糖尿病動(dòng)物模型制作.ppt

1、糖尿病動(dòng)物模型制作,制作： 李明錦 王婷 侯娟 呂志猛 夏曉娟 王明霞 逄高燕 周東 王秉思 魏京勛 主講： 逄高燕,背景介紹,糖尿病（diabetes）是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合 典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等癥狀，即“三多一少”，糖尿病（血糖）一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。,與糖尿病有關(guān)的因素,遺傳因素：和1型糖尿病類似，2型糖尿病也有家族發(fā)病的特點(diǎn)。因此很可能與基因遺傳有關(guān)。這種遺傳特性2

2、型糖尿病比1型糖尿病更為明顯。例如：雙胞胎中的一個(gè)患了1型糖尿病，另一個(gè)有40%的機(jī)會(huì)患上此?。坏绻?型糖尿病，則另一個(gè)就有70%的機(jī)會(huì)患上2型糖尿病。,遺傳因素： 這種遺傳特性型糖尿病比型糖尿 病更為明顯。 例如：雙胞胎中的一個(gè)患型糖尿病，另一個(gè)有40%的機(jī)會(huì)患上此??；但如果是型糖尿病，則另一個(gè)就有70%的機(jī)會(huì)患上型糖尿病。,與糖尿病有關(guān)的因素,與糖尿病有關(guān)的因素,遺傳因素： 這種遺傳特性型糖尿病比型糖尿病更為明顯。例如：雙胞胎中的一個(gè)患了型糖尿病，另一個(gè)有40%的機(jī)會(huì)患上此病；但如果是型糖尿病，則另一個(gè)就有70%的機(jī)會(huì)患上型糖尿病。,肥胖： 糖尿病的一個(gè)重要因素可能就是肥胖癥。遺傳原因

3、可引起肥胖，同樣也可引起糖尿病。身體中心型肥胖病人的多余脂肪集中在腹部，他們比那些脂肪集中在臀部與大腿上的人更容易發(fā)生糖尿病。,肥胖：2型糖尿病的一個(gè)重要因素可能就是肥胖癥。遺傳原因可引起肥胖，同樣也可引起2型糖尿病。身體中心型肥胖病人的多余脂肪集中在腹部，他們比那些脂肪集中在臀部與大腿上的人更容易發(fā)生2型糖尿病。,年齡： 年齡也是糖尿病的發(fā)病因素。有一半的糖尿患者多在55 歲以后發(fā)病。高齡患者容易出現(xiàn)生活方式：吃高熱量的食物和運(yùn)動(dòng)量的減少也能糖尿病也與年紀(jì)大的人容易超重有關(guān)。 現(xiàn)代的引起糖尿病，有人認(rèn)為這也是由于肥胖而引起的。肥胖癥和糖尿病一樣，在那些飲食和活動(dòng)習(xí)慣均已“西化”的美籍亞裔和拉

4、丁美商人中更為普遍。,誘發(fā)原理,STZ直接破壞胰島細(xì)胞：主要見于注射大劑量STZ后。STZ注射后可引起細(xì)胞內(nèi)輔酶I（NAD）的濃度下降，NAD依賴性能量和蛋白質(zhì)代謝停止，導(dǎo)致細(xì)胞死亡； 四氧嘧啶進(jìn)入體內(nèi)后能迅速被胰島細(xì)胞攝取，影響細(xì)胞膜的通透性和細(xì)胞內(nèi)ATP的產(chǎn)生，抑制葡萄糖介導(dǎo)的胰島素分泌。四氧嘧啶主要通過產(chǎn)生氧自由基破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞的損傷及壞死，從而阻礙胰島素的分泌，使血清胰島素水平降低。,藥品配制,配置STZ液 ： 檸檬酸緩沖液的配制： 檸 檬 酸(FW:210.14) 2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液 檸檬酸鈉(FW:294.10)2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液

5、鏈脲佐菌素配制液：用時(shí)將A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH計(jì)測(cè)定ph值,調(diào)節(jié)ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的檸檬酸緩沖液。 注射時(shí)用檸檬酸緩沖液以1的濃度溶解STZ，按空腹體重注射相應(yīng)的STZ， 在30分鐘內(nèi)注射完畢。 STZ容易失活, STZ快速稱取后仍要求干燥避光，推薦用干燥鋁箔(或錫箔)紙。,制作方法：,聯(lián)合STZ(鏈脲佐菌素)和ALX(四氧嘧啶),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠/體重:200-280g,雄性 注射方法:腹腔注射法 具體方法:將大鼠進(jìn)食12小時(shí)，過夜禁食后稱重，按大鼠總重量比稱取STZ，放一干燥滅菌瓶內(nèi)，外用錫紙包好，將檸檬酸緩沖液及裝STZ的瓶子置

6、冰浴，一起帶到動(dòng)物房，如果注射操作技術(shù)不熟練,應(yīng)兩組交替注射，分組溶解STZ，10只或15只鼠/組。 實(shí)驗(yàn)組：通過腹腔注射12mg/ml的STZ+檸檬酸鈉+20mg/mlALX+蒸餾水各0.5ml. 空腹1小時(shí)后飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料塊，自由飲水。 對(duì)照組：注射等量檸檬酸鈉+蒸餾水。 于給藥后3天，一周分別采血測(cè)血糖。該模型飼養(yǎng)12周。,禁食和血糖的聯(lián)系 ： 禁食12小時(shí)以上(一般過夜禁食，不禁水)。禁食的時(shí)間越長，STZ對(duì)胰島細(xì)胞的破壞力越明顯，即藥效越高。所以相對(duì)禁食時(shí)間延長，可以降低STZ的用量。 注射時(shí)，推進(jìn)速度和血糖的關(guān)系 ： 推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相對(duì)的危險(xiǎn)性較低，但

7、也不容易成模，常規(guī)操作中多要求快速注射。當(dāng)然，STZ的劑量是決定血糖高低的主要因素。,死鼠問題的解決 鼠的個(gè)體差別和空腹(低血糖)抵抗力的差異而致死亡率的不同，開始死亡率高可能主要是血糖突然升高,鼠不適應(yīng),或發(fā)生了DKA(即酮癥酸中毒)。 首先，一定要保證足夠的飲水量(飲水量不足容易導(dǎo)致死鼠);,其次，高血糖和低血糖都會(huì)造成死鼠，避免死鼠可以通過注射胰島素或暫時(shí)補(bǔ)糖 兩種途徑： 1、常見為血糖過高。補(bǔ)胰島素法，補(bǔ)一些中效胰島素。例如給諾和靈n或NPH(中性魚精蛋白鋅胰島素),每次2-3個(gè)單位,過了3-5天，大鼠一般死亡率就低了； 2、補(bǔ)糖法，禁食后的鼠，注射的時(shí)候已經(jīng)處于低血糖狀態(tài)，造模4小時(shí)后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射時(shí)血糖過低死鼠;,再次，防止動(dòng)物自相殘殺。 食物缺乏和供水不足的情況下,會(huì)互相撕殺、啃食同類,所以食物和飲水要供應(yīng)充足,最好是兩路供應(yīng); 最后，防止感染。 糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血測(cè)血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測(cè)血糖后可用四環(huán)素(或金霉素眼藥膏)局部涂抹處理傷口預(yù)防感染。,預(yù)期結(jié)果,經(jīng)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)組非空腹血糖16.7mmol/L,并表現(xiàn)出多飲，多食，多尿，消瘦的“三多一少”癥狀，以及胰島素抵抗等糖