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文檔簡介
第 1 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 1 微生物學 檢驗 復習思考題 參考答案 緒論 1、 微生物的概念 、特點 ,微生物分哪三型八大類? 微生物 : 是存在于自然界的一大群體形微小、結(jié)構(gòu)簡單、肉眼直接看不見,必須藉助光學顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍,甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。包括細菌、病毒、真菌等三類。 特點: 個體微小,結(jié)構(gòu)簡單 比表面積大、吸收多、轉(zhuǎn)化快 代謝旺盛,繁殖迅速 種類繁多,分布廣泛 適應力強,容易變易 按結(jié)構(gòu)和組成不同,可分為三型八大類 非細胞型微生物:病毒 原核細胞型微生物(廣義的細菌):包括細 菌(狹義的細菌)、支原體、立克次體、衣原體、螺旋體及放線菌。 真核細胞型微生物:真菌 2、簡述臨床微生物學檢驗的主要任務有哪些? 研究感染性疾病的病原體特征 提供快速、準確的病原學診斷 指導臨床合理使用抗生素 監(jiān)控醫(yī)院感染 3、簡述臨床微生物學檢驗的目的和核心任務是什么? 臨床微生物學檢驗的目的是為感染性疾病提供微生物學診斷,以達到治療、控制和預防感染性疾病的擴散。 微生物學檢驗的核心任務 是快速、準確地進行病原學診斷和藥敏檢測,為臨床感染性疾病的診斷、治療提供依據(jù)。 4、簡述 臨床微 生物檢驗的原則。 確保臨床標本可靠; 全面了解機體正常菌群; 保證檢驗質(zhì)量、快速準確提供信息; 微生物學定性、定量和定位分析,并結(jié)合病情(三定一結(jié)合); 加強與臨床聯(lián)系。 5、填空題 根據(jù)微生物能耐受不同的溫度,人們常用 、 、 和 來第 2 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 2 保存菌種。細菌的 具有高度抗熱性,這常給消毒帶來困難。 生物學性狀基本相同的細菌群體構(gòu)成一個菌種,不同來源的同一菌種的細菌稱為該菌的不同 _;性狀相近關(guān)系密切的若干菌種構(gòu) 成 _;具有某種細菌典型特征的菌株稱該菌的 _。 普通冰箱( 4 C);低溫冰箱( C);干冰( C);液氮( C);芽胞 菌株、菌屬、標準菌株(典型菌株) 細菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu) 1、名詞解釋: 細菌 L 型; 中介體 ;質(zhì)粒; 芽胞 ; 莢膜腫脹試驗 細菌 L 型 : 是指細胞壁缺陷型的細菌。 1935 年 先在 究所發(fā)現(xiàn)而得名。 中介體:細菌細胞膜向細胞質(zhì)內(nèi)陷、折疊、卷曲形成的囊狀物,多見于 G+菌。 中介體參與細菌的分裂和能量的產(chǎn)生,有類似于 真核細菌紡錘絲與線粒體的作用。 質(zhì)粒 : 存在于細胞質(zhì)中的帶有遺傳信息、控制細菌的某些特定遺傳性狀、能夠自我復制的染色體以外的閉環(huán)雙鏈 或: 細菌的胞質(zhì) 芽胞: 某些細菌在一定的環(huán)境條件下,胞質(zhì)脫水濃縮,在菌體內(nèi)形成一個圓形或卵圓形小體,是細菌的休眠形式,即為芽胞。其抵抗力強,衡量滅菌效果時,常以殺死芽胞作為判斷指標。芽胞的大小、形態(tài)、位置等隨菌種而異,有助于細菌鑒別。 莢膜腫脹試驗: 某些細菌的莢膜與同型抗血清作用后增厚變寬,此試驗為莢膜腫脹試驗。