干細(xì)胞基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究

1、Thursday, September 10, 2020,干細(xì)胞基礎(chǔ)與應(yīng)用基礎(chǔ)研究,廣西醫(yī)科大學(xué)研究生選修課課程 組胚教研室 陳維平,內(nèi)容安排 一、理論課 1、細(xì)胞體外培養(yǎng)基本技術(shù)和方法討論 2、干細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 3、胚胎干細(xì)胞 4、成體（組織）干細(xì)胞 5、討論交流 二、實(shí)驗(yàn)課 1、干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與觀察 三、考核 內(nèi)容：設(shè)計(jì)一份完整的“XX干細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法（流程）” 時(shí)間：2014年1月,干細(xì)胞基礎(chǔ)與應(yīng)用基礎(chǔ)研究,干細(xì)胞基礎(chǔ)與應(yīng)用基礎(chǔ)研究（一） 細(xì)胞體外培養(yǎng)基本技術(shù)和策略討論,（一）基本概念 1,體外培養(yǎng) (In vitro culture) 對(duì)象：細(xì)胞（特定條件下、單一細(xì)胞成份）

2、組織 器官 胚胎（全胚培養(yǎng) Holo-embryo culture） 條件：體內(nèi)生存環(huán)境的模擬 （天然優(yōu)化環(huán)境人工環(huán)境） 目的：1、建立活體結(jié)構(gòu)成分在體外生存、生長(zhǎng)的 適宜環(huán)境 2、應(yīng)用,（一）基本概念 2,體內(nèi)培養(yǎng)(In vivo culture) 方式：移植（Transplantation） 條件：異體相似環(huán)境 優(yōu)點(diǎn)：最大限度模擬自然生長(zhǎng)環(huán)境 目的：分化研究、臨床治療、特殊 目的（如珍貴細(xì)胞株污染的處理）,（二）基本條件（模擬）,營(yíng)養(yǎng)條件的模擬 水： 無(wú)機(jī)鹽： 葡萄糖： 維生素： 氨基酸： 細(xì)胞因子(Cytokine) ：未知因素 理化條件的模擬 溫度： 液體滲透壓： 氧與酸堿度： 細(xì)胞之

3、間的相互關(guān)系： 培養(yǎng)基的選擇,一、水,細(xì)胞及機(jī)體內(nèi)環(huán)境溶解或分散狀態(tài)離子和/或分子的水溶液（化學(xué)基礎(chǔ)） 水的重要性質(zhì)： 惰性大多數(shù)物質(zhì)溶于水而不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。 熱穩(wěn)定性和導(dǎo)熱性。 表面張力等等：表面張力是維持細(xì)胞形態(tài)的重要條件。,二、無(wú)機(jī)鹽,存在形式：離子狀態(tài)為主 結(jié)合（蛋白質(zhì)或脂質(zhì)） 形成與維持培養(yǎng)液的晶體滲透壓 對(duì)細(xì)胞功能活動(dòng)的支持作用 細(xì)胞和組織類型不同，對(duì)無(wú)機(jī)鹽的要求也不同 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌瑢?duì)培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽的要求也不同 實(shí)驗(yàn)步驟的目的不同，對(duì)培養(yǎng)基中無(wú)機(jī)鹽的要求也不同,三、理化條件 1,溫度：3537 細(xì)胞對(duì)低溫耐受能力強(qiáng)過(guò)高溫 1、應(yīng)該對(duì)實(shí)驗(yàn)有全過(guò)程的考慮 2、高溫的結(jié)果是一樣的 3、

