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文檔簡介
1、項目五植物油中磷脂含量的測定,食品分院劉深勇,主要內(nèi)容,實驗?zāi)康?掌握用油脂中磷脂測定的原理和方法。 學(xué)習(xí)吸收曲線的制作和結(jié)果計算。 進(jìn)一步熟練掌握分光光度計的使用方法。,磷脂的定義,實驗原理,植物油脂中的磷脂經(jīng)灼燒成五氧化二磷,被熱鹽酸變成磷酸,遇鉬酸鈉生成磷鉬酸鈉,用硫酸聯(lián)氨還原形成鉬藍(lán),在680nm,用分光光度法測定其含量。,磷脂測定儀器和器具,鉬藍(lán)比色法 1.瓷坩堝或石英坩堝; 2.分光光度計或帶塞的50 ml比色管; 3.移液管:5、10 ml; 4.電爐、高溫爐; 5.容量瓶:100、500、1000 ml; 6.表面皿、燒杯、量筒; 7.恒溫水浴鍋; 8.漏斗、坩堝鉗、試劑瓶等,
2、磷脂測定的試劑,1.50氫氧化鉀溶液; 2.鹽酸、硫酸、氧化鋅、濾紙; 3.0.015硫酸聯(lián)氨溶液; 4.2.5鉬酸鈉稀硫酸溶液:量取140 ml硫酸注入300 ml水中,搖勻,冷卻至室溫,加入 12.5 g鉬酸鈉,溶解后加水至500 ml,搖勻,靜置24 h備用。 5.磷標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取無水的磷酸二氫鉀0.4391 g溶于1000 ml水中,作為1號液,含磷0.1 mg/ml,吸取1號液10 ml,加水稀釋至100 ml,含磷0.01 mg/ml,作為2號液,比色用。,操作步驟,1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:取4只50 ml比色管,編成1,2,4,8五個號碼,按號碼順序分別注入磷標(biāo)準(zhǔn)2號液1,2,4,8
3、ml,再按順序分別加水9,8,6,2 ml。接著向4只管內(nèi)各加0.015硫酸聯(lián)氨溶液8.0ml;各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0 ml,加塞、搖勻。去塞,將4只管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min,取出冷卻至室溫,用水稀釋至50 ml,充分搖勻,靜置10 min后,用分光光度計在波長650 nm 下,用1cm液槽,用水調(diào)整零點,分別測定吸光度值。以吸光度為縱坐標(biāo),以磷量(0.01、0.02、0.04、 0.08 mg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。,操作步驟,2.制備被測液:用坩堝稱取試樣約10 g(準(zhǔn)確至0.001 g),加氧化鋅0.5 g(氧化鋅在灰化中能和磷形成磷酸鋅防止磷以氧化物的形式揮發(fā)造成損失
4、),先在電爐上加熱炭化,然后送入550600的高溫爐中灼燒至灰化(白色),灼燒時間約1 h,取出坩堝冷卻至室溫,用熱鹽酸(11)10 ml溶解灰分,并加熱微沸5 min,將溶解液過濾注入100 ml容量瓶中,用熱水沖洗坩堝和濾紙,待濾液冷卻至室溫后,用50氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)混濁,緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后,再滴2滴,最后用水稀釋至刻度,搖勻。,操作步驟,3.比色:用移液管吸取被測液10 ml注入50 ml比色管中,加入0.015硫酸聯(lián)氨8.0 ml,加2.0 ml鉬酸鈉稀硫酸溶液,加塞,搖勻。去塞,將比色管置于正在沸騰的水浴中加熱10 min,取出冷卻至室溫,用水稀釋至50 ml,充分搖勻,靜置10 min后,用分光光度計在波長650 nm下,用1cm液槽,用水調(diào)整零點,測定吸光度值。,結(jié)果計算,根據(jù)被測液的吸光值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷量(P),按公式(1)計算磷脂含量:,雙試驗結(jié)果允許差不超過0
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