可作為肺炎鏈球菌等細菌的血清學診斷。 2、 細菌的基本結(jié)構(gòu)與特殊結(jié)構(gòu)以及它們的主要功能。 G+菌與 G+菌與 胞壁差異的 臨床 意義 。 基本結(jié)構(gòu): 細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì) 細胞壁的功能 : 維持菌體的固有形態(tài),保護細菌抵抗外界低滲環(huán)境 (主要功能) ; 參與菌體內(nèi)外物質(zhì)交換; 帶有多種抗原,決定細菌的免疫原性。誘發(fā)機體產(chǎn)生免疫應答并與血清分型有關(guān)。 止某些抗生素的進入,成為細菌耐藥的機制之一。 某些 G+有表面蛋白、 與細菌染色性密切相關(guān)。 細胞膜 的功能: 物質(zhì)轉(zhuǎn)運; 生物合成; 細胞呼吸; 形成中介體,參與細菌分裂等 。 細胞質(zhì)的功能: 是細菌合成蛋白質(zhì)和核糖核酸的場所;是細菌進行新陳代謝的場所。 核質(zhì)的功能: 是細菌的遺傳物質(zhì),控制細菌的各種遺傳性狀 。 細菌的特殊結(jié)構(gòu): 莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢。 莢膜的功能: 抗吞噬作用 ; 黏附作用; 抗有害物質(zhì)的損傷; 具有抗原性。 莢膜 染色特點: 不易著色。常用墨汁負染法染色,可見菌體周圍一圈未著色的透明圈 ,也第 3 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 3 可用莢膜染色法。 鞭毛的功能: 是細菌的運動器官;有些鞭毛(如霍亂弧菌 、空腸 彎曲菌 )與細菌的致病性密切相關(guān); 具有抗原性, 可籍此鑒定細菌及對細菌分類 鞭毛的檢測方法: 電子顯微鏡觀察; 經(jīng)特殊染色(鞭毛染色)使鞭毛變粗后用光學顯微鏡觀察; 半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察生長情況間接判斷該菌有無鞭毛(這是鑒定細菌是否有動力最簡單的常用的方法)。 懸滴法或壓滴法觀察細菌的動力間接判斷該菌有無鞭毛; 菌毛的功能: 普通菌毛:細菌的黏附結(jié)構(gòu),與細菌的致病性有關(guān)。 性菌毛:介導接合,細菌的毒力、耐藥性等性狀可通過此方式傳遞 為某些噬菌體的受體。 芽孢的功能: 根 據(jù)芽孢形態(tài)、大小以及在菌體中的位置,有利于細菌的鑒別; 殺死芽孢為滅菌的可靠指標 (殺滅芽胞最可靠的方法是高壓蒸氣滅菌法); 可以成為某些傳染病潛在的傳染源:芽孢本身不致病,但當它發(fā)芽轉(zhuǎn)變?yōu)榉敝丑w后,可引起疾病。在人類,有四種常見的嚴重的傳染病是由能形成芽孢的細菌引起的 炭疽桿菌、肉毒梭菌、破傷風梭菌和產(chǎn)氣莢膜梭菌。 革蘭陽性菌與革蘭陰性菌細胞壁結(jié)構(gòu)比較如下: 細胞壁 革蘭陽性菌 革蘭陰性菌 組成 聚糖骨架、肽側(cè)鏈和肽交橋 聚糖骨架、肽側(cè)鏈 結(jié)構(gòu)類型 三維空間結(jié)構(gòu) 二維平面結(jié)構(gòu) 強度 較堅韌 較蔬松 厚度 厚, 20 80 薄, 10 15聚糖層數(shù) 多,可達 50 層 少, 1層 肽聚糖含量 多,占細胞干重 50 80% 少,占細胞干重 5 20% 磷壁酸 外膜 對溶菌酶、青霉素的敏感性 敏感 不敏感 革蘭染色性 紫色 紅色 G+菌與 胞壁差異的臨床意義: 體現(xiàn)在細菌染色性、抗原性、致病 性、對抗生素敏感性的不同 。 