農(nóng)藥殘留與分析.ppt

1、農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù),教 材：農(nóng)藥殘留分析岳永德 主編 參考教材：色譜分析樣品處理王立 主編 食品衛(wèi)生國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)匯編,農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù),目錄,第一章 緒論,第二章 農(nóng)藥殘留樣品采集,第三章 樣品制備,第四章 農(nóng)藥殘留分析的 質(zhì)量控制,第五章 農(nóng)藥殘留測(cè)定方法,目錄,第六章 農(nóng)藥殘留的酶抑制劑法與免疫測(cè)定方法,第七章 農(nóng)藥多殘留分析,第八章 殺蟲劑殘留分析,第九章 殺菌劑殘留分析,第十章 除草劑殘留量測(cè)定,第十一章 農(nóng)藥殘留法規(guī)與管理,第一章 緒論,一、農(nóng)藥殘留和殘留毒性 1、農(nóng)藥殘留的定義 2、農(nóng)藥殘留的來(lái)源 3、農(nóng)藥殘留毒性,二、農(nóng)藥殘留分析 1、分析特點(diǎn) 2、分析方法和程序 3、分析方法的選擇,

2、1、農(nóng)藥定義 廣義：農(nóng)業(yè)上使用的化學(xué)品 狹義：用于防治農(nóng)、林有害生物的化學(xué)藥劑，以及為改善其理化性狀而用的輔助劑。,一、農(nóng)藥殘留和殘留毒性,2、農(nóng)藥殘留的定義,3、農(nóng)藥殘留的來(lái)源 水 空氣 土壤 環(huán)境因子 人為,4、農(nóng)藥殘留毒性 因攝入或長(zhǎng)時(shí)間重復(fù)暴露農(nóng)藥殘留而對(duì)人、畜以及有益生物產(chǎn)生急性或亞急性及慢性中毒。,5、農(nóng)藥殘留毒性的類型 化學(xué)穩(wěn)定性：六六六、DDT 三致性：致癌、致畸、致突變 環(huán)境激素化合物 遲發(fā)性神經(jīng)毒性,6、農(nóng)藥的降解（半衰期） 溶解性：地下水 環(huán)境因子：溫度、降水、陽(yáng)光、風(fēng) 稀釋作用：植物的吸收,1、分析特點(diǎn) 殘留水平低（kg、g、mg） 分析過(guò)程的復(fù)雜性 技術(shù)要求提高,二、

3、農(nóng)藥殘留分析,2、分析方法和程序 分析方法： 單一成分殘留 多種成分殘留,同一類農(nóng)藥 多種農(nóng)藥,2、分析方法和程序 分析程序： 樣品采集 樣品預(yù)處理 樣品制備 分析測(cè)定,3、分析方法的選擇因素 農(nóng)藥的理化特性、送檢樣人的要求； 單殘留或多殘留方法； 最大殘留限量、方法檢測(cè)限、總誤差； 分析方法的有效性； 分析時(shí)間和費(fèi)用,1、容許最大限量（Permissible level） 在新鮮食品中允許的最大殘留限界。,X：日攝取量（ppm） S：安全系數(shù) F：食品的消費(fèi)量,2、可接受的日攝入量(ADI) （Acceptable Daily Intake） 指在一生中，對(duì)消費(fèi)者健康沒有可感知危險(xiǎn)的日攝入量

4、。 單位為：mg/kg/day,3、臨時(shí)可接受日攝入量（TADI） 指可以獲得足夠的以致額外的生化、毒性以及其它所需數(shù)據(jù)，而確定的有限時(shí)期內(nèi)可接受的日攝入量。,TADI ADI,4、最大殘留限制(MRL) 指由食品營(yíng)養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)推薦的，食品或動(dòng)物飼料中允許的農(nóng)藥殘留物的最大濃度（毫克/公斤）。是根據(jù)在毒理學(xué)上認(rèn)為可以接受的食品農(nóng)藥殘留量制定的。, 安全、環(huán)保、高效、經(jīng)濟(jì) 新技術(shù)（樣品處理技術(shù)） 檢測(cè)上采用多殘留分析方法 酶聯(lián)免疫技術(shù) 分析方法的標(biāo)準(zhǔn)化 質(zhì)量和健康意識(shí),三、發(fā)展和任務(wù),第二章農(nóng)藥殘留樣品的 采集,第二章 農(nóng)藥殘留樣品的采集,一、樣品的種類 二、取樣方法 三、樣品的包裝、記錄和貯存

5、 四、樣品的預(yù)處理,1、主觀樣品 為研究農(nóng)藥殘留量與各種因素的關(guān)系，從設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)采集的樣品。 2、客觀樣品 監(jiān)測(cè)樣品和執(zhí)法樣品，測(cè)定的農(nóng)藥殘留種類是未知的或施藥背景不清楚的樣品。,一、樣品的種類,1、實(shí)驗(yàn)室樣品 從群體采集的送到殘留分析實(shí)驗(yàn)室的樣品。 2、檢測(cè)樣品 實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)縮分減量或經(jīng)過(guò)精制后的樣品。 3、檢測(cè)樣份 從檢測(cè)樣品中稱取的用于分析的樣品。 4、檢測(cè)溶液 經(jīng)過(guò)提取、凈化后進(jìn)入待測(cè)狀態(tài)。,1、取樣原則 代表性 方法與目的保持一致 精度要求 防止化學(xué)變化或丟失 防止污染,二、取樣方法,2、取樣方法 靜態(tài)群體中取樣 動(dòng)態(tài)群體中取樣,3、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)及取樣 農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的目的

6、和要求 農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)的內(nèi)容 a、農(nóng)藥殘留動(dòng)態(tài)試驗(yàn) b、施藥因素與最終殘留量水平相關(guān)性 c、農(nóng)藥殘留田間試驗(yàn)樣品的采集,4、商品取樣分類 監(jiān)測(cè)調(diào)查取樣：隨機(jī)、概率、分布水平 執(zhí)法取樣：強(qiáng)制性、超標(biāo)與否,5、商品取樣量要求 小的或輕的產(chǎn)品 1.01.5Kg 中等大小產(chǎn)品 2.02.5Kg 大的產(chǎn)品 4.05.0Kg 肉、禽、魚 1.01.5Kg 谷物和制品 0.51.0Kg,6、不同樣品的采集要求 根莖類蔬菜 采集整個(gè)實(shí)體 葉類蔬菜 除去腐爛和枯萎部分 豆類 整個(gè)果實(shí) 果類蔬菜 去除莖部 谷物 整個(gè)籽粒 肉類 整體,三、樣品的包裝、記錄和貯存,標(biāo)簽（2個(gè)）,編號(hào)： 樣品名稱： 采樣時(shí)間： 地點(diǎn)

7、：,要求： 溫度 濕度 光照 單獨(dú)存放,四、樣品的預(yù)處理, 粉狀物 谷物 小體積水果和蔬菜 大體積水果和蔬菜 液體樣品 土壤,對(duì)含水量較高的樣品采樣方法 肉：放人鉸肉機(jī)中鉸勻 水果蔬菜等，放入高速組織搗碎器攪勻 蛋類食品，去殼后用打蛋器打勻。 對(duì)于包裝食品，取出各種調(diào)味品后，再制備均勻。,第三章 樣品制備,樣品前處理在色譜分析過(guò)程中是一個(gè)既耗時(shí)又極易引進(jìn)誤差的步驟，樣品處理的好壞直接影響色譜分析的最終結(jié)果，因此，為了提高分析測(cè)定效率，改善和優(yōu)化色譜分析樣品制備方法和技術(shù)是一個(gè)重要問(wèn)題。 前處理方法:溶劑萃取、固相萃取、超臨界流體萃取、微波萃取以及衍生化技術(shù)等色譜分析樣品。 技能要點(diǎn)溶劑萃取技術(shù)