4、低溫條件下細(xì)胞活動(dòng)減緩至停止 4、對(duì)低溫的耐受能力與細(xì)胞類型、個(gè)體年齡等因素有關(guān) 5、低溫的危害與細(xì)胞內(nèi)外冰晶形成的不均衡有關(guān)，故降溫應(yīng)該是緩慢的，避免冰晶形成；復(fù)溫應(yīng)該是快速的。 液體滲透壓：正常血漿 280310 mOsm/kg； （主要由晶體滲透壓構(gòu)成 膠體滲透壓1.5 mOsm/kg） 酸堿度： 7.36 7.44 耐受范圍 6.08.0；,三、理化條件 2,細(xì)胞之間的相互關(guān)系： 1、從組織水平的認(rèn)識(shí) 細(xì)胞是結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，而組織是細(xì)胞的存在形式。 2、從細(xì)胞水平的認(rèn)識(shí) a.直接接觸型；膜表面分子結(jié)合 b.直接聯(lián)系型；胞間間隙連接 c.間接聯(lián)系型；生物因子傳遞,三、理化條件 3,

5、生長(zhǎng)基質(zhì)（Ground substance）： 大多數(shù)機(jī)體內(nèi)的細(xì)胞不是生活在液態(tài)環(huán)境中的，體外培養(yǎng)環(huán)境下表現(xiàn)為貼壁、附壁生長(zhǎng)，培養(yǎng)器皿的表面不適合細(xì)胞的這一特性，必需包被某些物質(zhì)，以幫助細(xì)胞貼壁、附壁生長(zhǎng)。 1、多聚賴氨酸(Polylysine) 0.05 mg/ml 2、纖維連接蛋白(Fibronectin) 3、膠原 （如 鼠尾膠） 4、層粘連蛋白(Laminin) 510g/ml,四、培養(yǎng)基的選擇 1,一、基本概念 培養(yǎng)基(Nutrient medium)：多指商品，固態(tài)或粉劑，未 經(jīng)溶劑溶解的狀態(tài)。 培養(yǎng)液(Culture solution medium)：用溶劑溶解后的溶 液，一般添

6、加有血清、抗生素、活性因子等等。 條件培養(yǎng)液(Conditioned medium)：經(jīng)過(guò)某些細(xì)胞培養(yǎng)， 含有特定的（已知或未知）細(xì)胞分泌物的培養(yǎng)液。,參考文獻(xiàn)只能提供基本的參考，除重復(fù)性實(shí)驗(yàn)外，具體的實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)該從多個(gè)角度來(lái)綜合考慮，必要時(shí)還應(yīng)該做探索性實(shí)驗(yàn)。,二、常用類型 天然培養(yǎng)基：血清、胚胎滲出液、水解蛋白 合成培養(yǎng)基：RPMI1640、Eagle MEM系列（BME、DMEM、IMEM、MEM）、HamF12。 無(wú)血清培養(yǎng)基：化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基，對(duì)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮图?xì)胞類型的針對(duì)性強(qiáng)。 1、基礎(chǔ)培養(yǎng)液：DMEM HamF12 = 1 1 2、附加成分： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒓?xì)胞類型等因素設(shè)定。如

7、B27、N-2，針對(duì)神經(jīng)元；G-5，針對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,四、培養(yǎng)基的選擇 2,（三）基本步驟,取材 ：目的明確、取材準(zhǔn)確、避免過(guò)多的損失和損傷。 分離: 制作細(xì)胞懸液。 純化： 提高目的細(xì)胞富集度。 原代培養(yǎng)：目的細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng)、擴(kuò)增。 傳代培養(yǎng)：進(jìn)一步擴(kuò)增、純化。 鑒定：定質(zhì)、定量。 凍存與復(fù)蘇：保存,連續(xù)傳代培養(yǎng),一、取材 1,（一）、實(shí)驗(yàn)的目的： 直接影響實(shí)驗(yàn)各環(huán)節(jié)，如培養(yǎng)基的選擇、培養(yǎng)時(shí)間的長(zhǎng)短等等。,取材是整個(gè)實(shí)驗(yàn)的重要步驟之一，決定了后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟的效率。,一、取材 2,（二）、細(xì)胞及其所在組織的性質(zhì)： 幫助確定分離的方法、消化酶的選擇與使用等等。 （三）、操作流程的優(yōu)化： 應(yīng)

