糖尿病動物模型制作.ppt

1、糖尿病動物模型制作,制作： 李明錦 王婷 侯娟 呂志猛 夏曉娟 王明霞 逄高燕 周東 王秉思 魏京勛 主講： 逄高燕,背景介紹,糖尿?。╠iabetes）是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機體導致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質、脂肪、水和電解質等一系列代謝紊亂綜合 典型病例可出現多尿、多飲、多食、消瘦等癥狀，即“三多一少”，糖尿?。ㄑ牵┮坏┛刂撇缓脮l(fā)并發(fā)癥，導致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。,與糖尿病有關的因素,遺傳因素：和1型糖尿病類似，2型糖尿病也有家族發(fā)病的特點。因此很可能與基因遺傳有關。這種遺傳特性2

2、型糖尿病比1型糖尿病更為明顯。例如：雙胞胎中的一個患了1型糖尿病，另一個有40%的機會患上此??；但如果是2型糖尿病，則另一個就有70%的機會患上2型糖尿病。,遺傳因素： 這種遺傳特性型糖尿病比型糖尿 病更為明顯。 例如：雙胞胎中的一個患型糖尿病，另一個有40%的機會患上此?。坏绻切吞悄虿?，則另一個就有70%的機會患上型糖尿病。,與糖尿病有關的因素,與糖尿病有關的因素,遺傳因素： 這種遺傳特性型糖尿病比型糖尿病更為明顯。例如：雙胞胎中的一個患了型糖尿病，另一個有40%的機會患上此病；但如果是型糖尿病，則另一個就有70%的機會患上型糖尿病。,肥胖： 糖尿病的一個重要因素可能就是肥胖癥。遺傳原因

3、可引起肥胖，同樣也可引起糖尿病。身體中心型肥胖病人的多余脂肪集中在腹部，他們比那些脂肪集中在臀部與大腿上的人更容易發(fā)生糖尿病。,肥胖：2型糖尿病的一個重要因素可能就是肥胖癥。遺傳原因可引起肥胖，同樣也可引起2型糖尿病。身體中心型肥胖病人的多余脂肪集中在腹部，他們比那些脂肪集中在臀部與大腿上的人更容易發(fā)生2型糖尿病。,年齡： 年齡也是糖尿病的發(fā)病因素。有一半的糖尿患者多在55 歲以后發(fā)病。高齡患者容易出現生活方式：吃高熱量的食物和運動量的減少也能糖尿病也與年紀大的人容易超重有關。 現代的引起糖尿病，有人認為這也是由于肥胖而引起的。肥胖癥和糖尿病一樣，在那些飲食和活動習慣均已“西化”的美籍亞裔和拉

4、丁美商人中更為普遍。,誘發(fā)原理,STZ直接破壞胰島細胞：主要見于注射大劑量STZ后。STZ注射后可引起細胞內輔酶I（NAD）的濃度下降，NAD依賴性能量和蛋白質代謝停止，導致細胞死亡； 四氧嘧啶進入體內后能迅速被胰島細胞攝取，影響細胞膜的通透性和細胞內ATP的產生，抑制葡萄糖介導的胰島素分泌。四氧嘧啶主要通過產生氧自由基破壞細胞結構，導致細胞的損傷及壞死，從而阻礙胰島素的分泌，使血清胰島素水平降低。,藥品配制,配置STZ液 ： 檸檬酸緩沖液的配制： 檸 檬 酸(FW:210.14) 2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液 檸檬酸鈉(FW:294.10)2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液

5、鏈脲佐菌素配制液：用時將A、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），PH計測定ph值,調節(jié)ph=4.2-4.5,即是所需配置STZ的檸檬酸緩沖液。 注射時用檸檬酸緩沖液以1的濃度溶解STZ，按空腹體重注射相應的STZ， 在30分鐘內注射完畢。 STZ容易失活, STZ快速稱取后仍要求干燥避光，推薦用干燥鋁箔(或錫箔)紙。,制作方法：,聯(lián)合STZ(鏈脲佐菌素)和ALX(四氧嘧啶),實驗動物:SD大鼠/體重:200-280g,雄性 注射方法:腹腔注射法 具體方法:將大鼠進食12小時，過夜禁食后稱重，按大鼠總重量比稱取STZ，放一干燥滅菌瓶內，外用錫紙包好，將檸檬酸緩沖液及裝STZ的瓶子置

6、冰浴，一起帶到動物房，如果注射操作技術不熟練,應兩組交替注射，分組溶解STZ，10只或15只鼠/組。 實驗組：通過腹腔注射12mg/ml的STZ+檸檬酸鈉+20mg/mlALX+蒸餾水各0.5ml. 空腹1小時后飼以標準飼料塊，自由飲水。 對照組：注射等量檸檬酸鈉+蒸餾水。 于給藥后3天，一周分別采血測血糖。該模型飼養(yǎng)12周。,禁食和血糖的聯(lián)系 ： 禁食12小時以上(一般過夜禁食，不禁水)。禁食的時間越長，STZ對胰島細胞的破壞力越明顯，即藥效越高。所以相對禁食時間延長，可以降低STZ的用量。 注射時，推進速度和血糖的關系 ： 推注的速度快，更容易形成高血糖，推注的速度慢，相對的危險性較低，但

7、也不容易成模，常規(guī)操作中多要求快速注射。當然，STZ的劑量是決定血糖高低的主要因素。,死鼠問題的解決 鼠的個體差別和空腹(低血糖)抵抗力的差異而致死亡率的不同，開始死亡率高可能主要是血糖突然升高,鼠不適應,或發(fā)生了DKA(即酮癥酸中毒)。 首先，一定要保證足夠的飲水量(飲水量不足容易導致死鼠);,其次，高血糖和低血糖都會造成死鼠，避免死鼠可以通過注射胰島素或暫時補糖 兩種途徑： 1、常見為血糖過高。補胰島素法，補一些中效胰島素。例如給諾和靈n或NPH(中性魚精蛋白鋅胰島素),每次2-3個單位,過了3-5天，大鼠一般死亡率就低了； 2、補糖法，禁食后的鼠，注射的時候已經處于低血糖狀態(tài)，造模4小時后腹腔注射百分之20的葡萄糖，可避免因注射時血糖過低死鼠;,再次，防止動物自相殘殺。 食物缺乏和供水不足的情況下,會互相撕殺、啃食同類,所以食物和飲水要供應充足,最好是兩路供應; 最后，防止感染。 糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。腹腔注射、皮下注射及采血測血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測血糖后可用四環(huán)素(或金霉素眼藥膏)局部涂抹處理傷口預防感染。,預期結果,經檢測，實驗組非空腹血糖16.7mmol/L,并表現出多飲，多食，多尿，消瘦的“三多一少”癥狀，以及胰島素抵抗等糖