GB 5009.240-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中伏馬毒素的測定

016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替252282010糧油檢驗(yàn) 玉米及其制品中伏馬毒素含量測定 免疫親和柱凈化高效液相色譜法和熒光光度法、19582007進(jìn)出口食品中伏馬毒素聯(lián)免疫吸附法、15722005進(jìn)出口糧谷中伏馬毒素檢驗(yàn)方法 高效液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)將以上標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了整合,主要修訂如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中伏馬毒素的測定”;伏馬毒素種類增加為伏馬毒素2、增加了免疫親和柱凈化增加了液相色譜取消熒光光度法;改變了樣品提取溶液;改變了免疫親和柱凈化0161 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中伏馬毒素的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了玉米及其制品中伏馬毒素馬毒素馬毒素下簡寫為測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法為柱后衍生液相色譜法,第二法為液相色譜三法為柱前衍生液相色譜法,適用于玉米及其制品中伏馬毒素的測定。第一法 免疫親和柱凈化理樣品用乙腈稀釋后過免疫親和柱凈化,去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì)。經(jīng)高效液相色譜分離后柱后鄰苯二甲醛衍生,熒光檢測,外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法使用的試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。醇(色譜純。腈(色譜純。酸(氧化鈉(化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(砂(02苯二甲醛(8溫58酸水溶液(:吸取1入到999合均勻。腈0+50):分別量取500合均勻。腈0+80):分別量取200合均勻。0162 醇8+2):吸取2入到98合均勻。氧化鈉溶液(1):于100合均勻。酸鹽緩沖液(980水稀釋至1000合均勻。溫:吸取1入磷酸鹽緩沖液(稀釋至1000合均勻。砂溶液(,于980水稀釋至1000合均勻。生溶液:于20硼砂溶液(,釋至500入2勻,裝入棕色瓶中,現(xiàn)用現(xiàn)配。馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)儲備溶液(分別準(zhǔn)確稱取小燒杯中,用乙腈)溶解,并轉(zhuǎn)移至100容至刻度。此溶液密封后避光存。有效期6個(gè)月。合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取乙腈)稀釋至刻度,得到稀釋10倍,得到溶液密封后避光4保存,有效期6個(gè)月。合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,用乙腈)稀釋,配制成0ng/60ng/40ng/20ng/00ng/0ng/0ng/20ng/60ng/00ng/ 效液相色譜儀,帶熒光檢測器。后衍生系統(tǒng)。平:質(zhì)器。蕩器。吹儀。心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/疫親和柱(柱容量50000%)(柱容量及柱回收率驗(yàn)證方法參見附錄B)。注:對于每個(gè)批次的親和柱在使用前需進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)?？诪V膜:機(jī)型。5 品制備將固體樣品按四分法縮分至1部用谷物粉碎機(jī)磨碎并細(xì)至粒度小于10163 為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。玉米油樣品直接取2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。在制樣的操作過程中,應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。樣提取準(zhǔn)確稱取固體樣品5g(品于50入20),渦旋或振蕩提取20出后,在4000r/上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。玉米油樣品操作同固體樣品,提取液在下層。入47),混合均勻后過免疫親和柱,流速控制在1mL/mL/10別用1)洗脫免疫親和柱三次,收集洗脫液,55下氮吹至干,加入1)溶解殘?jiān)?。渦旋30s,集于進(jìn)樣瓶中,待測。注:由于不同廠商提供的免疫親和柱操作程序可能不同,實(shí)際操作時(shí),請參照廠商提供的操作說明和程序使用。器參考條件色譜柱:50m,或相當(dāng)者。檢測波長:激發(fā)波長335射波長440動相:A:甲酸水溶液(B:甲醇。梯度洗脫,洗脫程序見表1。流動相流速:生液流速:溫:40。反應(yīng)器溫度:40。進(jìn)樣量:50L。表1 流動相洗脫程序時(shí)間動相B%)按濃度從低到高依次注入高效液相色譜儀;待儀器條件穩(wěn)定后,以目標(biāo)物質(zhì)的濃度為橫坐標(biāo)(目標(biāo)物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)(對各個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行最小二乘線性擬合,標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按式(1)計(jì)算:0164 y=ax+b(1)式中:y目標(biāo)物質(zhì)的峰面積比;a回歸曲線的斜率;x目標(biāo)物質(zhì)的濃度;b回歸曲線的截距。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi),如果樣品含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,需稀釋后再測定。白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。6 分析結(jié)果的表述待測樣品中)計(jì)算:X=(2)式中:X待測樣品中位為微克每千克(g/待測物進(jìn)樣液中位為納克每毫升(ng/V定容體積,單位為毫升(f試液稀釋倍數(shù);m樣品的稱樣量,單位為克(g)。注:計(jì)算結(jié)果需扣除空白值,測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示,保留兩位有效數(shù)字。7 精密度樣品中伏馬毒素含量在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。