8、；蒸餾及精餾技術(shù)；相萃取技術(shù)；超臨界流體萃取技術(shù)；微波萃取技術(shù),第三章 樣品制備,第一節(jié) 概論,第二節(jié) 溶劑萃取技術(shù),第三節(jié) 固相萃取技術(shù),第四節(jié) 蒸餾及濃縮技術(shù),第五節(jié) 微波；衍生化；超臨界萃取技術(shù),第一節(jié) 概論,一、進(jìn)展和發(fā)展趨勢(shì),二、樣品處理的原則,三、樣品制備原理,四、樣品制備（提?。?五、常用樣品制備技術(shù),樣品前處理：分析前的采樣技術(shù)和樣品制備技術(shù)。采集樣品適合分析的形態(tài) 過(guò)程耗時(shí)、繁瑣、誤差 前處理不好 需要靈敏度高、測(cè)定范圍寬的檢測(cè)器和分離效率高的分離柱。,一 、發(fā)展趨勢(shì),制備過(guò)程中避免組分發(fā)生化學(xué)變化； 要防止和避免測(cè)定組分的污染； 盡可能減少雜質(zhì)引入制備過(guò)程； 盡可能簡(jiǎn)單易行

9、,二、樣品處理的原則,三、樣品制備原理,利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)差異，使其從檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來(lái)（相似相溶）。 極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性-蒸汽壓。,（一）、分子的極性和水溶性,1、極性 提取、凈化條件的依據(jù) 相似相溶原理：使用與農(nóng)藥極性相近的溶劑為提取劑，使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。 極性判斷：電負(fù)性、雙鍵、對(duì)稱性 表示：氧化鋁吸附劑上洗脫供試溶質(zhì)的能力,2、水溶性 農(nóng)藥的極性決定其在溶劑中的溶解性 影響溶解性的其他因素 溫度：高溶解性高 含鹽量：鹽會(huì)降低有機(jī)物的溶解度。 pH：影響可解離的農(nóng)藥的溶解度,（一）、分子的極性和水溶性,（二）、分配定律,分

10、配定律：在一對(duì)互不相溶的兩相溶劑系統(tǒng)中，由于物質(zhì)在非極性相和極性相中的溶解度不同，當(dāng)達(dá)到平衡時(shí)，物質(zhì)在該兩相中的濃度比在一定條件下為常數(shù)的定律。 KD （分配系數(shù)） = A非極性相 / B極性相,（三）、揮發(fā)性與蒸汽壓,揮發(fā)性：液態(tài)或固態(tài)物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)闅鈶B(tài)的物理性能。 揮發(fā)性決定：物質(zhì)在氣-液或氣-固兩相中的分布。分為沸點(diǎn)和蒸汽壓。 蒸汽壓：固態(tài)、液態(tài)氣態(tài),四、樣品制備（提?。?提取是指通過(guò)溶解、吸附（吸著）或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來(lái)的操作步驟，也叫萃取。 避免：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫、劇烈操作 極性-溶解度、分配系數(shù)；揮發(fā)性-蒸汽壓。,五、常用樣品制備技術(shù),溶劑萃取,蒸餾技術(shù),固相萃取,微

11、波萃取,衍生化,超臨界萃取,樣品制備,第二節(jié)溶劑萃取技術(shù),溶劑萃?。喝芙庑圆町?，選用對(duì)殘留農(nóng)藥溶解度大的溶劑，將分析物從樣品基質(zhì)中提取出來(lái)的方法。 關(guān)鍵：選擇合適的提取溶劑,一、分 類,液-液萃取,液-固萃取,液-氣萃取（溶液吸收）,萃取對(duì)象,二、液- 液萃取,兩種不相容 的液體,水溶劑：親水化合物進(jìn)入到水相中。,有機(jī)溶劑：疏水性化合物將進(jìn)入有機(jī)相中的程度就越大。,（一）、液-液萃取原理,利用樣品中不同組分分配在兩種不混溶的溶劑中溶解度或分配比的不同來(lái)達(dá)到分離、提取或純化的目的。,有機(jī)相,水相,（二）、Nernst分配定律（1）,KD = cocaq,有機(jī)物質(zhì)在有機(jī)溶劑中的溶解度一般比在水相中

12、的溶解度大，分配系數(shù)越大，水相中的有機(jī)物可被萃取。,（二）、Nernst分配定律（2）,式中，m0是被萃取溶液中溶質(zhì)（X）的總含量， mn是經(jīng)過(guò)n次萃取后，X在溶劑中的剩余量， V是被萃取溶液的體積， VB是每次萃取所用溶劑B的體積（均為VB）， n是等量萃取的次數(shù)。,（三）、液-液萃取步驟（1）,溶劑體積為樣品溶液的30-35,振蕩幾次,打開活塞,Gas,蒸氣逸出（恒壓通氣）,（三）、液-液萃取步驟（2）,乳化帶,有機(jī)相,水相,水相和乳化帶,靜置分層,激烈振搖 2 4 min,（三）、液-液萃取步驟（3）,（四）、產(chǎn)生乳化的原因,由于液-液萃取過(guò)程中劇烈振動(dòng)，經(jīng)常發(fā)生乳化現(xiàn)象，特別是那些含脂

13、肪的樣品。 原因：體系的性質(zhì)、離子濃度、有機(jī)相粘度、萃取溫度、pH等。 溫度越低，有機(jī)相粘度越大，離子濃度越高越易產(chǎn)生乳化。,（五）、破乳的常用方法,通過(guò)改變KD; 改變?nèi)軇┗蚧瘜W(xué)平衡作用的添加劑; 緩沖劑調(diào)節(jié)pH; 鹽調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度等。, 離心法破乳。2000rmin，2min； 無(wú)水硫酸鈉研磨法破乳； 蒸干法，蒸干后，再用有機(jī)溶劑萃取。不適用揮發(fā)性物質(zhì)的萃取。,A、高度乳化（即全部乳化）,B、中度乳化（乳化率達(dá) 50）, 電解質(zhì)破乳。加入無(wú)機(jī)鹽，通過(guò)提高 體系中水相的比重使兩相分層； 破乳率與加入電解質(zhì)的量成正比。 lmolL 的鹽酸； 無(wú)水乙醇溶解兩相液滴； 無(wú)水硫酸鈉漏斗過(guò)濾。,C、輕度

14、乳化（兩相間形成一薄乳化層）, 玻璃棒攪動(dòng)，削弱吸附作用； 靜置一定的時(shí)間后，可自然分層。 因?yàn)槿闈嵋菏且后w雜質(zhì)以微小珠滴散布在液體溶劑中的一種分散體系，是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系。,三、液- 固萃取,固體萃取溶劑振蕩（加熱）離心/過(guò)濾分離欲萃取組分進(jìn)入溶劑,（一）、萃取過(guò)程,溶解和擴(kuò)散的過(guò)程,分子擴(kuò)散：固體樣品表面/溶劑接解處 影響因素：溫度、分子大小和液體介質(zhì)的黏度。 對(duì)流擴(kuò)散：遠(yuǎn)離固體樣品表面處的擴(kuò)散 影響因素：流動(dòng)液體的速度和狀態(tài)，液體的黏度、樣品表面的性質(zhì)等。,索氏萃取裝置和K-D濃縮器,（二）、萃取裝置,四、不同樣品中殘留農(nóng)藥的提取,1、水樣 2、氣體樣品 3、植物和動(dòng)物樣品 4、土壤樣品

