革蘭氏陰性球菌.ppt.ppt

1、第七章 革蘭陰性球菌,奈瑟菌屬 Neisseria 醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系,腦膜炎奈瑟菌,N. meningitis meningococcus,奈瑟菌屬 （Neisseria）,奈瑟氏菌屬是一群革蘭陰性球菌，常成雙排列，無鞭毛，無芽胞，有菌毛 人類為奈瑟氏菌屬的自然宿主，對(duì)人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，兩種細(xì)菌DNA序列有70的同源性 主要區(qū)別點(diǎn)為，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系統(tǒng)疾病；而腦膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。腦膜炎奈瑟菌有多糖成分,腦膜炎雙球菌,形態(tài)與染色,G- ，0.6-0.8m 腎形或豆形，成雙排列，凹面相對(duì)； 病人腦脊液（CSF）中典型，多位于

2、中性粒細(xì)胞內(nèi)； 無鞭毛和芽胞；新分離株具有莢膜和菌毛,培養(yǎng)特性與生化反應(yīng),培養(yǎng)特性 專性需氧。營養(yǎng)要求高。最常用的培養(yǎng)基是巧克力色培養(yǎng)基 生化反應(yīng) 可產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)時(shí)若不及時(shí)移種，數(shù)日后菌體自溶,抗原構(gòu)造、抵抗力,致病性與免疫性,致病物質(zhì) 莢膜 菌毛 內(nèi)毒素 所致疾病 流行性腦膜炎（簡(jiǎn)稱流腦） 人類是唯一的易感宿主 免疫性 6月2歲年齡組嬰兒免疫力最低，是易感人群,腦膜炎奈瑟菌,鼻咽腔繁殖,繁殖入血,菌/敗血癥,中樞神經(jīng)系統(tǒng),主要侵犯蛛網(wǎng)膜,暴發(fā)型腦膜炎,微循環(huán)衰竭、內(nèi)毒素休克、DIC,兒童和成人的腦膜炎癥狀,微生物學(xué)檢查法,標(biāo)本 直接涂片鏡檢 如鏡下見到中性粒細(xì)胞內(nèi)、外有革蘭陰性雙球菌

3、，即可作出初步診斷 分離培養(yǎng)與鑒定 巧克力色血瓊脂平板 快速診斷法 對(duì)流免疫電泳SPA協(xié)同凝集試驗(yàn),腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),革蘭陰性雙球菌,腎形或豆形,生物學(xué)性狀 形態(tài)染色： G- ，呈腎型，成雙排列（凹面相對(duì)，凸面相背），有莢膜及菌毛 培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求較高，血平板或巧克力平板或卵黃雙抗平板，形成光滑透明“露滴樣”菌落 專性需氧，510%CO2，35-37（40 30均不生長(zhǎng)）pH7.47.6 易產(chǎn)生自溶酶,生物學(xué)性狀 生化反應(yīng)：氧化酶及觸酶（+），分解葡萄糖和麥芽糖 抗原和分類：根據(jù)莢膜多糖群特異性抗原的不同可分為13個(gè)血

4、清群，根據(jù)膜蛋白不同，各血清群又可分為若干血清型 抵抗力：很弱，對(duì)熱、冷、干燥和消毒劑極度敏感,腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis),氧化酶試驗(yàn)陽性：紫紅色 陰性：無色,生化鑒定（光滑露珠樣菌落）,腦膜炎奈瑟菌的鑒定,氧化酶： + DNA酶： - 營養(yǎng)瓊脂生長(zhǎng)： - 葡萄糖： + 麥芽糖： +,防治原則,綜合性預(yù)防措施 隔離病人、檢查帶菌者、預(yù)防性投藥，室內(nèi)通風(fēng) 流腦疫苗： 6個(gè)月-2歲接種兩次，間隔1月 A群腦膜炎球菌多糖抗原。制備疫苗 青霉素、磺胺大劑量治療,腦膜炎接種,淋病奈瑟菌，淋球菌,Gonococcus,腦膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌,相似點(diǎn)： 生物學(xué)性狀 差異： 莢膜：有莢膜（

5、腦），分離初期有莢膜（淋） 質(zhì)粒：很少有質(zhì)粒（腦），有質(zhì)粒（淋）； 所致疾?。阂鹉X膜炎（腦），引起泌尿生殖系統(tǒng)疾?。埽?感染部位不同，標(biāo)本取材部位不同,兩者關(guān)系,形態(tài)與染色,革蘭染色陰性，0.6-0.8m 腎形、成雙排列 有菌毛，無芽胞和鞭毛，新分離株有莢膜,男性急性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）,男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）,女性急性淋病患者陰道分泌物涂片（革蘭染色）,培養(yǎng)特性 生化反應(yīng),培養(yǎng)特性 需氧，營養(yǎng)要求高。常用的培養(yǎng)基為巧克力色血液瓊脂平板 生化反應(yīng) 除葡萄糖外，不分解其它糖類,與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成灰白色

6、細(xì)小S型呈滴露樣菌落,主要菌體表面抗原構(gòu)造,菌毛 與粘附有關(guān)，免疫原性不強(qiáng) 脂多糖抗原 經(jīng)常變異，相應(yīng)抗體不能防止再感染 外膜蛋白 PI：主要外膜蛋白，將淋病奈瑟菌分為18個(gè)血清型 PII：吸附易感細(xì)菌的蛋白,致病物質(zhì),菌毛 脂多糖（內(nèi)毒素） IgA1蛋白酶,所致疾病,淋病 人類是淋球菌唯一的天然宿主 成人淋病絕大多數(shù)通過性接觸感染，是重要的性傳播疾?。╯exually transmitted disease，STD） 新生兒淋球菌性結(jié)膜炎 “膿漏眼”,微生物學(xué)檢查法,標(biāo)本 保暖（運(yùn)送時(shí)35C保溫）、保濕、立即送檢 直接涂片鏡檢 分離培養(yǎng)與鑒定 巧克力色培養(yǎng)基快速診斷法 ELISA法、核酸雜交