8、該充分考慮保持細(xì)胞活力：操作時(shí)間短、細(xì)胞損失和損傷少。,一、取材 3,細(xì)胞懸液(Cell suspension)： 單個(gè)細(xì)胞存在于溶液（培養(yǎng)液、平衡液、緩沖液等）。 一般程序：、解剖充分暴露、洗滌、剔除多余組 織。 、分割1 mm 3植塊植塊培養(yǎng) 、分離（散）細(xì)胞機(jī)械解離、酶消化、 鰲合劑解離。 、篩網(wǎng)過(guò)濾 、低速離心 500800 rm510 min 8001000 rm 510 min 、計(jì)數(shù)、調(diào)節(jié)細(xì)胞密度10 5個(gè)ml,二、分離與純化 1,分離與純化在概念上沒有明確的區(qū)別，也不是一個(gè)單一的、獨(dú)立的步驟，往往貫穿在整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程之中。 分離與純化是衡量細(xì)胞培養(yǎng)成功與否的重要標(biāo)志；也是建

9、立細(xì)胞系（細(xì)胞株）的前提。 1、細(xì)胞分離（Separation）：從組織材料、細(xì)胞懸液中獲取目的細(xì)胞。 2、細(xì)胞純化（Purification）：從異質(zhì)性的混合物中獲得單一類型細(xì)胞。 3、富集（Enrichment）：分離純化后，目的細(xì)胞數(shù)量所達(dá)到的比例。,二、分離與純化 2,（一）基本原理 1、根據(jù)細(xì)胞的物理特性，如密度、電荷等。 2、根據(jù)細(xì)胞的生物學(xué)特性，如貼壁緊密程度、貼壁快慢、特異性表面標(biāo)志等。 3、根據(jù)其它細(xì)胞特性 （二）基本方法 1、機(jī)械分離與酶學(xué)分離 2、基于物理性狀的分離純化技術(shù)、速度沉降法 3、根據(jù)細(xì)胞表面電荷的分離方法 4、利用細(xì)胞表面標(biāo)志的分離方法 5、根據(jù)其它細(xì)胞特性的

10、分離方法,機(jī)械分離與酶學(xué)分離1,1、取材過(guò)程中的分離 盡可能剔除其它結(jié)構(gòu)、組織。 充分沖洗，必要時(shí)可考慮添加抗生素。 2、篩網(wǎng)過(guò)濾 根據(jù)組織、細(xì)胞的類型，細(xì)胞大小來(lái)選擇篩網(wǎng)的材 質(zhì)、孔徑大小 3、酶學(xué)分離 對(duì)同一種組織，采用不同的酶消化，細(xì)胞富集的類 型也不同。 舉例：對(duì)皮膚消化 胰蛋白酶 ？ 膠原酶 ？,機(jī)械分離與酶學(xué)分離2,4、培養(yǎng)過(guò)程中的選擇性 體外培養(yǎng)過(guò)程中的自然法則： a、富集多、活力強(qiáng)、增殖能力強(qiáng)的細(xì)胞類型會(huì)表現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)。 b、細(xì)胞集落可以出現(xiàn)區(qū)域性分布。 方法： 機(jī)械性刮除、選擇性消化 目的： 清除 或 收集,基于物理性狀的分離純化技術(shù) 1,優(yōu)點(diǎn)：無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行復(fù)雜的（化學(xué)、生

11、物 學(xué)等）處理，避免了細(xì)胞發(fā)生變化， 對(duì)細(xì)胞的活力影響較少。 關(guān)鍵：1、密度梯度形成介質(zhì)的選擇。 2、密度梯度的配置。,也稱為密度梯度離心（Density gradient centrifugation）技術(shù),沉降速度=離心力 細(xì)胞體積 細(xì)胞密度和介質(zhì)密度差 / 介質(zhì)黏度,介質(zhì)選擇的原則： 1、密度范圍大 包括所需要的密度。 2、溶液的黏度低 較小離心力和較短離心 時(shí)間可達(dá) 到分離效果 3、易于測(cè)定其密度（濃度）。 4、不損傷細(xì)胞、不改變細(xì)胞生物學(xué)特性。 5、離心分離后易于除去。 6、不妨礙、不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究的目的。,基于物理性狀的分離純化技術(shù) 2,基于物理形狀的分離純化技術(shù) 3常用介質(zhì),1

