013指南關于乳腺癌HER2檢測推薦： IHC檢測HER2蛋白表達水平 FISH檢測HER2基因擴增,靶向藥物敏感性解決方案,化療藥物敏感性解決方案,循環(huán)腫瘤細胞（CTC）檢測,1869年

9、 Aust Med J，Ashworth最早在轉移性癌癥患者血液中觀察到。 2005年 N Engl J Med，Cristofanilli證實治療前CTC數目是轉移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預測因子。,循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。,循環(huán)腫瘤細胞,循環(huán)腫瘤細胞（CTC）檢測,全球唯一一個獲得FDA和SFDA認證的循環(huán)腫瘤細胞檢測系統(tǒng),(Circulating Tumor Cell),強生CellSearch系統(tǒng)國內注冊情況,如何鑒別出CTC?,CTC,Anti-EpCAM磁珠,Anti-CK-PE,Nucleus DAPI,CK,EpCAM,在C

10、ellSearch檢測中，CTC 被設定為： EpCam （上皮來源細胞表面抗原） CK-8,18 和/或19 （腫瘤細胞表面抗原） DAPI （細胞核染料） CD45 （白細胞表面抗原）,+ + + -,CTC數量與無進展生存期和總生存期的關系,化療后CTC數量少于閾值的患者無進展生存期和總生存期明顯高于CTC數量大于閾值的患者。 化療前后CTC數量都少于閾值 的患者無進展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出CTC數量少于閾值的患者。,乳腺癌閾值5，結直腸癌閾值3，前列腺癌閾值5,為什么要選擇使用CTC系統(tǒng)? 唯一的標準化，自動化循環(huán)腫瘤細胞計數系統(tǒng) 具可重復性和高敏感度 系統(tǒng)最低檢測限度：

11、7.5ml外周血中的1個腫瘤細胞 臨床意義 預測無進展生存期和總生存期 轉移性癌癥的監(jiān)護 療效監(jiān)控 復查（早于影像學發(fā)現疾病進展情況）,CTC檢測樣本,使用CellSave儲存管采集靜脈血液標本10ml 輕輕顛倒8次，防止凝塊 樣本室溫條件(15-30攝氏度)下96小時之內接受處理 接受阿霉素治療的患者給藥之后，至少需要等待7天 術后15天以后,樣本溶血及結塊不能用于CTC檢測！,送檢樣本要求,腫瘤個體化用藥是發(fā)展趨勢 腫瘤個體化用藥分子靶標及靶向藥物開發(fā)的關聯(lián)研究越來越多 部分基因檢測近年已逐步在臨床推廣 比較完整的個體化診療解決方案逐步誕生,結 語,腫瘤個體化治療發(fā)展趨勢,為什么要做分子檢測？,腫瘤分子分型時代要到來？,在美國華盛頓大學，Lukas Wartman醫(yī)生患上了成人急性淋巴細胞白血病。 Lukas的病情很快