藥物重復給藥毒性研究技術(shù)指導原則(征求意見稿)#優(yōu)選材料

1、【】指導原則編號： 藥物重復給藥毒性試驗 技術(shù)指導原則 （征求意見稿）二一三年五月 目 錄一、概述2二、基本原則2三、基本內(nèi)容 （一）受試物2（二）實驗動物3（三）給藥方案3（四）指標檢測和檢查5（五）毒物代謝動力學6 四、結(jié)果分析和評價（一）研究結(jié)果的分析7（二）動物毒性反應(yīng)對于臨床試驗的意義 8（三）綜合評價 9五、參考文獻9六、附錄 （一）試驗期限10（二）檢測指標11七、注釋 （一）不同情況的中藥、天然藥物重復給藥毒性試驗的要求12（二）中藥毒性藥材品種13借鑒材料#2一、概述 重復給藥毒性試驗描述動物重復接受受試物后的毒性特征，它是非臨床安全性評價的重要內(nèi)容。通過重復給藥毒性試驗可以

2、：預測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、量效關(guān)系和時效關(guān)系、可逆性等；判斷受試物重復給藥的毒性靶器官或靶組織；推測臨床試驗的起始劑量和重復用藥的安全劑量范圍；提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標；提供臨床試驗中解毒或解救措施的參考。本指導原則適用于中藥、天然藥物和化學藥物。二、基本原則藥品注冊管理辦法明確規(guī)定藥物非臨床研究必須執(zhí)行藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范。藥物重復給藥毒性試驗是藥物研發(fā)體系的有機組成部分，試驗設(shè)計既要重視與其它藥理毒理試驗設(shè)計和結(jié)果的關(guān)聯(lián)性、關(guān)注同類藥物臨床使用情況、臨床適應(yīng)證和用藥人群、臨床用藥方案內(nèi)容，還要結(jié)合受試物的理化性質(zhì)和作用特點，使得試驗結(jié)果與其它

3、藥理毒理試驗互為說明、補充或/和印證。三、基本內(nèi)容 （一）受試物：中藥、天然藥物：受試物應(yīng)能充分代表臨床試驗樣品或上市藥品。應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應(yīng)為中試或中試以上規(guī)模的樣品，否則應(yīng)有充分的理由。應(yīng)注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，由于中藥的特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應(yīng)提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn)定性及均勻性。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用原料藥進行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標明名稱、標準、批號、規(guī)格及生產(chǎn)單位。化學藥物：受試物應(yīng)采用工藝相對穩(wěn)定、純度和雜質(zhì)含量能反映臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品

4、。受試物應(yīng)注明名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并附有研制單位的自檢報告。試驗中所用輔料、溶媒等應(yīng)標明批號、規(guī)格和生產(chǎn)單位，并符合試驗要求。在藥品研發(fā)過程中，若受試物的生產(chǎn)工藝發(fā)生可能影響其安全性的變化，應(yīng)進行相應(yīng)的安全性研究?；瘜W藥物試驗過程中應(yīng)進行受試物樣品分析，并提供樣品分析報告。成分基本清楚的中藥、天然藥物也應(yīng)進行受試物樣品分析。（二）實驗動物：重復給藥毒性試驗通常采用兩種實驗動物，一種為嚙齒類，另一種為非嚙齒類。理想的動物應(yīng)具有以下特點：對受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體相近；對受試物敏感；已有大量歷史對照數(shù)據(jù)。在重復給藥毒性試驗前應(yīng)采用體外試驗體系對實驗動物的種屬或品系

5、進行篩選。特殊情況下可選用特殊種屬或品系的動物進行重復給藥毒性試驗；必要時，也可選用疾病模型動物進行試驗。一般選擇正常、健康和雌性未孕的動物，體重差異應(yīng)在平均體重的20%之內(nèi)；符合國家有關(guān)實驗動物規(guī)定的等級要求，來源、品系、遺傳背景清楚，并具有實驗動物質(zhì)量合格證。應(yīng)根據(jù)試驗期限的長短和受試物臨床應(yīng)用的患者人群確定動物的年齡。動物年齡應(yīng)盡量一致，一般大鼠為69周齡，Beagle犬612月齡。每個試驗組動物數(shù)，一般大鼠為雌、雄各不少于15只，Beagle犬或猴為雌、雄各不少于5只。此處刪除了每組通常使用雌雄相同的動物數(shù)，有很多采用不對稱設(shè)計的情況。是否合理？（三）給藥方案1、給藥劑量：重復給藥毒性