15、,五、萃取劑的選擇,1、萃取劑的選擇性（極性） 2、穩(wěn)定性、毒性 3、沸點(diǎn)：40-80者為宜 4、萃取劑回收的難易與經(jīng)濟(jì)性 5、色譜檢測(cè)器的響應(yīng),第四節(jié) 蒸餾和濃縮技術(shù),一、蒸餾和精餾,三、濃縮,二、凈化,一 、蒸餾和精餾,一種材料在不同溫度下的飽和蒸氣壓變化是蒸餾分離的基礎(chǔ)。,蒸餾,1、（半）揮發(fā)性雜質(zhì)：不揮發(fā)/難揮發(fā)主體留下 2、（半）揮發(fā)主體蒸發(fā)不揮發(fā)/難揮發(fā)雜質(zhì)留下。,一 、蒸餾和精餾,1 、簡(jiǎn)單蒸餾,2 、減壓蒸餾,3、水蒸汽蒸餾,4、精 餾,（一）、簡(jiǎn)單蒸餾,液體樣品加熱,冷凝回流回流液,冷凝收集流出液,1 、簡(jiǎn)單蒸餾要求, 圓底燒瓶 沸點(diǎn)差別50。 加熱溫度：40150 加熱溫度

16、不能比蒸餾物質(zhì)的沸點(diǎn)高出30,2、簡(jiǎn)單蒸餾裝置,組成：蒸餾燒瓶、溫度計(jì)、冷凝器、收集器和加熱裝置等。 備注：液體裝入燒瓶后，加熱之前，加入沸石。,（二） 、 減壓蒸餾,沸點(diǎn)：蒸氣壓 = 外界大氣壓時(shí)的溫度。 沸點(diǎn)：隨外界壓力的降低而降低。 減壓蒸餾：真空泵降低表面壓力（沸點(diǎn)） 高沸點(diǎn)：0.1326.7kPa條件下減壓蒸餾。,1 、 壓力換算,1 atmos = 1013 mBar 1 Kpa = 0.146psi 1 Psi = 68.948 mbar 1 atmos = 100.6317Kpa,1-電爐；2-克萊森瓶；3-毛細(xì)管；4-螺旋止水夾；5-溫度計(jì)； 6-細(xì)銅絲；7-冷凝器；8-接受

17、瓶；9-接收管；10-轉(zhuǎn)動(dòng)把； 11-壓力計(jì)；12-安全瓶；13-三通管閥門；14-接抽氣機(jī),2、減壓蒸餾裝置,(三）、水蒸汽蒸餾,對(duì)象：有機(jī)物 具備條件：幾乎不溶于水、不會(huì)發(fā)生化學(xué)變化、在100下蒸汽壓有大于1.3kPa。,盛水量為75 液體樣品1/3。 燒瓶?jī)A斜45o 冷凝管：30o 。,水蒸氣蒸餾裝置,被蒸餾的材料根本不會(huì)加熱到比蒸汽的溫度還高。,二、凈化（純化）,樣品經(jīng)萃取被測(cè)成分萃取液含有雜質(zhì)干擾測(cè)定。 萃取液適當(dāng)處理除去雜質(zhì)純化。,（一）干擾雜質(zhì)的性質(zhì),1、脂類：脂肪酸、醇 溶于有機(jī)溶劑 2、色素：溶于極性較強(qiáng)的溶劑 3、其他：硫ECD、FPD 塑料管有機(jī)溶劑,（二）、凈化方法,1

18、、過(guò)濾 2、柱層析法 3、液-液分配法（又稱萃取法） 4、吹掃共餾法 5、沉淀凈化法 6、化學(xué)凈化法,1、樣品過(guò)濾,過(guò)濾：樣品中除去顆粒物用0.45m 或 0.22m 濾膜去除干擾物,濾膜,有機(jī)濾膜：白色 無(wú)機(jī)濾膜：綠色,2、柱層析法,利用被測(cè)物質(zhì)與干擾物質(zhì)在固體吸附劑表面的吸附力不同而達(dá)到分離的目的。 農(nóng)藥一般先被淋洗出來(lái)，達(dá)到與雜質(zhì)分離的目的。,柱層柱類型,弗羅里硅膠柱：乙醚/石油醚 氧化鋁柱：乙醚/正己烷 硅膠柱：乙酸乙酯/石油醚 活性碳柱：乙腈/苯,3、液-液分配法,是利用物質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中極性不同，將有機(jī)污染物從抽提液轉(zhuǎn)移到另一種溶劑中達(dá)到分離。, 具備以下條件, 對(duì)被測(cè)藥物

19、（農(nóng)藥、獸藥、真菌毒素等）有較大的溶解性； 對(duì)色素、脂肪、蠟質(zhì)等雜質(zhì)有較小的溶解性。, 萃取液與提取液,極性較大的雜質(zhì)，用強(qiáng)極性溶劑溶解。 如極性較大的氯仿、甲醇等溶劑來(lái)萃取石油醚等極性較小的抽提液。,4、沉淀凈化法,低溫下，脂肪和蠟質(zhì)形成結(jié)晶，從溶解度較高的農(nóng)藥提取物中除去。 步驟: 丙酮提取80 沉淀 凈化,5、化學(xué)凈化法,針對(duì)動(dòng)物樣品 用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿將樣品基體消解掉。 留下農(nóng)藥母體并凈化， 應(yīng)用對(duì)象：有機(jī)氯農(nóng)藥,三、濃縮和富集,目的：使供測(cè)定的樣品達(dá)到儀器能夠檢測(cè)的 濃度，或進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換。 濃縮：通過(guò)減少樣品溶液中的溶劑或水分而 使組分的濃度升高。 富集：利用液-固萃取的方法濃縮某種組分。

20、,1、注意事項(xiàng),（1）、農(nóng)藥損失 （2）、樣品污染,2、濃縮和富集方法,方法,（1）減壓蒸餾：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （2）氣流吹蒸：空氣或氮?dú)?（3） K-D濃縮器濃縮 （4）真空離心濃縮法,（1）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,包括旋轉(zhuǎn)燒瓶、冷凝器、溶劑接收瓶、真空設(shè)備、加熱源等。溶劑可以回收。,（2）氣流吹蒸法,利用空氣或氮?dú)饬鲗⑷軇С鰳悠?，一般在加熱條件下進(jìn)行。用于少量液體的濃縮，蒸汽壓較高的組分易損失。,氮吹儀的注意事項(xiàng), 不能用于燃點(diǎn)低于100 的物質(zhì) 氮?dú)狻⒀鯕饧兌雀哂?9% 不能用于酸、堿物質(zhì)的濃縮 酸性用碳酸氫鈉溶解中和 一天一換水浴的水,第五節(jié) 超臨界萃取技術(shù)等,一、超臨界萃取技術(shù),二、微波萃取技術(shù),三

21、、超聲波輔助萃取,本節(jié)首頁(yè),退出本章,四、衍生化技術(shù),五 、生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除,一 、超臨界萃取技術(shù),本節(jié)首頁(yè),退出本章,臨界溫度：32,一 、超臨界萃取技術(shù),本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、三相點(diǎn)和臨界點(diǎn),本節(jié)首頁(yè),退出本章,臨界點(diǎn)：液、氣兩相呈平衡狀態(tài)的點(diǎn)。 臨界溫度：在臨界點(diǎn)時(shí)的溫度。 臨界壓力：在臨界點(diǎn)時(shí)的壓力。,2 、超臨界流體,本節(jié)首頁(yè),退出本章,物體處于其臨界溫度和臨界壓力以上時(shí)的狀態(tài)。 氣體：粘稠度、表面張力低，溶解能力強(qiáng)，萃取功能高。壓力，溶解能力。 液體：體積小。,3 、超臨界流體的性質(zhì),4 、特 點(diǎn),本節(jié)首頁(yè),退出本章, 在35-40下提取 干凈的提取方法 CO2