12、、血清白蛋白 早期常用，但黏度太高。 2、聚蔗糖（Polysucrose） 即Ficoll，實(shí)驗(yàn)室常見，缺點(diǎn)是：黏度、滲透毒性隨濃度增加而增加。使用時(shí)注意避免。 3、泛影酸鹽 常用的“淋巴細(xì)胞分離液（密度：1.0770.001g/ml）” 就是泛影酸鹽和Ficoll配制而成，以避免Ficoll黏度、滲 透毒性隨濃度增加而增加的缺點(diǎn)。,基于物理形狀的分離純化技術(shù) 4常用介質(zhì),4、硅膠顆粒 Percoll （密度：1.130.005g/ml） 優(yōu)點(diǎn)：（1）穩(wěn)定性好?？砷L(zhǎng)期保存。 （2）密度稀釋范圍大，包括了大多數(shù)細(xì)胞密度。 （3）溶液產(chǎn)生的滲透壓小，全密度范圍內(nèi)維持 等張。 （4）黏度低，較小離心

13、力和較短離心時(shí)間可達(dá) 到分離效果。 （5）易于洗滌清除，對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。 （6）高速離心時(shí)可形成連續(xù)密度剃度。 （10000 r/min） （7）用量少，經(jīng)濟(jì)。,基于物理形狀的分離純化技術(shù) 5常用方法,1、一步密度梯度離心法 高密度介質(zhì)、低速離心 依據(jù)細(xì)胞的密度和體積: 密度大于介質(zhì)的在介質(zhì)之下；密度小于介質(zhì)的在介質(zhì)之上 體積大的沉降速度快；體積小的沉降速度慢。 注意：對(duì)不同物種的細(xì)胞，分離介質(zhì)的密度稍有不同。,基于物理形狀的分離純化技術(shù) 6常用方法,2、等密度梯度離心法 依據(jù)細(xì)胞的密度 a、連續(xù)密度梯度： 密度逐漸增高的介質(zhì)體系 c = m 時(shí)，沉降速度為零，細(xì)胞停留在密度相同的介質(zhì)區(qū)帶內(nèi)。

14、b、不連續(xù)密度梯度： 密度遞減、順序、分層分布介質(zhì)體系， 時(shí)細(xì)胞停留在 m 1 c m2的界面上。,基于物理形狀的分離純化技術(shù) 7常用方法,3、速度沉降法 依據(jù)細(xì)胞的密度和體積，但以體積為主要因素。 a、單位重力速度沉降法： 單位重力作用，低密度介質(zhì)（BSA + 0.01 mol/L PBS，梯度：1.00991.0123 g/ml） 優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞回收率高、重復(fù)性好、分離量大。 缺點(diǎn)：時(shí)間太長(zhǎng)（數(shù)個(gè)小時(shí)?。?，細(xì)胞活力易 受影響。 b、低速離心速度沉降法： 5%20% Ficoll，100 g，25 min 的條件下。,根據(jù)其它細(xì)胞特性的分離方法1,一、反復(fù)植塊培養(yǎng)法 原理：不同的細(xì)胞從植塊中遷移

15、出來(lái)的時(shí)間、速度不同。 優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞在取材時(shí)受損傷少 缺點(diǎn)：純化周期長(zhǎng)，細(xì)胞純度低，細(xì)胞產(chǎn)量低。,植塊,雪旺細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,第一周,第二周,第三周,根據(jù)其它細(xì)胞特性的分離方法2,二、有絲分裂抑制劑法 原理：有絲分裂后細(xì)胞（不再分裂增殖的細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞）不受有絲分裂抑制劑的影響，可分裂細(xì)胞明顯受其抑制 逐漸消亡。 常用抑制劑： 阿糖胞苷（Ara-C）、氟尿嘧啶（FU）,三、原代培養(yǎng) 1,原代培養(yǎng)的概念： 1、是指“初次培養(yǎng)”的含義，沒有培養(yǎng)物的分割。 2、“代”只是分割的記錄與記數(shù)形式，與細(xì)胞分裂增殖的“代”不同。 3、植塊培養(yǎng)也可以分割，故也可以進(jìn)行傳代培養(yǎng) 4、更換培養(yǎng)液、更換