6、試驗至少應(yīng)設(shè)3個給藥劑量組，以及1個溶媒（或輔料）對照組，必要時設(shè)立空白對照組和/或陽性對照組；高劑量原則上使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，低劑量原則上高于動物藥效學試驗的等效劑量、并不使動物出現(xiàn)毒性反應(yīng)，結(jié)合毒性作用機制和模式在高劑量和低劑量之間設(shè)立中劑量，以考察毒性反應(yīng)劑量-反應(yīng)關(guān)系。以上僅是劑量設(shè)計的一般原則，選擇劑量應(yīng)考慮之前進行的各項研究所評價的終點、受試物物理化因素和生物利用度等；應(yīng)結(jié)合實際情況進行劑量設(shè)計，如出現(xiàn)未預期的毒性反應(yīng)或不出現(xiàn)毒性反應(yīng)時，可在設(shè)計更長時間的重復給藥毒性試驗時適當調(diào)整劑量；應(yīng)根據(jù)動物生長和體重的變化情況而調(diào)整給藥劑量；局部給藥應(yīng)盡可能保證給藥劑量的準確及與給藥局

7、部接觸時間的充分。高劑量出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)，避免刻意追求暴露水平；可將系統(tǒng)暴露量達到臨床系統(tǒng)暴露量50倍（基于AUC）的劑量作為重復給藥毒性試驗的高劑量。如在試驗中途需要改變給藥劑量，應(yīng)完整描述劑量調(diào)整過程，依據(jù)給藥劑量設(shè)計原則并使試驗結(jié)束時動物數(shù)滿足評價要求。 2、給藥途徑：原則上應(yīng)與臨床擬用途徑一致；如不一致則應(yīng)提供相關(guān)藥理或藥代/毒代依據(jù)，以及對給藥部位影響的評價。3、給藥頻率：原則上重復給藥毒性試驗中動物應(yīng)每天給藥，給藥期限長的藥物每周至少應(yīng)給藥6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點和臨床給藥方案等原因，可根據(jù)具體藥物的特點設(shè)計給藥頻率。4、給藥期限：重復給藥毒性試驗的給藥期限通常與擬定的

8、臨床療程、臨床適應(yīng)證和用藥人群有關(guān)，給藥時間與支持預期臨床的實際療程相關(guān)。一般藥物的重復給藥毒性試驗給藥期限，參考附錄（一）。通過較短給藥期限的毒性研究獲得的信息，可以為較長給藥期限的毒性研究設(shè)計提供給藥劑量、給藥頻率、觀察指標等方面的參考；同時，臨床試驗中獲得的信息有助于設(shè)計較長給藥期限的動物毒性研究方案，降低藥物開發(fā)的風險。以不同給藥期限的重復給藥毒性試驗來分別支持不同用藥期限的臨床試驗及上市評價時，不同給藥期限的重復給藥毒性試驗內(nèi)容應(yīng)完整、規(guī)范，結(jié)果分析評價強調(diào)客觀性、注重科學性。當擬臨床研究的適應(yīng)癥有若干項，應(yīng)按臨床最長療程的適應(yīng)癥來確定重復給藥毒性試驗的給藥期限。（四）檢測指標和檢測

9、時間重復給藥毒性試驗必須檢測的指標詳見附錄（二）。除必需的檢測指標外，還應(yīng)根據(jù)受試物的特點、在其他試驗中已觀察到的某些改變或其他的相關(guān)信息（如處方中組成成分有關(guān)于毒性的文獻報道），增加相應(yīng)的觀察和檢測指標。應(yīng)在試驗結(jié)束時進行一次全面檢測，當給藥期限較長時，應(yīng)根據(jù)受試物的特點選擇合適的時間進行中期階段性的檢測；試驗期間對瀕死或死亡動物應(yīng)及時取到標本進行觀察和組織學檢查，分析瀕死或死亡的原因；恢復期結(jié)束時進行一次全面的檢測。給藥前，對動物進行適應(yīng)性飼養(yǎng)，嚙齒類動物至少應(yīng)進行5天的適應(yīng)性觀察，非嚙齒類動物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察2周。對實驗動物進行外觀體征、行為活動、攝食量和體重檢查，非嚙齒類動物至少應(yīng)進行2