22、是一種不活潑的氣體。 循環(huán)使用，降低成本。 參數(shù)可以調(diào)節(jié),流動(dòng)相,二 、微波萃取,本節(jié)首頁(yè),退出本章,微 波,金屬,水分,二 、微波萃取,本節(jié)首頁(yè),退出本章,二 、微波萃取,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、微 波,本節(jié)首頁(yè),退出本章,頻率：300300000MHz的電磁波。 穿透：玻璃、塑料、陶瓷等絕緣體。 當(dāng)微波作用于水和酸性物質(zhì)時(shí)，將被極性分子所吸收，因而物質(zhì)很快被加熱。,2 、工作原理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,吸收微波細(xì)胞內(nèi)部溫度細(xì)胞內(nèi)部壓力超過(guò)細(xì)胞壁膨脹承受能力細(xì)胞破裂有效成分自由流出。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、影響因素, 萃取溫度的影響 萃取溶劑的影響 樣品杯：聚四氟乙烯,本節(jié)首頁(yè),退出本章,三

23、、超聲波輔助萃取,能量外部向內(nèi)部傳遞。 超聲波使溶液形成氣泡（空化效應(yīng)）爆裂溫度和壓力，增強(qiáng)化學(xué)反應(yīng)能力。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,三、超聲波輔助萃取,優(yōu)點(diǎn)：價(jià)廉快速，簡(jiǎn)便安全，批量處理樣品。,四 、衍生化技術(shù),本節(jié)首頁(yè),退出本章,化學(xué)反應(yīng)定量生成適于分析。,1 、衍生化的目的,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 靈敏度與選擇性 改善色譜分離： 揮發(fā)性、降低與色譜材料的相互作用 理化穩(wěn)定性,2 、分 類,本節(jié)首頁(yè),退出本章,柱前衍生化：為了分離 柱后衍生化：為了檢測(cè),3、氣相色譜的衍生化,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（1）硅烷化衍生化方法 （2）酯化衍生化方法 （3）鹵化衍生化方法 （4）酚化衍生化方法,方法,（1）、

24、硅烷化衍生化方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,利用醇，酚，酸，胺等與硅烷化試劑反應(yīng)，形成揮發(fā)性的硅烷衍生物,（2）酯化衍生化方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,大多數(shù)有機(jī)酸揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差。在GC分析之前衍生為相應(yīng)的酯。, 甲醇法 重氮甲烷法 三氟乙酸配法, 甲醇法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,甲醇法 有機(jī)酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發(fā)生酯化反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯, 重氮甲烷法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,與有機(jī)酸反應(yīng)，生成有機(jī)酸的甲酯， 重氮甲烷不穩(wěn)定，有爆炸性，有毒。,（3）、鹵化衍生化方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,引入鹵原子ECD檢測(cè)器也改善揮發(fā)性和穩(wěn)定性。,鹵素的作用是加成或取代,本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、液相色譜的

25、衍生化,1. 紫外衍生化反應(yīng),2熒光衍生化反應(yīng),3電化學(xué)衍生化反應(yīng),本節(jié)首頁(yè),退出本章,（1）紫外衍生化反應(yīng),苯甲酰氯 + 胺、醇、酚苯甲酸酯類衍生物（ ）,苯甲?；磻?yīng),本節(jié)首頁(yè),退出本章,（2）熒光衍生化反應(yīng),在目標(biāo)化合物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，如熒光素。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,5、制備衍生物的反應(yīng)罐瓶,五 、生物大分子的細(xì)胞破碎與蛋白質(zhì)的去除,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（一）、生物樣品,植物：營(yíng)養(yǎng)成分、農(nóng)藥殘留等 動(dòng)物：體內(nèi)的藥物及代謝產(chǎn)物、 糖類、維生素、氨基酸等 微生物：,待測(cè)物的位置,本節(jié)首頁(yè),退出本章,體液或細(xì)胞外：采用萃取方法。也可將干擾組分（如蛋白質(zhì)、DNA、多糖等等）沉淀除去。

26、 生物細(xì)胞內(nèi)：首先將細(xì)胞破碎，再采用萃取或沉淀等方法。,（二）、細(xì)胞的破碎,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（二）、細(xì)胞的破碎,目的：就是為了破壞細(xì)胞的外殼，使細(xì)胞內(nèi)含物有效地釋放出來(lái)，獲得有效的提取。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、細(xì)胞的破碎方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、細(xì)胞的破碎方法,1、細(xì)胞的破碎方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、物理法（物理作用）, 反復(fù)凍融法： 15 - 20。 冷熱交替法： 90（數(shù)分鐘）冷卻。 超聲波處理法：用于微生物。 加壓破碎法：,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、化學(xué)及生物化學(xué)法（化學(xué)試劑或酶）, 自溶法： 在一定條件（pH、溫度）， 利用自身的酶系將細(xì)胞破壞。 溶菌酶處理： 具有專一地破

27、壞細(xì)菌細(xì)胞壁的功能。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,Antifungal activity,例：溶菌酶處理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（三）、蛋白質(zhì)的去除,目的：蛋白質(zhì)的存在，常常嚴(yán)重干擾分析,1、加熱法 2、鹽析法 3、膜分離法 4、高速離心 5、有機(jī)溶劑沉淀法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、 加熱法,90離心或過(guò)濾除去熱變性蛋白。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、鹽析法,原理：利用不同蛋白質(zhì)在高濃度的鹽溶液中溶解度不同程度的降低來(lái)沉淀除去蛋白質(zhì)。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、膜分離法,超濾：靠薄膜兩側(cè)壓力差分離,小分子化合物,大分子蛋白質(zhì),本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、高速離心,靠物質(zhì)沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等不同進(jìn)行分離,六、

28、凈化（純化）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,樣品經(jīng)萃取被測(cè)成分萃取液含有雜質(zhì)干擾測(cè)定。 萃取液適當(dāng)處理除去雜質(zhì)純化。,（一）干擾雜質(zhì)的性質(zhì),本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、脂類：脂肪酸、醇 溶于有機(jī)溶劑 2、色素：溶于極性較強(qiáng)的溶劑 3、其他：硫ECD、FPD 塑料管有機(jī)溶劑,（二）、凈化方法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、樣品過(guò)濾,過(guò)濾：除去顆粒物用0.45或 0.22m 濾膜,濾膜,有機(jī)濾膜：白色、黃色 無(wú)機(jī)濾膜：綠色、藍(lán)色,2、柱層析法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,柱層柱類型,本節(jié)首頁(yè),退出本章,弗羅里硅土柱：乙醚/石油醚 氧化鋁柱：乙醚/正己烷 硅膠柱：乙酸乙酯/石油醚 活性碳柱：乙腈/苯,本節(jié)首

29、頁(yè),退出本章,3、液-液分配法, 具備以下條件,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 對(duì)被測(cè)物（農(nóng)藥、獸藥、真菌毒素 等）有較大的溶解性； 對(duì)色素、脂肪、蠟質(zhì)等雜質(zhì)有較小的 溶解性。, 萃取液與提取液,本節(jié)首頁(yè),退出本章,極性較大的雜質(zhì)，用強(qiáng)極性溶劑溶解。 如極性較大的氯仿、甲醇等溶劑來(lái)萃取石油醚等極性較小的抽提液。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、沉淀凈化法,低溫下，脂肪和蠟質(zhì)形成結(jié)晶。 步驟: 丙酮提取80 沉淀 凈化,本節(jié)首頁(yè),退出本章,5、化學(xué)凈化法,針對(duì)動(dòng)物樣品 用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿將樣品基體消解掉。 留下農(nóng)藥母體并凈化， 應(yīng)用對(duì)象：有機(jī)氯農(nóng)藥,三、濃縮和富集,本節(jié)首頁(yè),退出本章,目的：使供測(cè)定的樣品達(dá)到儀器能夠檢

