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1、,第14章基因重組和基因工程,Gene recombination環(huán)DNA是線性DNA 1000倍以上穿孔法:電穿孔機(jī),(6)重組者的篩選和鑒定,1,陽性菌落審查:抗藥性段宜恩:ampr,tetr,netr 包含細(xì)菌的X-gal重組pUC18的白色殖民地,藍(lán)色殖民地,包含矢量pUC18的藍(lán)色殖民地,半乳糖股利C末端編碼序列,轉(zhuǎn)換,轉(zhuǎn)換,使用互補(bǔ)原理篩選(白斑篩選)的重組pUC18, DNA重組技術(shù)案例:構(gòu)建基因庫構(gòu)建人類基因組庫構(gòu)建construction of a genomic library of human DNA in a bacteriophage l vector。 人類基因組D
2、NA通過限制性內(nèi)切酶(Sau 3A)部分消化生成具有約20-kb粘性末端的部分重疊的隨機(jī)片段。傳遞體消化:噬菌體DNA消化為Bam H1,去除中間的可替換片段,結(jié)合兩個(gè)有粘性末端的片段基因組片段和噬菌體DNA,在重組的DNA體外組裝活性噬菌體,并感染大腸桿菌菌種培養(yǎng)、篩選、擴(kuò)增保存、Infect E.coli,Individual。production of overlapping restriction fragments by partial digestion of human genomic DNA with sau3a . this restriction endo nuclease
3、 recogning seespartial digestion of this region of DNA would yield a variety of overlapping fragments(blue)20kb long . use of such overlapping fragments iin,缺點(diǎn):但牙齒系統(tǒng)缺乏轉(zhuǎn)錄后處理機(jī)制,真核基因組DNA表達(dá)的話會(huì)渡邊杏。翻譯后處理機(jī)制不足。例如,不能進(jìn)行糖化修飾等。表達(dá)的蛋白質(zhì)通常形成包涵體。酵母、昆蟲、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn):轉(zhuǎn)錄后處理,即切割內(nèi)含子。翻譯后可以處理,即糖化變形等;通常不形成包涵體,可以正確折疊。缺點(diǎn):但是技術(shù)
4、難度高,成本高,表達(dá)量低。,2,真核表達(dá)系統(tǒng),第3節(jié)重組DNA與醫(yī)學(xué)的關(guān)系,(1)疾病基因的發(fā)現(xiàn),(2)生物制藥,(3) DNA診斷,(4)基因治療,(5)預(yù)防遺傳病,重組DNA藥物,photograph showing a transgenic mouse with an active rat growth hormone gene(left)。this transgenic mouse is twice the size of a normal mone。1997年二月二十三日,英國Roslin研究所Wilmut小組在英國自然雜志上宣布成人羊劉邦上皮細(xì)胞(體細(xì)胞)核移植,多莉克隆羊,名叫多莉克隆羊,名叫多莉性別:女性種族:哺乳動(dòng)物,??疲蛏眨?996年七月5日出生生存5人死亡:2003概念:DNA
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