10、次體溫、血液學和血液生化學等指標和至少1次心電圖的檢測。另外，實驗動物相關(guān)指標的歷史背景數(shù)據(jù)在重復給藥毒性試驗中也具有重要的參考意義。給藥期間，對動物進行外觀體征、行為活動、攝食量、體重、眼科檢查、腺體分泌、呼吸、糞便性狀、給藥局部反應(yīng)、血液學指標、血液生化學指標等的觀測。非嚙齒類動物應(yīng)進行體溫、心電圖、尿液分析；根據(jù)試驗周期的長短和受試物的特點確定檢測時間和檢測次數(shù)。原則上應(yīng)盡早發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，并反映出觀測指標或參數(shù)的變化與給藥期限的關(guān)系。大鼠體重應(yīng)雌雄分開進行計算。（與上面重復了，故刪除）。給藥結(jié)束，對動物（除恢復期觀察動物）進行全面的大體解剖，稱重主要臟器并計算臟器系數(shù)；進行組織病理學檢查

11、并出具病理學檢查報告，如發(fā)現(xiàn)有異常變化，應(yīng)附有相應(yīng)的組織病理學照片。非嚙齒類動物對照組和各給藥組主要臟器組織均應(yīng)進行組織病理學檢查；嚙齒類動物對照組和高劑量組動物，以及尸檢異常動物應(yīng)詳細檢查，如高劑量組某一組織發(fā)生病理改變，應(yīng)對其它劑量組的動物相同組織進行組織病理學檢查。通常需要制備骨髓涂片，以便當受試物可能對造血系統(tǒng)有影響時進一步進行骨髓的檢查。在給藥結(jié)束后對部分動物進行恢復期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。應(yīng)根據(jù)受試物的代謝動力學特點、靶組織或靶器官的毒性反應(yīng)和恢復情況確定恢復期的長短。（五）毒物代謝動力學 重復給藥毒性試驗應(yīng)伴隨進行考察藥物系統(tǒng)暴露的毒物代謝動力

12、學研究。毒代動力學可以描述實驗動物的系統(tǒng)暴露與暴露劑量、暴露時間和毒理學結(jié)果之間的關(guān)系，毒代動力學研究的主要目的在于解釋重復給藥毒性試驗的結(jié)果。毒代動力學試驗應(yīng)選擇合適的時間點采樣測定，從而獲得藥時AUC、Cmax、Tmax等參數(shù)。某些藥物應(yīng)結(jié)合藥物血漿蛋白結(jié)合率來評價系統(tǒng)暴露量；毒代動力學數(shù)據(jù)可以來自重復給藥毒性試驗的全部動物或部分動物，還可以來自衛(wèi)星組動物。建議此部分動物應(yīng)包括高、中、低劑量組的動物，以便估算高劑量藥物在動物體內(nèi)的動力學過程是否屬非線性動力學過程。四、結(jié)果分析和評價重復給藥毒性試驗的最終目的在于預測人體可能出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。只有通過研究結(jié)果的科學分析和評價才能夠清楚描述動物的

13、毒性反應(yīng)，并推斷其與人體的相關(guān)性。重復給藥毒性試驗結(jié)果的分析和評價是重復給藥毒性試驗的必要組成部分，必須對研究結(jié)果進行科學和全面的分析和評價。（一）研究結(jié)果的分析分析重復給藥毒性試驗結(jié)果的目的是判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)，描述毒性反應(yīng)的性質(zhì)和程度（包括毒性起始時間、程度、持續(xù)時間以及可逆性等）和靶器官，確定安全范圍，并探討可能的毒性作用機制。1、正確理解試驗數(shù)據(jù)的意義在對重復給藥毒性試驗結(jié)果進行分析時，應(yīng)正確理解均值數(shù)據(jù)和單個數(shù)據(jù)的意義。嚙齒類動物重復給藥毒性試驗中組均值的意義通常大于單個動物數(shù)據(jù)的意義，實驗室歷史背景數(shù)據(jù)和文獻數(shù)據(jù)可以為結(jié)果的分析提供參考。非嚙齒類動物數(shù)量少、個體差異大，因此單