8 其他當(dāng)稱樣量為5g/g/量限分別為50g/5g/5g/二法 液相色譜理樣品加入同位素內(nèi)標(biāo),乙腈稀釋后過免疫親和柱或強(qiáng)陰離子交換固相萃取柱凈化,去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì)。凈化液中的伏馬毒素經(jīng)過高效液相色譜分離,串聯(lián)質(zhì)譜檢測,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。0165 10 試劑和材料除非另有說明,本方法使用的試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。醇(色譜純。腈(色譜純。酸(化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(溫58酸水溶液(:吸取1于1合均勻。腈0+50):分別量取500合均勻。腈0+50):分別量取500合均勻。腈0+80):分別量取200合均勻。醇0+20):分別量取600合均勻。醇9+1):吸取1入到99合均勻。醇8+2):吸取2入到98合均勻。酸鹽緩沖液(980水稀釋至1000合均勻。溫:吸取1入磷酸鹽緩沖液(稀釋至1000合均勻。34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。伏馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。伏馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。32、334純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。13334純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。13334純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。注:在檢測中可以只使用13需要對被測定試樣基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn),評估和確定13使用基質(zhì)匹配校正曲線。準(zhǔn)儲備溶液(分別準(zhǔn)確稱取0166 杯中,用乙腈解,并轉(zhuǎn)移至100容至刻度。此溶液密封后避光存。有效期6個(gè)月。合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取乙腈釋至刻度,得到稀釋10倍,得到溶液密封后避光4保存。有效期6個(gè)月。合同位素標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取135g/130g/130g/1乙腈釋至刻度,3稀釋10倍,得到含133效期6個(gè)月。合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,用乙腈釋,加入混合同位素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(配制成0ng/60ng/40ng/20ng/00ng/0ng/0ng/20ng/60ng/00ng/個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中含有13311 效液相色譜有電噴霧離子源。平:質(zhì)器。蕩器。吹儀。心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/陰離子交換固相萃取柱(硅膠基,600疫親和柱(柱容量50000%)。(柱容量及柱回收率驗(yàn)證方法參見附錄B)注:對于每個(gè)批次的親和柱在使用前需進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn)?？诪V膜:機(jī)型。12 品制備將固體樣品按四分法縮分至1部用谷物粉碎機(jī)磨碎并細(xì)至粒度小于1勻分成2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。玉米油樣品直接取2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。在制樣的操作過程中,應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。樣提取準(zhǔn)確稱取固體樣品5g(品于50入混合同位素標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(00L,加入20渦旋或振蕩提取20出后,在4000r/上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。玉米油樣品操作同固體樣品,提取液在下層。0167 入47混合均勻后過免疫親和柱,流速控制在1mL/mL/10洗免疫親和柱,分別用1脫免疫親和柱三次,收集洗脫液,55下氮吹至干,加入1解殘?jiān)?。渦旋30s,集于進(jìn)樣瓶中,待測。注:由于不同廠商提供的免疫親和柱操作程序可能不同,實(shí)際操作時(shí),請參照廠商提供的操作說明和程序使用。陰離子交換固相萃取柱凈化取3入8混合均勻后過強(qiáng)陰離子交換固相萃取柱(使用前按要求活化),分別用8310脫,55下氮吹至干,加入1解殘?jiān)u旋30s,集于進(jìn)樣瓶中,待測。相色譜條件色譜柱:00相當(dāng)者。流動相:A:甲酸水溶液(;B:乙腈0+50)。梯度洗脫,梯度見表2。流速:溫:30。進(jìn)樣量:10L。表2 流動相梯度洗脫程序時(shí)間動相B%譜參數(shù)離子化模式:電噴霧電離正離子模式(。質(zhì)譜掃描方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(監(jiān)測離子對信息見表3,其他儀器參考條件見附錄C。0168 表3 性判定用液相色譜相同試驗(yàn)條件下,樣品中應(yīng)呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰,被測物質(zhì)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)物質(zhì)的質(zhì)量色譜峰保留時(shí)間一致;樣品色譜圖中所選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子相對豐度比的偏差不超過表4規(guī)定范圍,則可以判斷樣品中存在對應(yīng)的目標(biāo)物質(zhì)。表4 定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度(k)k50%50%k20%20%k10%k10%允許的最大偏差20%25%30%50%濃度從低到高依次注入液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀;待儀器條件穩(wěn)定后,以目標(biāo)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)的濃度比為橫坐標(biāo)(目標(biāo)物質(zhì)和內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)(對各個(gè)數(shù)值點(diǎn)進(jìn)行最小二乘線性擬合,標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按式(3)計(jì)算:y=ax+b(3)式中:y目標(biāo)物質(zhì)/內(nèi)標(biāo)的峰面積比;a回歸曲線的斜率;x目標(biāo)物質(zhì)/內(nèi)標(biāo)的濃度比;b回歸曲線的截距。