16、培養(yǎng)器皿，仍是原代培養(yǎng)。,三、原代培養(yǎng) 2,基本目的： 1、維持目的細(xì)胞在體外條件下生存一段時(shí)間,適應(yīng)體外培養(yǎng)的新環(huán)境。 2、更接近原來(lái)的組織形式，有利于目的細(xì)胞適應(yīng)體外培養(yǎng)的新環(huán)境。 3、使目的細(xì)胞在體外條件下穩(wěn)定生長(zhǎng)、擴(kuò)增，形成優(yōu)勢(shì)群體。,三、原代培養(yǎng) 3 植塊培養(yǎng),植塊培養(yǎng)目的： 1、觀察組織生長(zhǎng)行為及其規(guī)律。 2、獲得向外遷移的細(xì)胞（應(yīng)該有相應(yīng)的松解、離散措施）。 植塊培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： 保持了良好的3D組織結(jié)構(gòu)、維持了細(xì)胞之間的相互作用，細(xì)胞易于成活和生長(zhǎng)。 植塊培養(yǎng)的缺陷： 植塊中央的物質(zhì)交換受局限。適宜大??！1mm3 植塊培養(yǎng)的關(guān)鍵： 1、植塊的貼壁、固定。 2、培養(yǎng)液的添加。 3、如

17、果是為了獲得細(xì)胞，要注意植塊的適時(shí)移出。,三、原代培養(yǎng) 4 細(xì)胞培養(yǎng),優(yōu)點(diǎn)：能在特定條件下，獲得單一類型的細(xì) 胞并進(jìn)行相關(guān)的研究。 關(guān)鍵：使細(xì)胞盡快進(jìn)入分裂、增殖的生長(zhǎng)狀態(tài)。 1、促進(jìn)細(xì)胞貼壁 2、適宜的細(xì)胞接種密度。 105 個(gè)/ml是常用的標(biāo)準(zhǔn)，但還應(yīng)該考慮細(xì)胞類型、生長(zhǎng)能力、活力。 干細(xì)胞的培養(yǎng)會(huì)選擇更低密度？,三、原代培養(yǎng) 5 培養(yǎng)空間,3、培養(yǎng)空間 構(gòu)建適宜的培養(yǎng)體系： 培養(yǎng)體系由兩大部分組成：液相和氣相 調(diào)整培養(yǎng)空間的目的：保證細(xì)胞的供O2量 相關(guān)參數(shù)： （1）、液相氣相 = 1 10 （體積） （2）、液相高度：25 mm,O2,O2,O2,四、傳代培養(yǎng) 1,傳代的目的： 1、避

18、免接觸性抑制，保持細(xì)胞穩(wěn)定地生長(zhǎng)。 2、進(jìn)一步純化細(xì)胞類型。 （1）不同的傳代處理方式 （2）不同的處理強(qiáng)度 傳代的指標(biāo)： 1、體細(xì)胞：集落占據(jù)80%90%的瓶底面積。 2、干細(xì)胞：根據(jù)目的細(xì)胞集落的生長(zhǎng)狀況，有必要時(shí)。,四、傳代培養(yǎng) 2,傳代的基本步驟： 1、換液 一些技術(shù)手冊(cè)要求傳代前一天換液，主要 是改善細(xì)胞狀態(tài)，增強(qiáng)適應(yīng)能力。 2、解離細(xì)胞 目的細(xì)胞的生物學(xué)特性決定解離細(xì)胞方法 酶消化法 機(jī)械震蕩法 3、再次接種 傳代的關(guān)鍵： 1、適當(dāng)?shù)臅r(shí)間 2、適當(dāng)?shù)姆椒?3、適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度,五、“二倍體細(xì)胞”的問(wèn)題,細(xì)胞性狀的穩(wěn)定，是體外培養(yǎng)條件下，研究體內(nèi)細(xì)胞生物學(xué)性狀的前提。 問(wèn)題：在較長(zhǎng)時(shí)間

