2課題2_土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),（一） 篩 選 菌 株,原理 人為提供有利于目的菌株的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。 在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。,提示：研究思路,篩選菌株的原理：,自然界中尋找方法：根據(jù)目的菌株對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去尋找。,實(shí)驗(yàn)室篩選方法：人為提供有利于目的菌株生長的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長。,知識(shí)記錄1,（二） 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,原理 運(yùn)用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)。 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，

2、來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。 恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30 300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。,知識(shí)記錄2,活菌計(jì)數(shù)法（接種方法稀釋涂布平板法 ）,顯微鏡直接計(jì)數(shù)法,（統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，30-300）,（三） 設(shè) 置 對(duì) 照,1、對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了 被測(cè)試 的條件外，其他條件都 相同 的實(shí)驗(yàn)。滿足該條件的稱為 對(duì)照組，未滿足該條件的稱為 實(shí)驗(yàn) 組。 2、設(shè)置對(duì)照的目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。,設(shè)置對(duì)照的思路介紹,判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：,將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。,判斷選

3、擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：,完全培養(yǎng)基（營養(yǎng)成分齊全或尿素培養(yǎng)基被混入 其它含氮物質(zhì)）接種后培養(yǎng)觀察菌落（種類）數(shù) 目。,一、實(shí) 驗(yàn) 設(shè) 計(jì),閱讀教材2325頁“實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)”和“操作提示”等兩個(gè)內(nèi)容，請(qǐng)根據(jù)教材提供的三個(gè)資料、樣品的稀釋和稀釋液的取樣培養(yǎng)流程示意圖及“操作提示”的有關(guān)問題，自行設(shè)計(jì)一個(gè)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)這樣的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。,配制土壤溶液,系列稀釋,涂布平板與培養(yǎng),菌落 計(jì)數(shù),實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),1.實(shí)驗(yàn)名稱,某樣品土壤中細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù),2.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模裕?3.材料用具（略）,4.操作步驟,（1）土壤取樣,（2）樣品稀釋涂布,（3）微生物的培養(yǎng)與觀察,（4）細(xì)菌的計(jì)數(shù),二、結(jié)果分

4、析與評(píng)價(jià),1.培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落,對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。,2.樣品的稀釋操作是否成功,如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。,3.重復(fù)組的結(jié)果是否一致,如果各位同學(xué)選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，則需要從各項(xiàng)操作過程中去分析、尋找可能的原因。,三、課 題 延 伸,能分解尿素的細(xì)菌的鑒定,鑒定的原理： 細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高。 鑒定方法： 在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，利用此培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)基的顏色變化。,知識(shí)記錄3,細(xì)菌合成的脲酶將