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi),如果含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,則重新取樣,增加相應(yīng)內(nèi)標(biāo)添加量,使內(nèi)標(biāo)濃度與待測液濃度相匹配,然后稀釋到適當(dāng)濃度后分析。白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。0169 13 分析結(jié)果的表述本方法采用內(nèi)標(biāo)法定量。含量按式(4)計(jì)算:X=ciAsm(4)式中:X樣品中待測組分的含量,單位為微克每千克(g/c標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的濃度,單位為納克每毫升(ng/測定液中待測組分的濃度,單位為納克每毫升(ng/A測定液中待測組分的峰面積;標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積;V定容體積,單位為毫升(標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度,單位為納克每毫升(ng/測定液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積;標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測組分的峰面積;m樣品稱樣量,單位為克(g)。注:計(jì)算結(jié)果需扣除空白值,測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示,保留兩位有效數(shù)字。14 精密度樣品中伏馬毒素含量在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。15 其他當(dāng)稱樣量為5g/g/量限分別為20g/0g/0g/三法 免疫親和層析凈化理樣品用乙腈稀釋后過免疫親和柱凈化,去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì)。凈化液中的伏馬毒素經(jīng)過光檢測,外標(biāo)法定量。17 試劑和材料除非另有說明,本方法使用的試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。醇(色譜純。01610 腈(色譜純。酸(氧化鈉(化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(砂(02苯二甲醛(8溫58酸銨,于980水稀釋至1000合均勻。腈0+50):分別量取500合均勻。腈0+80):分別量取200合均勻。醇8+2):吸取2入到98合均勻。氧化鈉(1)溶液:于100合均勻。酸鹽緩沖液(980后用水稀釋至1000合均勻。溫:吸取1入磷酸鹽緩沖液(稀釋至1000合均勻。砂溶液():水溶解并稀釋至100合均勻。生溶液:準(zhǔn)確稱取40于1硼砂溶液()(入2合均勻,裝入棕色瓶中,現(xiàn)用現(xiàn)配。準(zhǔn)品馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。伏馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。伏馬毒素34純度95%,或有證標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)儲備溶液(分別準(zhǔn)確稱取小燒杯中,用乙腈解,并轉(zhuǎn)移至100容至刻度。此溶液密封后避光存。有效期6個(gè)月。合標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取乙腈釋至刻度,得到稀釋10倍,得到溶液密封后避光4保存,有效期6個(gè)月。01611 合標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,用乙腈釋,配制成0ng/60ng/40ng/20ng/00ng/0ng/0ng/20ng/60ng/00ng/8 效液相色譜儀,帶熒光檢測器。平:質(zhì)器。蕩器。吹儀。心機(jī):轉(zhuǎn)速4000r/疫親和柱(柱容量50000%)(注:對于每個(gè)批次的親和柱在使用前需進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證?？诪V膜:機(jī)型。表。19 品制備將固體樣品按四分法縮分至1部用谷物粉碎機(jī)磨碎并細(xì)至粒度小于1勻分成2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。玉米油樣品直接取2份作為試樣,分別裝入潔凈的容器內(nèi),密封,標(biāo)識后置于4下避光保存。在制樣的操作過程中,應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生殘留物含量的變化。樣提取準(zhǔn)確稱取固體樣品5g(品于50入20渦旋或震蕩提取20出后,在4000r/上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中。玉米油樣品操作同固體樣品,提取液在下層。入47混合均勻后過免疫親和柱,流速控制在1mL/mL/10別用1脫免疫親和柱三次,收集洗脫液,55下氮吹至干,加入500解殘?jiān)?。渦旋30s,集于進(jìn)樣瓶中,待測。注:由于不同廠商提供的免疫親和柱操作程序可能不同,實(shí)際操作時(shí),請參照廠商提供的操作說明和程序使用。生取100入100渦旋混合30s,在201612 器參考條件色譜柱:50測波長:激發(fā)波長335射波長440動相:A:甲酸銨B:甲醇。梯度洗脫,洗脫程序見表5。流速:溫:40。進(jìn)樣量:50L。表5 流動相洗脫程序時(shí)間動相B%濃度從低到高依次注入高效液相色譜儀;待儀器條件穩(wěn)定后,以目標(biāo)物質(zhì)的濃度為橫坐標(biāo)(目標(biāo)物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)(對各個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)進(jìn)行最小二乘線性擬合,標(biāo)準(zhǔn)工作曲線:y=ax+b(5)式中:y目標(biāo)物質(zhì)的峰面積比;a回歸曲線的斜率;x目標(biāo)物質(zhì)的濃度;b回歸曲線的截距。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi),如果樣品含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍,需稀釋后再測定。白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。20 分析結(jié)果的