19、和不適宜條件下的體外培養(yǎng)，由于細(xì)胞融合等已知和未知的原因，細(xì)胞的染色體倍數(shù)會(huì)發(fā)生變化，成為多倍體細(xì)胞。,營(yíng)養(yǎng)條件,理化條件,生活環(huán)境,遺傳物質(zhì)基礎(chǔ),傳代,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 1,在體外培養(yǎng)條件下，細(xì)胞的生長(zhǎng)行為會(huì)有相應(yīng)的變化，對(duì)其研究的目的是： 1、了解細(xì)胞的生長(zhǎng)行為的基本規(guī)律； 2、區(qū)分質(zhì)變與量變，判斷目的細(xì)胞的價(jià)值和意義。 A、 體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)方式： 1、黏附型 2、懸浮型,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 2,黏附型細(xì)胞 黏附是體外培養(yǎng)條件下恢復(fù)“組織形式”的傾向 1、細(xì)胞與細(xì)胞之間的接觸 2、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合 體內(nèi)、體外的差異：體內(nèi)是立體三維的結(jié)構(gòu)；而體外只是二維的空間，

20、大多數(shù)情況下只有一個(gè)附著面。故細(xì)胞的外形會(huì)有變化。,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 3,黏附型細(xì)胞的類型： 1、上皮型細(xì)胞（上皮樣細(xì)胞）： 細(xì)胞鑲嵌狀緊密排列，呈“鋪路石樣”；起源于內(nèi)胚層、外胚層的細(xì)胞多呈此型。,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 4,2、成纖維細(xì)胞（成纖維細(xì)胞樣）： 細(xì)胞梭形、多角形、胞體鋪展，細(xì)胞間隙較大，細(xì)胞排列疏松；細(xì)胞可呈放射狀、螺旋狀排列。起源于中胚層的細(xì)胞多成此型。,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 5,3、多形型細(xì)胞 細(xì)胞有較長(zhǎng)的突起、胞體多角形，可分為胞體部和突起部，細(xì)胞間距大。 常見類型：神經(jīng)組織細(xì)胞。,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 6,4、游走型細(xì)胞： 細(xì)胞分散、不

21、易形成集落； 可有胞質(zhì)突起，細(xì)胞變形、游走活躍。 見于單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)、腫瘤細(xì)胞。,六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 7,鋪展：,球形 原餅形 細(xì)胞鋪展 極性細(xì)胞,鋪展的程度與細(xì)胞DNA合成、細(xì)胞的生長(zhǎng)有密切關(guān)系。,內(nèi)質(zhì),外質(zhì),六、體外培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與觀察 9,B、每一代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程： 1、潛伏期： 2、指數(shù)生長(zhǎng)期： 3、停滯期：,1,2,3,接種,細(xì)胞數(shù)量,培養(yǎng)時(shí)間,關(guān)于“隔天換液”的辨析： 細(xì)胞周期（cell cycle)： 是指細(xì)胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動(dòng)過(guò)程，分為間期與分裂期兩個(gè)階段,根據(jù)細(xì)胞的分裂能力可把它們分為三類： 增殖細(xì)胞群，如造血干細(xì)胞，表皮與胃腸粘膜上皮的干細(xì)胞。這類細(xì)胞始終保持活躍的分裂能力，連續(xù)進(jìn)入細(xì)胞周期循環(huán)； 不再增殖細(xì)胞群，如成熟的紅細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、心肌細(xì)胞等高度分化的細(xì)胞，它們喪失了分裂能力，又稱終末細(xì)胞（end cell）； 暫不增殖細(xì)胞群，如肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞、甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞。它們是分化的