30、測(cè)的 濃度，或進(jìn)行溶劑轉(zhuǎn)換。 濃縮：通過(guò)減少樣品溶液中的溶劑或水分而 使組分的濃度升高。 富集：利用液-固萃取的方法濃縮某種組分。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、注意事項(xiàng),（1）、農(nóng)藥損失 （2）、樣品污染,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、濃縮和富集方法,方法,（1）減壓蒸餾：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 （2）氣流吹蒸：空氣或氮?dú)?（3） K-D濃縮器濃縮 （4）真空離心濃縮法,（1）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,本節(jié)首頁(yè),退出本章,旋轉(zhuǎn)燒瓶 冷凝器 溶劑接收瓶 真空設(shè)備 加熱源,（2）氣流吹蒸法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,空氣、氮?dú)狻饪s、蒸汽壓,農(nóng)藥殘留分析質(zhì)量控制的目的是使分析結(jié)果達(dá)到預(yù)定的標(biāo)準(zhǔn)和精確程度。為了達(dá)到這一預(yù)定目的應(yīng)采取的措施和

31、工作步驟都是事先規(guī)劃好了的。 通過(guò)一系列的規(guī)約加以確定，并要求有關(guān)分析人員按照規(guī)約操作，由此使分析過(guò)程處于受檢狀態(tài)。 技能要點(diǎn)各種規(guī)格的試劑的凈化處理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第四章 農(nóng)藥殘留分析的質(zhì)量控制,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)條件,第二節(jié) 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),第三節(jié) 殘留分析方法的可靠性的確認(rèn),第四節(jié) 農(nóng)殘分析質(zhì)量控制,第五節(jié) 分析結(jié)果的表達(dá)和數(shù)據(jù)處理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)條件,本節(jié)首頁(yè),退出本章,一 、試劑要求,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（一）、純 水,制備,蒸餾水：水與雜質(zhì)的沸點(diǎn)不同，難免有痕量的金屬離子。 去離子水：交換樹脂獲得的純水稱離子交換或。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,各種水的比較

32、,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（二）、試 劑,特 級(jí) 光（色）譜純 S.P 白 色,級(jí) 別 名稱 代號(hào) 標(biāo) 志,一 級(jí) 優(yōu)級(jí)純 Guarantte Reagent 綠 色,二 級(jí) 分析純 Analysis Reagent 紅 色,三 級(jí) 化學(xué)純 Chemical Reagent 藍(lán) 色,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、試劑的鑒別圖片,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、試劑的凈化,要求：濃縮進(jìn)樣5ul，雜峰高度不應(yīng)超過(guò)1mm。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（1）、氧化鋁（SPE用）,5504h 1305h,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（2）、活性碳,活性碳農(nóng)鹽酸1h（加熱煮沸） 中性烘干。 6002h 1054h,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（

33、3）、石油醚,沸程：6090 密度：0.65 凈化方法： 吸附蒸餾 回流蒸餾 分液（漏斗）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（4）、丙 酮,沸點(diǎn)：5557 密度：0.78 凈化方法： 脫水棕色瓶,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（5）、乙 腈,沸點(diǎn)：81.6 密度：0.78 惰性液體 凈化方法： 無(wú)水碳酸鈉高錳酸鉀蒸餾,本節(jié)首頁(yè),退出本章,二、環(huán)境條件,本節(jié)首頁(yè),退出本章,三、人員要求, 學(xué)歷 專業(yè)知識(shí)背景（background） 敬業(yè)能力 操作能力 勤快、不恥下問(wèn),本節(jié)首頁(yè),退出本章,四、管理制度, 樣品管理 試劑管理 儀器管理 數(shù)據(jù)管理 檢驗(yàn)報(bào)告管理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第二節(jié) 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),Standard s

34、ample Standard material Standard reference material Certified reference material,本節(jié)首頁(yè),退出本章,一、分 級(jí),一級(jí)：均勻性、穩(wěn)定性、朔源性 二級(jí)：滿足一般測(cè)量需要（日常） 共同點(diǎn)：有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),本節(jié)首頁(yè),退出本章,一、分 級(jí),農(nóng)藥純品：反映化合物特性的高純度物質(zhì)。 與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的關(guān)系：農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的原材料。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,二、基本要求, 含量 物力常數(shù) 溶液 GC/HPLC鑒定,本節(jié)首頁(yè),退出本章,三、標(biāo) 簽,名 稱：BHC 中文名：六六六 用 途：殺蟲劑 別 名：Hexakor 分子量：288 分子式：,

35、本節(jié)首頁(yè),退出本章,第三節(jié) 分析方法的可靠性的確認(rèn),選擇檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的原則,國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 地方標(biāo)準(zhǔn) 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn),本節(jié)首頁(yè),退出本章,一、方法的靈敏度,靈敏度：?jiǎn)挝粷舛龋ㄙ|(zhì)量）/相應(yīng)量 最小檢出量：3空白的背景信號(hào) 最低測(cè)定濃度： 10空白的背景信號(hào) 未檢出：LOD,本節(jié)首頁(yè),退出本章,準(zhǔn)確度：測(cè)定值與真值（假定）之間符合程度的度量,二、方法的準(zhǔn)確度,本節(jié)首頁(yè),退出本章,回收率實(shí)驗(yàn),準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)方法,100,1ug/g,？,本節(jié)首頁(yè),退出本章,精密度：測(cè)定值之間的一致程度,三、方法的精密度,平行性 重復(fù)性 再現(xiàn)性,準(zhǔn)確度和精密度,1.準(zhǔn)確度和精密度分析結(jié)果的衡量指標(biāo)。 ( 1) 準(zhǔn)確度分析結(jié)果與真

36、實(shí)值的接近程度 準(zhǔn)確度的高低用誤差的大小來(lái)衡量； 誤差一般用絕對(duì)誤差和相對(duì)誤差來(lái)表示。,(2) 精密度幾次平衡測(cè)定結(jié)果相互接近程度 精密度的高低用偏差來(lái)衡量， 偏差是指?jìng)€(gè)別測(cè)定值與平均值之間的差值。,(3) 兩者的關(guān)系 精密度是保證準(zhǔn)確度的先決條件； 精密度高不一定準(zhǔn)確度高； 兩者的差別主要是由于系統(tǒng)誤差的存在。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第四節(jié) 農(nóng)殘分析質(zhì)量控制,1、接受日期和有效日期 2、污染和干擾 3、前處理過(guò)程中的損失 4、回收率測(cè)定和校準(zhǔn),本節(jié)首頁(yè),退出本章,第五節(jié) 結(jié)果的表達(dá)和數(shù)據(jù)處理, = 3.1415926.,？,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、結(jié)果的記錄和取舍,(1) 有效數(shù)據(jù) (2)有效