項目 革蘭陽性菌 革蘭陰性菌 與 細胞壁的關(guān)系 染色性 紫色 紅色 細胞壁對酒精的通透性 抗原性 主要為磷壁酸 主要為外膜 細胞壁的化學組成不同 毒性 無內(nèi)毒素 (以外毒素為主) 有內(nèi)毒素 內(nèi)毒素為陰性菌細胞壁成分 對青霉素的作用 有效 無效 作用部位 為肽聚糖 五肽交聯(lián)橋 對溶菌酶的作用 有效 無效 作用部位為肽聚糖 聚糖骨架 3、 簡述細菌 L 型的形成、主要生物學性狀及其臨床意義。 形成: 第 4 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 4 細菌細胞壁的肽聚糖結(jié)構(gòu)受到理化或生物因素(溶菌酶、溶葡萄球菌素、青霉素、膽汁、抗體、補體等)的直接破壞或合成受到抑制后形成。 G+菌原生質(zhì)外僅有細胞膜包住稱原生質(zhì)體, 主要生物學性狀: 高度多形性; 著色不勻,大多染成革蘭陰性; 培養(yǎng)條件要求高,必須在高滲低瓊脂含血清的培養(yǎng)基中生長; 生長緩慢( 2 7 天),菌落呈荷包蛋樣; 去除誘發(fā)因素后,有些 L 型可回復為原菌; 生化反應與原菌有明顯差異; 存在于細胞壁的抗原減弱或丟失; 臨床意義: 可引起慢性和反復發(fā)作的感染,如尿路感染、骨髓炎、心內(nèi)膜炎等,并常在使用作用于細胞壁的抗菌藥物治療過程中發(fā)生。 治療: 對作用于細胞壁的抗生素耐藥性,而對作用于核酸或蛋白質(zhì)合成的抗生素仍敏感。 4、填空題 細菌根據(jù)外形,主要有 細菌的基本結(jié)構(gòu)為 細菌的特殊結(jié)構(gòu)為 G+菌細胞壁的肽聚糖由 成。 細胞壁的肽聚糖由 的內(nèi)毒素為 細菌細胞質(zhì)中有 細菌莢膜的功能是 通菌毛的功能為 毛的功能為 細菌的測量單位為 革蘭染色的步驟為 中介體的功能為 能在光學顯微鏡下觀察到的細菌特殊結(jié)構(gòu)有 、 和 。 莢膜具有 、 作用和 作用。 莢膜一般在 或 形成。 鞭毛與細菌的 有關(guān),霍亂弧菌的鞭毛還與 有關(guān)。 芽胞不是細菌的 ,而是細菌的 。 1 個繁殖體只形成 個芽胞, 1 個芽胞發(fā)芽也只生成 個繁殖體。 球菌 桿菌 螺形菌 細胞壁 細胞膜 細胞質(zhì) 核質(zhì) 莢膜 鞭毛 菌毛 芽孢 聚糖骨架 肽側(cè)鏈 肽交橋 聚糖骨架 肽側(cè)鏈 脂多糖 莢膜 鞭毛 芽胞 抗吞噬 粘附 抗有害物質(zhì)的損傷 機體內(nèi) 營養(yǎng)豐富的環(huán)境中 運動器官 致病性 繁殖方式 休眠狀態(tài) 1 個 1 個 第 5 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 5 細菌的生理 1、名詞解釋: 熱原質(zhì) ; 細菌素 ; 內(nèi)毒素;外毒素 。 熱原質(zhì): 又稱致熱原,是細菌合成的一種注入人體或動物體內(nèi)能引起發(fā)熱反應的物質(zhì)。 細菌素: 某些細菌菌株產(chǎn)生的一類僅對近緣細菌具有抗菌作用的蛋白質(zhì)稱為細菌素。 內(nèi)毒素: 即革蘭陰性菌細胞壁的脂多糖,其毒性成分為脂質(zhì) A,當菌體死亡裂解后才釋放,是革蘭陰性菌的主要致病物質(zhì)。 外毒素: 是多數(shù)革蘭陽性 菌和少數(shù)革蘭陰性菌在生長繁殖過程中釋放到菌體外的蛋白質(zhì),其毒性強,為細菌重要的致病物質(zhì)。 2、簡述細菌生長繁殖的基本條件有哪些?為什么專性厭氧菌在有氧環(huán)境中不能生長繁殖? 細菌個體的生長繁殖方式: 二分裂 繁殖; 繁殖速度: 細菌分裂數(shù)量倍增所需時間,即 代時 ,多數(shù)為 20鐘。 