14、個動物的試驗數(shù)據(jù)往往具有重要的毒理學意義。此外，非嚙齒類動物試驗結(jié)果必須與給藥前數(shù)據(jù)、對照組數(shù)據(jù)和實驗室歷史背景數(shù)據(jù)進行多重比較，文獻數(shù)據(jù)參考價值有限。在分析重復給藥毒性試驗結(jié)果時應(yīng)綜合考慮數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學意義和生物學意義。正確利用統(tǒng)計學假設(shè)檢驗有助于確定試驗結(jié)果的生物學意義，但具有統(tǒng)計學意義并不一定代表具有生物學意義。在判斷生物學意義時應(yīng)考慮到參數(shù)變化的劑量-反應(yīng)關(guān)系、其他相關(guān)參數(shù)的改變，以及與歷史背景數(shù)據(jù)的比較。 此外，在對重復給藥毒性試驗結(jié)果進行分析時，應(yīng)對異常數(shù)據(jù)進行合理的解釋。2、正確判斷毒性反應(yīng)給藥組和對照組之間檢測參數(shù)的差異可能來自于與受試物有關(guān)的毒性反應(yīng)、動物對藥物的適應(yīng)性改變或正

15、常的生理波動。在分析試驗結(jié)果時，應(yīng)關(guān)注參數(shù)變化的劑量反應(yīng)關(guān)系、組內(nèi)動物的參數(shù)變化幅度和性別差異，同時綜合考慮多項毒理學指標的檢測結(jié)果，分析其中的關(guān)聯(lián)和作用機制，以正確判斷藥物的毒性反應(yīng)。單個參數(shù)的變化往往并不足以判斷化合物是否引起毒性反應(yīng)，可能需要進一步進行相關(guān)的研究。此外毒代動力學研究可以為毒性反應(yīng)和毒性靶器官或靶組織的判斷提供重要的參考依據(jù)。（二）動物毒性反應(yīng)對于臨床試驗的意義 將重復給藥毒性試驗結(jié)果外推至人體時，不可避免地會涉及到受試物在動物和人體內(nèi)毒性反應(yīng)之間的差異。首先，不同物種、同物種不同種屬或個體之間對于某一受試物的毒性反應(yīng)可能存在差異；其次，由于在重復給藥毒性試驗中通常采用較高

16、的給藥劑量，受試物可能在動物體內(nèi)呈非線性動力學代謝過程，從而導致與人體無關(guān)的毒性反應(yīng)；另外，重復給藥毒性試驗難以預測一些在人體中發(fā)生率較低的毒性反應(yīng)或僅在小部分人群中出現(xiàn)的特異質(zhì)反應(yīng)；同時有些毒性反應(yīng)目前在動物中難以檢測，如頭痛、頭昏、頭暈、腹脹、皮膚搔癢、視物模糊等。鑒于以上原因，動物重復給藥毒性試驗的結(jié)果一般不會完全再現(xiàn)于人體臨床試驗。但如果沒有試驗或文獻依據(jù)證明受試物對動物的毒性反應(yīng)與人體無關(guān)，在進行藥物評價時必須首先假設(shè)人最為敏感，重復給藥毒性試驗中動物的毒性反應(yīng)將會在臨床試驗中再現(xiàn)。進行深入的作用機制研究將有助于判斷動物和人體毒性反應(yīng)的相關(guān)性。（三）綜合評價 重復給藥毒性試驗是藥物非

17、臨床安全性研究的有機組成部分，是藥物非臨床毒理學研究中綜合性最強、獲得信息最多和對臨床指導意義最大的一項毒理學研究。對其結(jié)果進行評價時，應(yīng)結(jié)合受試物的藥學特點，藥效學、藥代動力學和其他毒理學研究的結(jié)果，以及已取得的臨床研究的結(jié)果，進行綜合評價。對于重復給藥毒性試驗結(jié)果的評價最終應(yīng)落實到受試物的臨床不良反應(yīng)、臨床毒性靶器官或靶組織、安全范圍、臨床需重點檢測的指標，以及必要的臨床監(jiān)護或解救措施。 五、參考文獻 1、化學藥物長期毒性試驗技術(shù)指導原則. 國家藥品監(jiān)督管理局，2005.3.2、中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導原則. 國家藥品監(jiān)督管理局，2005.3.3、周宗燦. 毒理學基礎(chǔ). 第二版.

