基因重組與基因工程1030和112.ppt

1、，第14章基因重組和基因工程，Gene recombination環(huán)DNA是線性DNA 1000倍以上穿孔法：電穿孔機(jī)，(6)重組者的篩選和鑒定，1，陽性菌落審查：抗藥性段宜恩：ampr，tetr，netr 包含細(xì)菌的X-gal重組pUC18的白色殖民地，藍(lán)色殖民地，包含矢量pUC18的藍(lán)色殖民地，半乳糖股利C末端編碼序列，轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換，使用互補(bǔ)原理篩選(白斑篩選)的重組pUC18， DNA重組技術(shù)案例：構(gòu)建基因庫構(gòu)建人類基因組庫構(gòu)建construction of a genomic library of human DNA in a bacteriophage l vector。 人類基因組D

2、NA通過限制性內(nèi)切酶(Sau 3A)部分消化生成具有約20-kb粘性末端的部分重疊的隨機(jī)片段。傳遞體消化：噬菌體DNA消化為Bam H1，去除中間的可替換片段，結(jié)合兩個(gè)有粘性末端的片段基因組片段和噬菌體DNA，在重組的DNA體外組裝活性噬菌體，并感染大腸桿菌菌種培養(yǎng)、篩選、擴(kuò)增保存、Infect E.coli，Individual。production of overlapping restriction fragments by partial digestion of human genomic DNA with sau3a . this restriction endo nuclease

3、 recogning seespartial digestion of this region of DNA would yield a variety of overlapping fragments(blue)20kb long . use of such overlapping fragments iin，缺點(diǎn)：但牙齒系統(tǒng)缺乏轉(zhuǎn)錄后處理機(jī)制，真核基因組DNA表達(dá)的話會(huì)渡邊杏。翻譯后處理機(jī)制不足。例如，不能進(jìn)行糖化修飾等。表達(dá)的蛋白質(zhì)通常形成包涵體。酵母、昆蟲、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄后處理，即切割內(nèi)含子。翻譯后可以處理，即糖化變形等；通常不形成包涵體，可以正確折疊。缺點(diǎn)：但是技術(shù)

4、難度高，成本高，表達(dá)量低。，2，真核表達(dá)系統(tǒng)，第3節(jié)重組DNA與醫(yī)學(xué)的關(guān)系，(1)疾病基因的發(fā)現(xiàn)，(2)生物制藥，(3) DNA診斷，(4)基因治療，(5)預(yù)防遺傳病，重組DNA藥物，photograph showing a transgenic mouse with an active rat growth hormone gene(left)。this transgenic mouse is twice the size of a normal mone。1997年二月二十三日，英國Roslin研究所Wilmut小組在英國自然雜志上宣布成人羊劉邦上皮細(xì)胞(體細(xì)胞)核移植，多莉克隆羊，名叫多莉克隆羊，名叫多莉性別：女性種族：哺乳動(dòng)物，?？疲蛏眨?996年七月5日出生生存5人死亡：2003概念：DNA