37、數(shù)據(jù)運(yùn)用法則 記錄測(cè)量數(shù)字時(shí)： 有效數(shù)位確定后： 當(dāng)被舍棄的第一位等于5時(shí)： 當(dāng)?shù)谝晃挥行?shù)字時(shí) 表示測(cè)定結(jié)果的精確度時(shí)：,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、真值和平均值, 算數(shù)平均值 均方根平均值 幾何平均值 中位值 加權(quán)平均值,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、異常數(shù)據(jù)的取舍, 4法 |可疑值 不包括可疑值在內(nèi)的平均值|4 2.5法 |可疑值 不包括可疑值在內(nèi)的平均值|2.5 Q檢驗(yàn)法,本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、測(cè)定結(jié)果的整理, 一般處理 可靠性區(qū)間的計(jì)算 界值判斷結(jié)果 平均值的實(shí)驗(yàn),本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、測(cè)定結(jié)果的整理,GC/HPLC中各種參數(shù)的設(shè)置方法，如色譜柱、柱溫、進(jìn)樣方式以及檢測(cè)器的選擇等。 GC/

38、HPLC的結(jié)構(gòu)；進(jìn)樣系統(tǒng)；儀器的維護(hù)及故障診斷技術(shù)等。 重點(diǎn)掌握： 最佳分析條件的設(shè)置，常見異常峰的優(yōu)化。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第五章 農(nóng)藥殘留測(cè)定方法,第一節(jié) 氣相色譜儀 一、氣路系統(tǒng) 二、進(jìn)樣系統(tǒng) 三、分離系統(tǒng) 四、檢測(cè)系統(tǒng) 五、檢測(cè)條件的優(yōu)化,本節(jié)首頁(yè),退出本章,第二節(jié) 液相色譜儀 一、流動(dòng)相系統(tǒng) 二、進(jìn)樣系統(tǒng) 三、分離系統(tǒng) 四、檢測(cè)系統(tǒng) 五、檢測(cè)條件的優(yōu)化,第一節(jié) 氣相色譜儀,一、氣路系統(tǒng),（一）、氣源與載氣種類,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、 惰性（不與樣品或固定相反應(yīng)） 2、 容易得到并易純化 3、 滿足檢測(cè)器要求 常用載氣：N2 H2 He Ar 輔助氣：氧氣或空氣,（二）、氣體的凈化

39、,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、氣體不純的不良影響 樣品失真或消失 柱失效 對(duì)固定液保留特性的影響 對(duì)檢測(cè)器的影響,（二）、氣體的凈化,本節(jié)首頁(yè),退出本章,氧氣捕集器：氧氣破壞色譜柱，降低ECD 檢測(cè)器的功能。,（三）、氣體管路,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 專用銅管或不銹鋼管。 塑料管會(huì)滲透O2和其它污染物。 管子使用前先用溶劑沖洗，載氣吹干。 每用完3瓶氣，應(yīng)更換過(guò)濾器。 每隔一定時(shí)間，對(duì)所有外加接頭檢漏。,二、樣品的進(jìn)樣系統(tǒng) 與進(jìn)樣技術(shù),本節(jié)首頁(yè),退出本章,作用: 使樣品以一種可重復(fù)可再現(xiàn)的方式契入到氣相色譜柱中。 被引入的樣品應(yīng)具有代表性，除特殊要求外樣品引入過(guò)程不應(yīng)發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng)。,（一）、進(jìn)樣

40、方式,本節(jié)首頁(yè),退出本章,針進(jìn)樣： 手動(dòng)進(jìn)樣；自動(dòng)進(jìn)樣 閥進(jìn)樣：氣體進(jìn)樣閥；液體進(jìn)樣閥 其它進(jìn)樣裝置：吹掃捕集；頂空,1、 針進(jìn)樣,應(yīng)使樣品象一個(gè)塞子一樣地被進(jìn)樣。 為了得到重復(fù)性好的，尖銳的峰形，進(jìn)樣動(dòng)作應(yīng)迅速且穩(wěn)定。,2、針進(jìn)樣技術(shù)比較,3、 進(jìn)樣墊,注：以島津公司產(chǎn)品為例,色譜柱進(jìn)樣墊通用技術(shù),使用輕觸點(diǎn) - 不能過(guò)緊。 保持清潔。 避免污染 - 指紋、油脂等。 檢查使用的密封墊是否有裂紋、碎片、或其它的損壞。,進(jìn)樣墊相關(guān)問(wèn)題,應(yīng)在推薦溫度范圍內(nèi)避免： 泄漏、降解、樣品丟失、出現(xiàn)鬼峰 減少或者避免鬼峰的出現(xiàn)： 進(jìn)樣口帶有隔墊吹掃功能。 應(yīng)使用耐高溫的相應(yīng)進(jìn)樣墊。,作用：可重復(fù)，可再現(xiàn)的方

41、式契入色譜柱中。被引入的樣品應(yīng)具有代表性，除特殊要求外樣品引入過(guò)程不應(yīng)發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng)。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（二）、進(jìn)樣口類型,進(jìn)樣口類型氣路控制,本節(jié)首頁(yè),退出本章,分流/不分流進(jìn)樣口 EPC 與 non-EPC 隔墊吹掃填充進(jìn)樣口 EPC 與 non-EPC 冷柱頭進(jìn)樣口 只有EPC 程序升溫汽化進(jìn)樣口 只有EPC 揮發(fā)進(jìn)樣口 只有EPC,分流/不分流進(jìn)樣口,本節(jié)首頁(yè),退出本章,分流方式是特為毛細(xì)管柱GC設(shè)計(jì)的樣品引入方式,1、分流進(jìn)樣 進(jìn)樣前,防止樣品 歧視現(xiàn)象, 進(jìn)樣時(shí)刻, 樣品與載氣混合,為了保證分流比的概念真實(shí)有效，樣品（溶劑+分析物）必須與載氣充分混合，形成一個(gè)均勻的混合物。

42、這一混合物的一小部分將會(huì)從進(jìn)樣口的底部進(jìn)入色譜柱，而大部分的混合物則會(huì)從分流出口流出。, 襯管過(guò)載,如果進(jìn)樣量過(guò)大，溶劑會(huì)膨脹為很大的體積，致使進(jìn)樣口襯管過(guò)載。 其結(jié)果必將導(dǎo)致樣品從吹掃出口流出而造成樣品損失，同時(shí)也會(huì)造成載氣輸入管路的污染。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、襯管過(guò)載的后果,其結(jié)果必將導(dǎo)致樣品從吹掃出口流出而造成樣品損失，同時(shí)也會(huì)造成載氣輸入管路的污染。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、溶劑膨脹計(jì)算公式,微升=22400ABC A=密度/分子量 B=15/(15+柱前壓psi） C=（進(jìn)樣口溫度+273）/273,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、溶劑膨脹計(jì)算例子,4、常用溶劑的膨脹率,進(jìn)樣口溫度為25

43、0，柱前壓為13psi,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 分流比計(jì)算,分流出口流量 = ？, 總流量,本節(jié)首頁(yè),退出本章,隔墊：13ml或3 6ml 分流流量：分流流量/柱流量 如100：1或50：1 柱流量：受柱前壓控制，流量與壓力在 一定范圍內(nèi)呈正相關(guān)關(guān)系, 如何實(shí)現(xiàn)分流,2、不分流進(jìn)樣系統(tǒng), 進(jìn)樣前 進(jìn)樣閥關(guān)閉,關(guān)閉分流閥使氣流不能從襯管外逃出。由于柱前壓并未改變，所以柱流量將會(huì)保持恒定。原來(lái)吹過(guò)襯管的氣流現(xiàn)在必為通過(guò)隔墊吹掃管路流出。, 進(jìn)樣時(shí)刻 分流閥關(guān)閉,樣品會(huì)擴(kuò)展到進(jìn)樣口的底部。使用250uL的襯管以及柱流量，很容易使襯管過(guò)載，特別是當(dāng)進(jìn)樣體積大于1uL且使用非烴類溶劑時(shí)。, 樣品的汽化 分