7、、PCR技術(shù),生物學(xué)特性 形態(tài)染色：與腦膜炎奈瑟菌相似， G，雙球菌，咖啡豆?fàn)?，有莢膜和菌毛，無芽胞，無鞭毛 膿汁標(biāo)本中 急性病人：細(xì)菌位于中性粒細(xì)胞內(nèi) 慢性病人：細(xì)菌位于細(xì)胞外 培養(yǎng)特性：與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成灰白色細(xì)小S型菌落 生化反應(yīng)：氧化酶（+），只分解葡萄糖，不分解麥芽糖（腦膜炎奈瑟菌分解麥芽糖）等其它糖類 抗原及分類：以外膜蛋白抗原分16個(gè)血清型 抵抗力：極弱（與腦膜炎奈瑟菌相似）,淋病奈瑟菌,淋病奈瑟菌鑒定依據(jù)：,1. 涂片染色為革蘭陰性雙球菌； 2. 巧克力平板上為半透明、灰白色、凸 起滴露狀菌落； 3. 氧化酶及觸酶均陽性；

8、 4. 只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣； 5. 血清學(xué)試驗(yàn)陽性。,防治原則,預(yù)防淋病應(yīng)取締娼妓、防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系 新生兒1%硝酸銀滴眼，或紅霉素、四環(huán)素眼藥膏 藥物首選青霉素，但多有耐藥性，應(yīng)用新型青霉素族抗生素,腦膜炎奈瑟菌與淋病奈瑟菌比較,小 結(jié),化膿性球菌 革蘭陽性菌：葡萄球菌，鏈球菌，肺炎鏈球菌 革蘭陰性菌：腦膜炎奈瑟菌， 淋病奈瑟菌,N. gonorrhoeae,N.meningitidis,S. pneumoniae,staphylococcus,Streptococcus,膿汁或 喉拭子,涂片、革蘭染色、鏡檢,血瓊脂平板,觀察菌落特征 及溶血情況,生化反應(yīng)、致病力試驗(yàn)及藥敏試驗(yàn),病

9、原性球菌的鑒別,由腦脊液標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)外有G-雙球菌，可初步診斷為腦膜炎球菌 由泌尿、生殖系統(tǒng)來源的標(biāo)本中分離出的G-雙球菌，可初步診斷為淋球菌,37 24h,葡萄球菌鑒別,金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 色素 金黃色 白色 -溶血素 + - 血漿凝固酶試驗(yàn) + - 耐熱DNA酶試驗(yàn) + - 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn) + - 致病力 強(qiáng) 弱或無 膿汁標(biāo)本 找出兩種菌落 Gram染色 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn),菌落小、半透明 、表面光滑、邊緣整齊 G+ 、鏈狀,完全溶血 乙型鏈球菌 不溶血 丙型鏈球菌 草綠色不完全溶血環(huán) 甲型鏈球菌 肺炎鏈球菌,菊糖發(fā)酵試驗(yàn) -（紫色） +（黃色） 膽汁溶菌試驗(yàn) -（混濁）

10、+（澄清）,喉拭子標(biāo)本 找出兩種菌落 Gram染色,痰培養(yǎng)肺炎鏈球菌檢驗(yàn)全程報(bào)道,姚軍,微生物檢驗(yàn),1.痰涂片（肺炎鏈球菌鏡下）:,1.痰涂片（肺炎鏈球菌鏡下）:,2.原始培養(yǎng)物18h后菌落（肺炎鏈球菌菌落）:,2.原始培養(yǎng)物18h后菌落（肺炎鏈球菌菌落）:,3.傳代后的純培養(yǎng)物:,3.傳代后的純培養(yǎng)物:,傳代后的菌落直徑較首代有些縮小了,菌落濕潤程度也有些降低,但仍然很濕潤.,4.Optochin抑制試驗(yàn):,抑菌環(huán)中也微弱的生長(zhǎng)了些菌落,但經(jīng)過涂片發(fā)現(xiàn)是口腔球菌.可能是做該試驗(yàn)的同事挑菌落的時(shí)候,沒把握好.把雜菌帶進(jìn)去了.盡管如此,抑菌環(huán)還是非常明顯而寬大(22mm).,5.生化反應(yīng):,用的就是普通微量管,在接種前滴加小牛血清1滴.5%CO2,35培養(yǎng)1824h后讀取并記錄結(jié)果.,6.肺炎鏈球菌乳膠凝集試驗(yàn)：左邊是測(cè)試，右邊是陰性對(duì)照：,7.藥敏試驗(yàn)（K-B法）：,7.藥敏試驗(yàn)（K-B法）：,思考題,一、填空題：,一、填空題：,二、是非題：,三、選擇題：,三、選擇題：,三、選擇題：,三、選擇題：,四、名詞解釋：,1、血漿凝固酶 2、葡萄球菌A蛋白,問答題,1、如何從膿汁標(biāo)本中檢出金黃色葡萄球菌，請(qǐng)寫出檢驗(yàn)程序，鑒定依據(jù)？ 2、肺炎鏈