核桿菌) 約 18 小時,產(chǎn)氣莢膜梭菌為 8 分鐘。 細菌生長繁殖的基本條件: 充足的營養(yǎng)物質(zhì):包括水、碳源、氮源、無機鹽、生長因子等; 合適的 :大多病原菌的最適 為 適宜的溫度:大多數(shù)病原菌的最適溫 度為 37C; 必要的氣體環(huán)境。 專性厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長繁殖的原因: 缺乏 的呼吸酶(細胞色素和細胞色素氧化酶); 缺乏分解有毒氧基團的酶(超氧化物歧化酶 酶、過氧化物酶) 3、細菌的合成代謝產(chǎn)物 種類 及其在醫(yī)學上的意義? 與致病性有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物:熱原質(zhì) /致熱原、毒素和侵襲性酶; 供治療用的合成代謝產(chǎn)物:抗生素、細菌素、維生素; 與鑒別細菌有關(guān)的合成代謝產(chǎn)物:色素。 4、細菌的生長曲線可分為幾期?各自的 主要 特點是什么? 細菌生長曲線: 是 將一定量的細菌接種 于適宜培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),連續(xù)檢測細菌在不同培養(yǎng)時間的活菌數(shù)目(以菌落形成單位 示),以 縱坐標,培養(yǎng)時間為橫坐標,可以作出一條反映細菌生長數(shù)變化規(guī)律的曲線,即生長曲線。包括遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰退期 這四個時期 。 遲緩期: 代謝活躍,菌體增大,積累酶、輔酶和中間代謝產(chǎn)物,不分裂繁殖, 為細菌大量繁殖作好物質(zhì)準備。 對數(shù)期: 細菌繁殖迅速,菌數(shù)呈幾何級數(shù)增長, 細菌的生物學性狀典型,對外界環(huán)境作用敏感,適用于研究細菌的生物學性狀和進行藥物敏感實驗,一般在培養(yǎng)后 8時。 穩(wěn)定期: 細菌數(shù)仍 在增加,死菌數(shù)與活菌數(shù)形成一種動態(tài)平衡。其特點:形態(tài)、染色性等生物學性狀常有改變;芽孢,毒素、抗生素等產(chǎn)生;若 向培養(yǎng)系統(tǒng)補充營養(yǎng)物質(zhì),取走代謝產(chǎn)物,改善培養(yǎng)條件則可延長穩(wěn)定期。 衰亡期: 死亡菌數(shù)增多,超過活菌數(shù),細菌形態(tài)顯著改變,生理活動趨于停止。一般不用該期細菌作鑒定和研究工作。 5、根據(jù)細菌代謝時對分子氧的需求與否,可將細菌分為哪幾類? 第 6 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 6 根據(jù) 細菌代謝時對 氧氣要求的不同, 可將細菌分為 專性需氧菌;微需氧菌;兼性厭氧菌;專性厭氧菌四大類。 專性厭氧菌不能在有氧環(huán)境中生長繁殖的原因: 缺乏 的呼吸酶(細 胞色素和細胞色素氧化酶);缺乏分解有毒氧基團的酶(超氧化物歧化酶 酶、過氧化物酶)。 細菌檢驗技術(shù) 1、名詞解釋: 培養(yǎng)基; 分離培養(yǎng); 純培養(yǎng) ; 菌落 ; 細菌的生化反應; 驗; 驗; 驗 ; 莢膜腫脹試驗。 培養(yǎng)基: 由人工方法配制而成的,專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品稱為培養(yǎng)基。 分離培養(yǎng):臨床標本中含有多種細菌,可經(jīng)過劃線接種到固體培養(yǎng)基表面分散開,經(jīng)過18時培養(yǎng)后可得到單個菌落。