18、 北京醫(yī)科大學出版社，2000. 4、秦伯益. 新藥評價概論. 第二版 人民衛(wèi)生出版社，1998.5、Guidance on nonclinical safety studies for the conduct of human clinical trials and marketing authorization for pharmaceuticals , ICH /M3(R2) 2009.66、Guideline on repeated dose toxicity, EMA 2010.37、Redbook 2000 IV.C, FDA 2003、2007六、附錄（一）重復給藥毒性試驗期限支

19、持藥物臨床試驗最長臨床試驗期限重復給藥毒性試驗的最短期限嚙齒類動物非嚙齒類動物 2周2周2周2周-6個月同于臨床試驗同于臨床試驗 6個月6個月9個月1、2、支持藥物上市臨床擬用期限嚙齒類動物非嚙齒類動物 2周1個月1個月2周1個月3個月3個月1個月 3個月6個月6個月3 個月6個月9個月1、2、1非嚙齒類動物不超過6個月期限的試驗可接受情況：（這兩部分我沒有仔細看。）當免疫原性或耐受性問題使更長期限的試驗難以進行時；重復、短期用藥（即便臨床試驗期限6個月以上）的疾病，如偏頭痛、勃起障礙、單純性皰疹的反復間歇給藥時；擬用于危及生命的疾病（如進展性疾病、輔助使用的腫瘤化療藥）時。2 用藥人群為兒童

20、時，已有的毒性試驗不能充分說明對毒理學或藥理學靶器官發(fā)育的擔憂，需要進行非嚙齒類幼年動物的重復給藥毒性試驗。這種情況下，能說明此種發(fā)育擔憂的、在合適的起始年齡和種屬幼年動物上進行重復給藥毒性試驗（如期限為12個月的犬試驗）是合適的；這項試驗可以代替標準的非嚙齒類動物重復給藥毒性試驗和單獨的非嚙齒類幼年動物重復給藥毒性試驗。（二）檢測指標（將來最好用表格。）1、血液學指標：紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、紅細胞容積、平均紅細胞容積、平均紅細胞血紅蛋白、平均紅細胞血紅蛋白濃度、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)及其分類、血小板計數(shù)、凝血酶原時間；2、血液生化學指標：天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、堿性磷酸酶

21、、肌酸磷酸激酶、尿素氮、肌酐、總蛋白、白蛋白、血糖、總膽紅素、總膽固醇、甘油三酯、-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、鉀離子濃度、氯離子濃度、鈉離子濃度；3、尿液分析指標：尿液外觀、比重、pH值、尿糖、尿蛋白、尿膽紅素、尿膽原、酮體、潛血、白細胞；4、組織病理學檢查的臟器組織 需稱重并計算臟器系數(shù)的器官：腦、心臟、肝臟、腎臟、腎上腺、胸腺、脾臟、睪丸、附睪、卵巢、子宮、甲狀腺和甲狀旁腺；需進行組織病理學檢查的組織或器官：腎上腺、主動脈骨（股骨）、骨髓（胸骨）、腦（至少3個水平）、盲腸、結(jié)腸、子宮和子宮頸、十二指腸、附睪、食管、眼、膽囊（如果有）、哈氏腺（如果有）、心臟、回腸、空腸、腎臟、肝臟、肺臟（附主支氣管）、

22、淋巴結(jié)（一個與給藥途徑相關(guān)，另一個在較遠距離）、乳腺、鼻甲、卵巢和輸卵管、胰腺、垂體、前列腺、直腸、唾液腺、坐骨神經(jīng)、精囊（如果有）、骨骼肌、皮膚、脊髓（3個部位：頸椎、中段胸椎、腰椎）、脾臟、胃、睪丸胸腺（或胸腺區(qū)域）、甲狀腺/甲狀旁腺氣管膀胱、陰道、所有異常組織。七、注釋（一）不同情況的中藥、天然藥物重復給藥毒性試驗的要求 考慮到中藥、天然藥物各類藥物處方來源、立題依據(jù)等的不同，在具體進行試驗時可參照以下要求進行。但這些要求僅是一般要求，研制者應(yīng)遵循新藥開發(fā)的客觀規(guī)律，具體試驗時應(yīng)根據(jù)受試物自身特點、具體情況來進行設(shè)計，考慮需進行哪些研究。 1未在國內(nèi)上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質(zhì)中提取的有效成分及其制劑，新發(fā)現(xiàn)的藥材及其制劑，新的中藥材代用品、藥材新的藥用部位及其制劑，未在國內(nèi)上市銷售的從中藥、動物、礦物等物質(zhì)中提取的有效部位制成的制劑，未在國內(nèi)上市銷售的中藥、天然藥物注射劑。以上情況，由于其物質(zhì)基礎(chǔ)較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變，或應(yīng)用經(jīng)驗