44、流閥關(guān)閉,由于樣品組分與溶劑的擴(kuò)散率的不同（更小體積/低分子量），組分在襯管中分層。與載氣混合成為低臨界狀態(tài)，這是因?yàn)楸４鏁r(shí)間長(zhǎng)且?guī)缀跛械臉悠范冀?jīng)過(guò)襯管而進(jìn)入到色譜柱中了。通過(guò)使用某一種“捕集”技術(shù)可將樣品聚集在柱頭。, 樣品的注入 分流閥關(guān)閉,到此被分析物轉(zhuǎn)移入柱已經(jīng)完成。仍有一些溶劑留在襯管之中。如果依然保持分流閥關(guān)閉，則余下的所有溶劑都轉(zhuǎn)移入柱子中，那么溶劑色譜峰將會(huì)嚴(yán)重拖尾。, 樣品的注入 分流閥關(guān)閉,將分流閥從關(guān)閉位置轉(zhuǎn)為開啟狀態(tài)以將留在襯管中的剩余溶劑吹出襯管。這個(gè)過(guò)程將會(huì)有效地減小溶劑峰的拖尾，以保證先流出峰的定量更加真實(shí)可信。, 樣品注完 分流閥開啟,襯管的體積太小以及通過(guò)襯

45、管的流量太低可能會(huì)導(dǎo)致使用非烴類溶劑的樣品進(jìn)樣量過(guò)大。 對(duì)于不分流進(jìn)樣來(lái)說(shuō)，進(jìn)樣量過(guò)大會(huì)造成定量結(jié)果的準(zhǔn)確性與精確性雙方面的明顯誤差。, 樣品過(guò)載 分流閥關(guān)閉, 溶劑效應(yīng)：設(shè)定柱溫的初始溫度低于溶劑的沸點(diǎn)，致使溶劑在柱關(guān)上冷凝，相當(dāng)于膨脹了固定相并捕集分析物。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,樣品進(jìn)入色譜柱后，減少分流出口的載氣流量以節(jié)約載氣。 柱前壓和柱流速仍保持不變，只有分流出口的流量減少?？捎糜诜至骱筒环至鞣绞?。 節(jié)省載氣啟動(dòng)的時(shí)間應(yīng)選在樣品進(jìn)入色譜柱后。,（三）、節(jié)省載氣裝置,本節(jié)首頁(yè),退出本章,尾 吹,毛細(xì)管柱內(nèi)流動(dòng)相流速低，流量小，組分會(huì)因柱后死體積突然增加而發(fā)生嚴(yán)重的縱向擴(kuò)散，從而導(dǎo)致峰形展

46、寬，有可能使在柱中以分離的組分在柱后再次重疊，影響分離。 也可在使用FID時(shí)受阻于引入的H2壓力而出柱困難。 增加尾吹氣將改善這一狀況。,（四）、分流平板,此部件須非常清潔,1、在溶劑中超聲處理 - 常用樣品或清洗劑 2、使用金屬紗布擦磨清潔 - 高光潔度可提高其功效- 不要干擦 3、用溶劑清洗 - 避開氯化溶劑 - 先惰性洗滌 - 甲苯 - 再用醇類清洗 - 甲醇,（五）、毛細(xì)管襯管,未去活性的襯管的清洗 1) 移去玻璃毛 2) 在溶劑或酸液中超聲振蕩 3) 清洗且干燥 4) 更換去活性的玻璃毛 5) 去活性 - 硅烷化 6) 干燥 7) 精心維護(hù)襯管的內(nèi)表面避免劃傷,毛細(xì)管襯管結(jié)構(gòu)圖,本節(jié)

47、首頁(yè),退出本章,（六）、進(jìn)樣口系統(tǒng)中注意點(diǎn),1、 進(jìn)樣口常見問(wèn)題 非代表性樣品、堵塞、溫度不正確、污染、泄漏 2、 操作條件的選擇 1) 汽化室溫度的選擇 2) 進(jìn)樣墊的材料與處理 3) 進(jìn)樣量,本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、進(jìn)樣口的日常維護(hù),更換隔墊 清洗或更換進(jìn)樣針 進(jìn)行泄漏測(cè)試和維修 清洗或更換襯管/內(nèi)插件 清洗或更換分流平板和金屬墊片(SSI),本節(jié)首頁(yè),退出本章,4、自動(dòng)進(jìn)樣器日常維護(hù),清洗/更換進(jìn)樣針 清洗掉針引導(dǎo)器和附近表面上的灰塵和污染物 確保樣品盤安裝螺絲固定好了 保證所有的電纜線都連接良好,三、分離系統(tǒng),分離的過(guò)程示意圖,（一）、色譜柱的類型,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、色譜柱類型的

48、比較,本節(jié)首頁(yè),退出本章,a、柱效和柱長(zhǎng)是 10倍 b、理論塔板數(shù)是填充柱的 100倍 c、柱負(fù)荷量低于填充柱, 柱的性能,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 工作壓力,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 常用的柱選擇方法,a、欲分離樣品 b、首先試用手邊現(xiàn)有的柱子 c、向同事請(qǐng)教 d、從文獻(xiàn)中查到相近應(yīng)用的方法 e、如果不是太清楚，先使用一個(gè)非 極性柱,如 HP-1或 HP-5,2、柱分離指標(biāo),柱 效: 色譜柱形成尖銳峰的能力 分離度: 色譜柱將兩個(gè)峰彼此分開的 能力,（1）、如何提高柱效,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 使用內(nèi)徑更小的柱子。 減小進(jìn)樣量。 選用更長(zhǎng)的柱子。 使用程序升溫。,（2）分離度計(jì)算及提高方法,本節(jié)首頁(yè),

49、退出本章,3、色譜柱概論, 柱子切勿劃傷。高溫加熱從劃痕處斷裂。 長(zhǎng)期不用堵上柱子兩端不被污染。 * 當(dāng)使用毛細(xì)管柱時(shí)，一定注意保護(hù)眼睛。,（1）、保 存,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（2）、色譜柱老化,目的：預(yù)先老化以除去柱中殘留的溶劑。, 老化對(duì)象,- 新買的柱子。 - 長(zhǎng)期沒用過(guò)的柱子。 - 操作條件改變時(shí)。 - 分析對(duì)象改變時(shí)。,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 毛細(xì)管柱老化原則,- 溫度足夠高以去除不揮發(fā)物質(zhì)。 - 溫度足夠低以保護(hù)柱子，防止柱流失。 - 老化溫度越低老化時(shí)間應(yīng)越長(zhǎng)。,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 毛細(xì)管柱老化方法,a、柱只接進(jìn)樣口，不接檢測(cè)器，把檢測(cè) 器口堵住,檢測(cè)器不在工作狀態(tài)。 b、并確證

50、有載氣通過(guò)柱子。 c、設(shè)定老化溫度、流量、時(shí)間。 d、可設(shè)爐溫程序升溫，以使較好老化。 e、需幾小時(shí)或幾十小時(shí)，不要通H2氣。,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 危害色譜柱的因素,a、不分流進(jìn)樣方式使柱前1-2米的固定相移位。 b、載氣或樣品質(zhì)量太差。 c、固定相容易被載氣中的氧氣所氧化。 d、分析高水分樣品時(shí)會(huì)縮短使用壽命。,（二）、柱溫設(shè)置,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、柱溫設(shè)置,（1）、恒溫操作,升溫速率設(shè)為“0”。 特點(diǎn)：峰展寬，保留時(shí)間延長(zhǎng),本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、 操作者的耐心（保留時(shí)間長(zhǎng)）。 2、 固定相的最低溫度極限。,A、最低操作溫度決定因素,本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、 固定相能承受的最高溫度。