這種將混雜的細菌在固體培養(yǎng)基表面分散開的培養(yǎng)方法稱為分離培養(yǎng)。 或: 將增菌培養(yǎng) 物或含菌量多的標本如糞便、膿汁等,直接在平板上劃線分離,將其中的目的菌分離出來 的培養(yǎng)方法 。 純培養(yǎng) : 挑取一個菌落移種到另一培養(yǎng)基中,長出的細菌為純種,該方法稱為純培養(yǎng)。 菌落 : 單個細菌在固體培養(yǎng)基上生長繁殖形成的單一的肉眼可見的細菌集團,稱菌落。許多菌落融合在一起形成菌苔。 細菌的生化反應:用生化試驗的方法,檢測細菌對各種基質(zhì)(糖、蛋白質(zhì)等)的代謝作用以及形成的代謝產(chǎn)物,從而對細菌鑒別的反應。(原理:細菌內(nèi)所具有的酶不同,因而對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力也不同,產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物也不同,據(jù)此可鑒別不同細菌。 ) 驗: 吲哚 ( I) 、甲基紅 ( M) 、 V) 及枸櫞酸鹽利用 ( C) 四種 試驗,常用于腸道桿菌的鑒定,合稱 驗。如大腸埃希菌的結(jié)果是 : + + - -;產(chǎn)氣桿菌的結(jié)果是: - - + +。 驗: 即 雙糖鐵 半固體培養(yǎng)基,它是一種復合性的檢查生化反應的培養(yǎng)基,可檢查 4 種反應 , 即葡萄糖、乳糖的發(fā)酵反應,是否產(chǎn)生 無動力等。目前多使用國產(chǎn)雙糖鐵瓊脂粉 ( ,比較方便,效果也好,但只能配制成斜面培養(yǎng)基,不能配成半固體培養(yǎng)基,因而無法觀察細菌的動力。 驗主要用于腸桿菌科細 菌的鑒定和鑒別。 驗 : B 群鏈球菌產(chǎn)生一種細胞外 子,可增強金黃色葡萄球菌 活性 , 因此,血平板上,在兩菌( B 群鏈球菌 與 金黃色葡萄球菌 )交界處出現(xiàn)箭頭狀溶血區(qū)。該試驗主要 用于 B 群鏈球菌的鑒定。 莢膜腫脹試驗: 某些細菌的莢膜與同型抗血清作用后增厚變寬,此試驗為莢膜腫脹試驗??勺鳛榉窝祖溓蚓燃毦难鍖W診斷。 2、簡述細菌染色標本檢查的基本程序、復染色法基本程序與常用方法 。 細菌 染色標本檢查的基本程序 : 涂片干燥固定染色 。 復染色法基本程序: 初染媒染脫色復染 常用方法 :革蘭染色法和抗酸染色法,尤其是革蘭染色法在細菌學檢驗中有重要意義。 3、革蘭染色的原理、 染液組成 、染色 方法、結(jié)果判斷 、影響因素 與臨床意義。 革蘭染色原理: 通透性說: 主要是由于兩類細菌的細胞壁成分和結(jié)構(gòu)的不同。 革蘭陰性菌細胞壁中含有第 7 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 7 較多類脂質(zhì),而肽聚糖含量較少。當用酒精脫色時,溶解了類脂質(zhì),增加了細胞的通透性,使結(jié)晶紫和碘的復合物易于滲出,細胞脫色,經(jīng)復染后,染上復染液 (復紅 )的顏色;而革蘭陽性菌細胞壁中肽聚糖含量多且交聯(lián)度大,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)酒精脫色后,肽聚糖層的孔徑變小,通透性降低,酒 精不易進入菌體脫色,故細胞仍保留初染液 (結(jié)晶紫 )的顏色。 化學說: G+菌菌體含有大量的核糖核酸鎂鹽,可與碘、結(jié)晶紫牢固結(jié)合,使已著色的菌體不易脫色。 