高二生物微生物的實驗室培養(yǎng)1

1、高二年級生物,專題二 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用,1.何為培養(yǎng)基？,3.不同的培養(yǎng)基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些營養(yǎng)成分？有何作用？請舉例說明。,自主學(xué)習(xí):,2.按照不同的培養(yǎng)基劃分標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基有哪些種類、配制特點及其應(yīng)用？,一、培養(yǎng)基,一、培養(yǎng)基,鑒別培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基,人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。,固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基,天然培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基,一、培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基,鑒別培養(yǎng)基,在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它種類微生物生長的培養(yǎng)基。,根據(jù)微生物的代謝特點 在培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成，用以鑒別不同的

2、微生物。,牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方,牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 瓊脂 20.0g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容至1000ml。,一、培養(yǎng)基,根據(jù)配方你能配制出100ml培養(yǎng)基嗎？,配方中的各成分為微生物提供了哪些營養(yǎng)？,固體培養(yǎng)基：菌落,菌落,菌落是鑒定菌種的重要依據(jù),1、何為無菌技術(shù)？無菌技術(shù)包括哪些方面？ 2、消毒和滅菌的區(qū)別？ 3、常用的消毒方法有哪些？ 4、常用的滅菌方法有哪些？ 5、干熱滅菌法和高壓蒸汽滅菌法的操作步驟。,二、無菌技術(shù),自主學(xué)習(xí)：,消毒,使用較溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。,滅菌

3、,使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)所有的微生物，包括芽孢和孢子。,二、無菌技術(shù),常用的消毒方法,1、100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒 4、氯氣消毒水源 5、紫外線消毒 ,二、無菌技術(shù),1、灼燒滅菌 2、干熱滅菌：160-170 下加熱1-2h。 3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121 下維持15-30min。,常用的滅菌方法,二、無菌技術(shù),A.培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基或培養(yǎng)皿 B.玻棒、試管、燒瓶和吸管 C.接種環(huán)、接種針 D.實驗操作者的雙手,滅菌,滅菌,滅菌,消毒,二、無菌技術(shù),三、基本操作程序,1、

4、器具的滅菌 2、培養(yǎng)基的配制 3、培養(yǎng)基的滅菌 4、倒平板 5、微生物接種 6、恒溫箱中培養(yǎng) 7、菌種的保存,1、倒平板技術(shù),1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？,問題探討,可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？,4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度

5、也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。,2、微生物的接種技術(shù),問題探討,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼

6、燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。,問題探討,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？,應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物

7、體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,3、微生物的恒溫培養(yǎng),3、微生物的恒溫培養(yǎng),1、臨時保藏：,接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后置于4冰箱保存。,2、長期保存：,甘油冷凍管藏法,4、菌種的保存,四、課題成果評價,（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與

8、記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。,實踐:分離土壤中的細(xì)菌,1、由土壤浸出液中提取細(xì)菌。 2、有哪些注意事項？ 3、如何判斷土壤中有哪些種類的細(xì)菌？菌落的特征？, 合樂平臺 mqu68hno 兒出來！這要燒著了，可不是鬧著玩兒的！”說著就要跳下土圪臺。郭氏趕快拉住她，說：“沒有事兒，搖火團(tuán)兒是三狗子的絕活兒，他掌握著分寸呢！你沒有看見妞兒看得多高興嗎？就別去掃娃娃們的興了！”劉氏只好繼續(xù)提心吊膽地看著，發(fā)現(xiàn)這三狗子果然很會掌握分寸，每一次在妞兒面前變換花樣

9、兒都是有驚無險，也就慢慢放下心來。一會兒，裴氏發(fā)現(xiàn)青山從人群中擠出來了。再繼續(xù)望去，呵，這小子往對面的一棵垂柳樹下快步走去了很快，青海也出來了。左顧右盼一會兒以后，往南面兒人群外一溜兒小跑。順著青海跑去的方向望去，一個穿了花裳兒的人影兒正在那兒招手呢！一會兒，倆人并肩走到旁邊的樹陰里看不清楚了裴氏無聲地笑了。順著裴氏的眼神兒，郭氏也看到了這一切?？粗崾蠈捫牡男θ?，郭氏滿懷歉意地說：“弟妹啊，很快了！等秀兒做了俺的媳婦以后，你也就可以當(dāng)婆婆了！”裴氏高興地點點頭，說：“是啊，俺和他爹盼了好幾年了哇！”劉氏也說：“俺家二壯也在等著了呢！等英子嫁給大壯以后，俺們就給二壯定了那門親了！”郭氏問：“沒

10、有聽你說過哇！也是咱們鎮(zhèn)上的？”劉氏說：“不，不是咱們鎮(zhèn)上的，是俺娘家隔壁的小花兒。小花兒和她姐姐一樣，也是一個很好的女娃兒！她姐姐是去年臘月才出嫁的，沒有出村兒，嫁了全村兒上最好的人家呢！”站在更遠(yuǎn)處觀看的耿老爹、耿憨和董家成老哥仨就著明亮的月光，清楚地看到耿正扶著秀兒的腰，慢慢地往村南的那棵大槐樹走去了不一會兒，大壯也扶著耿英的腰，慢慢地向南走一段兒以后，拐到通往小河邊的那條路上去了10第百三二回 輕輕松松看水稻|（高高興興收家什，輕輕松松看水稻；親情融融逗樂子，歡歡喜喜盼拜月。）送左鄰右舍兩家人都回去以后，耿老爹要來幫著收拾飯桌，郭氏推開他，說：“去去去，俺們娘兒三個呢！”耿老爹笑一笑，聽話地乖乖退在一旁，對兩個兒子說：“聽青海說，你們把木匠師傅們下午做的活計都安排好了？”耿正說：“是告了他們一下了！”耿老爹說：“那你們倆和爹一起去看看咱家的水稻哇，已經(jīng)開始灌漿了呢！”耿直一聽就高興了，說：“是哩，俺倆是有一段日子沒去看了呢，光顧了學(xué)堂那邊的事情了。”耿正也說：“都開始灌漿了？那咱現(xiàn)在就走哇，俺也很想去看一看呢！