薄層層析法具體操作注意事項(xiàng)

1、薄層層析法具體操作注意事項(xiàng)鋪板鋪板用的勻漿不宜過(guò)稠或過(guò)稀：過(guò)稠，板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋；過(guò)稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：23，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過(guò)拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來(lái)判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄，點(diǎn)樣易過(guò)載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開(kāi)劑的配制和展開(kāi)系統(tǒng)的飽和。點(diǎn)樣盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖分離度好，顏

2、色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無(wú)水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。展開(kāi)劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開(kāi)劑。絕對(duì)不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑?；旌喜痪鶆蚝蜎](méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì)造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。展開(kāi)系統(tǒng)的飽和

3、一般使用的是雙槽的展開(kāi)缸，一槽用來(lái)放展開(kāi)劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開(kāi)的板放入兩槽間的平臺(tái)，斜架著，蓋上展開(kāi)缸的蓋子。讓展開(kāi)劑的蒸氣充滿(mǎn)展開(kāi)缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開(kāi)時(shí)難免要打開(kāi)蓋子把薄層板放入展開(kāi)劑中，不過(guò)對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。 溫濕度的控制溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過(guò)在另一展開(kāi)槽放置相應(yīng)濃度的

4、硫酸。顯色噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器常說(shuō)的過(guò)柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相 的吸附柱。柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。 壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所 以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長(zhǎng)，比如天然化合物的分 離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。 減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺(jué)能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過(guò) 硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得 不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過(guò) 減壓柱，對(duì)它有比

5、較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò)減壓的念 頭了。 加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類(lèi)似，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力 的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚(yú)缸供氣的就行）。特別是在容易分解 的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。個(gè)人覺(jué)得 加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是粗長(zhǎng)的最好。 柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪?樣品層比較?。?，這樣相對(duì)的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二 厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖

6、了。而如果樣品層只 有0.5厘米，那么各櫸志捅冉先菀椎玫酵耆擲肓恕比徊捎么執(zhí)蟮鬧右冉隙?的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說(shuō)， 不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）。 現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1：510，書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的3040倍，具體的選 擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分rf在0.20.4，雜質(zhì) 相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm20cm的柱子 ）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也 可以減小淋洗劑的極性等等。關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱，適用于對(duì)氧

7、，水敏感，易分解的產(chǎn)品。 可以濕柱，也可以干柱。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)槿軇┖凸?膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過(guò)。也 是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是 加壓、常壓、減壓，隨需而定。因?yàn)槭莝chlenk操作，所以點(diǎn)板是個(gè)問(wèn)題，如果樣品是顯 色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無(wú)色，只好準(zhǔn)備幾十 個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過(guò)幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。像我以前過(guò)一根無(wú)水無(wú)氧柱，需要六個(gè)schlenk，現(xiàn)在只一個(gè)就能把所要的全收集到。 無(wú)水無(wú)

8、氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因?yàn)楣枘z中有大量的羥基裸露在外， 很容易是樣品分解，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中 性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。 聽(tīng)說(shuō)有個(gè)方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一 照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒(méi)有驗(yàn)證過(guò)。哪位做過(guò)可以提出來(lái)大家參詳參詳。 關(guān)于濕法、干法上樣。 濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好 ，不然溶劑就成了淋洗劑了。 很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，這一 般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣

9、品的吸附飽和，而樣品本身又是比較 好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶 那就不管它了，直接過(guò)就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。 有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF,DMSO等，會(huì)隨著溶劑一起走， 顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是1： 1，我覺(jué)得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣 品沒(méi)有吸附在硅膠上）。溶劑的選擇。 當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫(xiě)用 正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，

10、不過(guò)因 為極性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別 讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸 附是一個(gè)放熱過(guò)程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些 。甲醇，據(jù)說(shuō)能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話(huà)要留神，應(yīng)該經(jīng)過(guò)后 繼處理，比如說(shuō)重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。 由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑 料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看見(jiàn)有色 的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)

11、格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然過(guò) 原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。 另外溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn) 是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和 乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋 洗時(shí)比較合適，正好極性越來(lái)越大了。在過(guò)完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因?yàn)?在減壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái)，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和 你下面要過(guò)的樣品有反應(yīng)那就慘了。關(guān)于操作問(wèn)題。 1 裝柱。 柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用

12、四氟節(jié)門(mén)的。 干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊 密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě) 的都是不能見(jiàn)到氣泡，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響，一加壓氣泡就 全下來(lái)了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是 開(kāi)裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！ 2 加樣。 用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開(kāi)，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再 加少量的低極性溶劑，然后再打開(kāi)活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。 加入淋洗劑，一開(kāi)始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有

13、一段距離（24cm就夠了） ，再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。 3 淋洗劑的選擇。 感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf0.20.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開(kāi)，過(guò) 柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi)，因?yàn)橹邮且?個(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。4 樣品的收集。 用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比 較強(qiáng)的話(huà)，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以 采用氧化鋁作固定相。 另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就 收到了三個(gè)樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。 5 最后的處理柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以如果想送 分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本就沒(méi) 了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。 另外，再過(guò)柱的時(shí)候，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