等電點說: G+菌( 于 G+菌帶負電荷比 G+菌易與帶正電荷的堿性染料(結(jié)晶紫)結(jié)合牢固,因而不易脫色。 革蘭染色染液 組成 : 結(jié)晶紫染液、盧戈碘液、 95 乙醇、稀釋石炭酸復紅 。 染色 方法 : 結(jié)晶紫染液 ( 初染 ) 1 分鐘,水洗 盧戈碘液 ( 媒染 ) 1 分鐘,水洗 95乙醇 ( 脫色 ) 30 秒至 1 分 鐘 , 水洗 稀釋石炭酸復紅 ( 復染 ) 1 分鐘 , 水洗 后,待干 后用油鏡進行觀察。 結(jié)果判斷: 革蘭陽性菌呈紫色,革蘭陰性菌呈紅色。 影響革蘭染色的因素 : 操作因素 : 涂片的厚、薄;標本是否固定好;染色與脫色時間的長短 。 染液因素 : 盧戈碘液放置時間過長 ; 95乙醇揮發(fā) ; 結(jié)晶紫與草酸銨混合時間太長 等。 細菌因素 : 細菌種類 ; 細菌菌齡 。 影響革蘭染色的關(guān)鍵步驟是脫色 。 革蘭染色的臨床意義: 鑒別細菌; 選擇藥物; 與致病性有關(guān)。 4、 請 寫出 抗酸 染色的染液組成 、 染色方法 及染色結(jié)果 、原理 。 染液組成與染色方法: 固定 加溫 3 脫色 標本 5%石碳酸復紅 3%鹽酸酒精 美藍復染 鏡檢 染色結(jié)果: 紅色:抗酸性細菌如結(jié)核桿菌 蘭色:非抗酸性細菌 原理: 由于結(jié)核桿菌細胞壁中含大量脂質(zhì),一般不易著色,若經(jīng)加溫或延長染色時間而著色后又能抵抗強脫色劑鹽酸酒精的脫色,故又稱抗酸桿菌 。 5、簡述細菌細胞壁染色的方法與結(jié)果。 方法: 自然干燥 固定 15 3 5片 10%鞣酸 膽紫 鏡檢 水洗 水洗 結(jié)果: 有細胞壁的細菌僅菌體周邊染成紫色,菌體內(nèi)部無色;無細胞壁的細菌(如 L 型細菌)可見整個菌體濃染呈紫色。 6、簡述細菌不染色標本鏡檢的常用方法與用途。 常用方法: 壓滴法 、 懸滴法、 ( 暗視野聚光法、相差顯微鏡檢查法 等)。 應用: 主要用于觀察活菌的動力和運動方式 。 注意事項: 檢測細菌動力時需注意其真正運動還是分子運動,前者時由于鞭毛引起的有方向性的位移,而后者只是在原地顫 動,是由于水分子撞擊細菌而引起的布朗運動,無鞭毛的細菌也可有此種分子運動。 第 8 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 8 7、 簡述培養(yǎng)基制備的一般程序與原則。 不同的培養(yǎng)基制備程序不盡相同,但配制一般培養(yǎng)基的程序基本相似,分為以下幾個步驟: 調(diào)配 熔化 矯正 過濾澄清 分裝 滅菌 檢定 /質(zhì)量檢驗 保存。 培養(yǎng)基的種類很多,但一般制備原則有三條: 足夠和適當?shù)臓I養(yǎng)成份。 合適的酸堿度。 絕對無菌。 培養(yǎng)基滅菌 要求: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基: 121高壓蒸汽滅菌 1530 含糖 /明膠培養(yǎng)基: 113 滅菌 15 雞蛋、血清培養(yǎng)基:血清凝固器間歇滅菌 3 天 3 次( 75 30 80 30 85 30。 不耐高溫的液體成分如血清、尿素、細胞培養(yǎng)液等:濾過除菌 。 8、 簡述在細菌學檢驗中常用的接種方法有哪些? 細菌接種時,應根據(jù)待檢標本的種類、檢驗目的及所用培養(yǎng)基的類型選擇不同的接種方法。 平板劃線接種法 分離培養(yǎng) ,主要用于固體培養(yǎng)基的接種。 目的:使混合的細菌呈單個分散生長,形成單個菌落,以便獲得純菌。 方法: 分區(qū)劃線法:適用于含 菌量較多的標本如糞便、膿汁 連續(xù)劃線法:適用于含菌量較少的標本 . 