51、 2、 樣品的穩(wěn)定性。 3、 第一流出組分的保留時(shí)間。,B、最高操作溫度決定因素,（2）、程序升溫,三階程序升溫,本節(jié)首頁(yè),退出本章,組分之間有較寬的沸點(diǎn)范圍 (100C) 。 減少分析時(shí)間并使峰變窄。 增加柱流失，引起基線漂移。, 程序升溫特點(diǎn),a、 升溫方式 b、 初始溫度 c、 終止溫度 d、 升溫速率 e、載氣流速,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 操作條件的選擇,本節(jié)首頁(yè),退出本章, 程序升溫與恒溫操作的比較,正常運(yùn)行 空白運(yùn)行 柱補(bǔ)償運(yùn)行, 柱補(bǔ)償,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（三）、柱 修 復(fù),1、把距進(jìn)樣口末端的柱子割去一到二米。 2、將柱子再老化過(guò)夜。 3、淋洗柱子。這是一個(gè)比較極端的手段。一般

52、，只有50%的柱可以通過(guò)淋洗來(lái)修復(fù)。,固定相（交聯(lián)的硅氧相）允許我們使用溶劑淋洗柱來(lái)溶掉或移走柱上的沉積物，這樣可以避免峰拖尾。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,淋洗前后的比較,（四）、柱 的安裝,（五）、柱 的安裝,四、檢測(cè)系統(tǒng),本節(jié)首頁(yè),退出本章,已學(xué)過(guò)的 檢 測(cè) 器,（一）、檢測(cè)器評(píng)價(jià)指標(biāo),本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、噪 聲 2、漂 移 3、靈 敏 度 4、線 性 范 圍 與 動(dòng) 態(tài) 范 圍 5、最 小 檢 測(cè) 量,（一）、檢測(cè)器評(píng)價(jià)指標(biāo),本節(jié)首頁(yè),退出本章,1、噪 聲 (Noise；N) ：儀器、其他操作條件使基線在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生起伏的信號(hào) 2、漂 移 (Drift；d) ：使基線在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)原點(diǎn)產(chǎn)生

53、的偏離。,3、靈 敏 度（ 應(yīng) 答 值）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,量變化時(shí)，該物質(zhì)響應(yīng)值的變化率。,4、線 性 范 圍,本節(jié)首頁(yè),退出本章,被測(cè)物質(zhì)的量與檢測(cè)器的信號(hào)成線形關(guān)系的范圍。,本節(jié)首頁(yè),退出本章,(二)、FID （Flame Ionization Detector),當(dāng)樣品和載氣進(jìn)入火焰（2100）時(shí)，發(fā)生化學(xué)電離（等碳效應(yīng)）。,1、工作原理,2、對(duì)FID沒有響應(yīng)的物質(zhì),本節(jié)首頁(yè),退出本章,3、響應(yīng)規(guī)律,4、檢測(cè)器組件,5、常見問(wèn)題,檢測(cè)器關(guān)閉：火焰無(wú)法點(diǎn)燃；檢查是否凝聚,(1)不出峰,檢測(cè)器短路：檢查檢測(cè)器溫度,(2)不出峰,火焰熄滅：檢查流量；關(guān)閉輔助；氣重新點(diǎn)火,(3)進(jìn)樣初期出峰

54、,檢測(cè)器臟： 清洗收集極、噴嘴,(4)出雜峰,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（三）、 NPD （Nitrogen-Phosphorus Detector）,銣鹽珠。氫氣/空氣較低， 碳?xì)浠衔餆o(wú)法電離，銣珠表面的堿鹽離子促進(jìn)有機(jī)氮或有機(jī)磷化合物的電離。,FID,NPD,本節(jié)首頁(yè),退出本章,工作原理：富氫火焰中燃燒時(shí)，P，S被激發(fā)而發(fā)射特征波長(zhǎng)的光譜。 1、S化合物：藍(lán)紫色光（394nm）。 2、P化合物：綠色光（526nm）,（四）、FPD （Flame Photometric Detector),濾 光 片,光電倍增管,火焰噴嘴,1、火焰光度檢測(cè)器,本節(jié)首頁(yè),退出本章,2、氣 流 比,本節(jié)首頁(yè),退出本

55、章,（五）、ECD （Electron Capture Detector),放射源使載氣電離，一定的極化電壓加在兩極上，由陽(yáng)極吸收電子，形成穩(wěn)定的基流。,1、原 理,本節(jié)首頁(yè),退出本章,電負(fù)性組分檢測(cè)器捕獲電子 釋放能量 E 電子數(shù)減小 基流下降 產(chǎn)生負(fù)信號(hào)。,1、原 理,1、原 理,2、ECD結(jié)構(gòu),（六）、檢測(cè)器比較（1）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（六）、檢測(cè)器比較（2）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（八）氣相色譜儀使用中的問(wèn)題,A.色譜柱是否與進(jìn)樣口和檢測(cè)器正確地連接 B.進(jìn)樣口是否漏 更換進(jìn)樣墊 檢查進(jìn)樣襯管是否損壞 C.柱是否與進(jìn)樣口連接？? D.FID點(diǎn)火了嗎？FID高壓靜電正常嗎？ E.柱中是

56、否有載氣,無(wú)峰或峰很小,本節(jié)首頁(yè),退出本章,五、使用中的問(wèn)題,（一）、基線不好的問(wèn)題,1.檢查氣源的純度 解決：更換氣源；加裝氣體凈化 2.檢查氣路系統(tǒng)是否被污染 解決：清洗被污染處,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（二）、基線漂移,正確地使用高純度的載氣 色譜柱老化 進(jìn)樣口和色譜柱的最高使用溫度不能超過(guò)該柱所規(guī)定的最高溫度極限,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（三）、基線位置突然變化,偏離或漂移是由于下列原因產(chǎn)生的 溫度；流速 檢查體系是否有漏 主要檢查進(jìn)樣口部分 前次色譜過(guò)程中的殘余的低揮發(fā)性流出物,拖尾因子,拖尾因子（1）,拖尾因子 1.2,拖尾,前伸峰,拖尾因子 0.9,拖尾因子（2）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（

57、四）、峰型不好（拖尾）,進(jìn)樣口或柱溫太低試；程序升溫 柱過(guò)載：減少進(jìn)樣量或?qū)悠废♂?0倍 試一下較厚液膜的其他色譜柱 前伸峰和拖尾峰均說(shuō)明是非線形的分配即色譜柱與樣品不匹配,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（五）、峰型不好,減少進(jìn)樣量（柱過(guò)載） 小體積進(jìn)樣 ；增加分流比 可能是幾個(gè)未分離的色譜峰 將柱溫降低20再進(jìn)樣,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（六）、峰型很差,合并的峰（未分離的峰） 將柱溫降低20-30 將進(jìn)樣口溫度增加20-30 檢查樣品與溶劑的選擇是否正確,峰頂分叉（雙肩峰）,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（七）、附加峰（1）,進(jìn)樣墊流失 進(jìn)樣口污染殘 留在進(jìn)樣口或襯管中的物質(zhì) 載氣不純 柱頭污染,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（七）、附加峰（2）,1、樣品在進(jìn)樣口停留的時(shí)間太長(zhǎng) 2、樣品組分穩(wěn)定性差 3、進(jìn)樣口溫度過(guò)熱，可以導(dǎo)致樣品組分的降解,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（八）、丟失色譜峰,進(jìn)樣口溫度太低 高沸點(diǎn)的化合物不能很快地氣化 進(jìn)樣口溫度太高 許多揮發(fā)性的組分在進(jìn)樣口降解 進(jìn)樣口被污染,本節(jié)首頁(yè),退出本章,（九）、色譜柱安裝位置可能引起的問(wèn)題,色譜柱到檢測(cè)