瓊脂斜面接種法:用于純種增菌、保存菌種或生化反應。 半固體培養(yǎng)基接種法(穿刺接種法): 用于觀察細菌動力或生化反應。 液體培養(yǎng)基接種法:用于純種增菌或生化反應。 傾注平板法:用于 水、牛乳、飲料、尿液等液體標本及 藥物、化妝品 等的 細菌計數(shù)。 方法 : 是將經(jīng)滅菌生理鹽水適量稀釋 (通常作 1010釋 )的標本 于滅菌平皿內(nèi)。注入 10 15融化并冷至 50左右的適宜培養(yǎng)基,凝固后,將平板倒置于 37培養(yǎng)18 24h,計算菌落形成單位( 求出每毫升或每克標本中所含活菌數(shù)。 1本中活菌數(shù) = 全平板 釋倍數(shù)。 我國規(guī)定生活飲用水的標準是: 1 中細菌總數(shù) 100 涂布接種法 :用于紙片藥敏試驗和生物制品菌苗的生產(chǎn)。 9、 簡述細菌的培養(yǎng)方法有哪些? 根據(jù)不同標本及培養(yǎng)目的的不同,可采取不同的方法進行培養(yǎng),常用的有普通(一般)培養(yǎng)法(又叫需氧培養(yǎng)法)、二氧化碳培養(yǎng)法、微需氧培養(yǎng)法及厭氧培養(yǎng)法。 普通培養(yǎng)(需氧培養(yǎng)): 培養(yǎng)溫度: 3537 (采用恒溫培養(yǎng)箱) 培養(yǎng)時間: 1824h(個別細菌例外) 二氧化碳培養(yǎng)法: 510% 燭缸培養(yǎng)法 : 能自動調(diào)節(jié) 含量和溫度,使用較為方便。 二氧化碳培養(yǎng)箱 : 取有蓋磨口標本缸或玻璃干燥器,在蓋及磨口處涂以凡士林。將接種細菌的培養(yǎng)基放入缸中,加蓋密封。隨燃燒產(chǎn)生的 加,蠟燭自行熄滅,此時缸內(nèi) 度約為 5% 10%。置 37孵箱孵育。 化學法 (重碳酸鈉 按每升容積重碳酸鈉 1 鹽酸 0. 35例,分別取兩試劑置于容器 內(nèi),放置于標本缸或干燥器內(nèi),密封后傾斜容器,使第 9 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 9 鹽酸與重碳酸鈉接觸產(chǎn)生 微需氧培養(yǎng)法: 56 % 510% 85%些微需氧菌,如空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等,在低氧分壓的條件下生長良好??捎贸闅鈸Q氣法即用真空泵先將容器內(nèi)的空氣排盡,然后注入 56%510%85%后放入 37孵箱孵育。 厭氧培養(yǎng)法:厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等 。 10、按物理性狀不同可將培養(yǎng)基分哪幾種?各有何主要用途 并簡述細菌在其中的生長現(xiàn)象。 培養(yǎng)基按其物理性狀可分為固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基與液體培養(yǎng)基三種。分別觀察下列生長現(xiàn)象: 固體培養(yǎng)基:細菌得以分離培養(yǎng)生成菌落從而獲得純種,主要用于細菌 的 分離 純化、鑒定以及藥敏試驗 。菌落分為三型: 光滑型菌落( S 型菌落); 粗糙型菌落( R 型菌落); 粘液型菌落 (M 型菌落 )。 半固體培養(yǎng)基:多用來檢查細菌的動力和 短期 保存 細菌 。有鞭毛的細菌可由穿刺線向四周運動播散,培養(yǎng)后穿刺線模糊不清,呈羽毛狀或云霧狀混濁生長;無鞭毛的細菌,不能運動,僅沿穿刺線生長,穿刺線清晰,穿刺線以外的培養(yǎng)基仍透明澄清。 液體培養(yǎng)基:主要用于 大量繁殖細菌(增菌培養(yǎng)) 和觀察某些細菌的生化反應。細菌在液體培養(yǎng)基中生長呈三種狀態(tài)?;鞚嵘L,見于大多數(shù)細菌;沉淀生長;菌膜生長,多為專性需氧菌,在培養(yǎng)液表面生長,形成菌膜。 11、按用途不同可將培養(yǎng)基分為哪幾種?請各列出一種常用的培養(yǎng)基。 基礎(chǔ)培養(yǎng)基:如營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂、蛋白胨水 等 增菌 培養(yǎng)基: 通用增菌 培養(yǎng)基 : 如血平板 、血清肉湯等。 專用增菌 培養(yǎng)基 :如堿性蛋白胨水用于霍亂弧菌的增菌。 選擇培養(yǎng)基:如 板 、伊紅 碲酸鉀血瓊脂平板、 。 鑒別培養(yǎng)基:如糖發(fā)酵管、雙糖鐵培養(yǎng)基等 。 厭氧培養(yǎng)基:如庖肉培養(yǎng)基 、硫乙醇酸鹽肉湯等 。 12、簡述甲基紅試驗、 驗 、 七葉苷水解試驗 、 靛基質(zhì)(吲哚)試驗 、 硫化氫試驗 、 尿素酶試驗 、 枸櫞酸鹽利用試驗 的 原理 、培養(yǎng)基、 方法 、結(jié)果 與應用。 甲基紅試驗 : 原理: 葡萄糖 丙酮酸 大量混合酸 至 下 加入甲基紅試劑,培養(yǎng)基變紅為陽性。 培養(yǎng)基: 葡萄糖蛋白胨水 試劑: 甲基紅試劑 方法: 將待檢菌接種于 葡萄糖蛋白胨水 培養(yǎng)基中,培養(yǎng) 2培養(yǎng)基內(nèi)加入甲基紅指示劑 2d,立即觀 察結(jié)果。 結(jié)果: 呈現(xiàn)紅色為陽性;橘紅色為弱陽性;黃色為陰性。 應用: 主要用于腸桿菌科細菌的鑒別。如大腸埃希菌為陽性,產(chǎn)氣腸桿菌為陰性。 驗: 原理: 葡萄糖 丙酮酸 脫 酸 生成中性的 乙酰甲基甲醇 在堿性環(huán)境中被空氣中的氧氧化成二乙酰 二乙酰再與培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中的精氨酸所含的胍基反應 ,生成紅色化合物 為陽性。 第 10 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 10 培養(yǎng)基: 葡萄糖蛋白胨水 方法: 將待檢菌接種于上述培養(yǎng)基中,于 35 培養(yǎng) 48h 后加入甲液 (5 和乙液 (40 液 +肌酐 ),振搖。 結(jié)果: 在數(shù)分鐘 內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性;如無紅色出現(xiàn)且于 35 4h 后仍如故者即為陰性。 應用: 主要用于腸桿菌科細菌的鑒別。 該試驗常與甲基紅試驗一起使用,因為前者陽性的細菌,后者通常為陰性。 七葉苷水解試驗: 原理: 某些細菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素,七葉素與培養(yǎng)基中枸櫞酸鐵中的二價鐵離子反應,生成黑色的化合物,使培養(yǎng)基呈黑色。 培養(yǎng)基: 七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基。 方法: 將待檢菌接種于七葉苷培養(yǎng)基中于 35培養(yǎng) 48h 后觀察結(jié)果。 結(jié)果: 培養(yǎng)基變?yōu)楹谏珵殛栃裕蛔兩邽殛幮浴?應用: 主要用于 D 群鏈球菌與其它鏈球菌的鑒別,前 者陽性,后者陰性。也可用于革蘭陰性桿菌(克雷伯菌屬、腸桿菌屬和沙雷菌屬)、腸球菌及厭氧菌的鑒別。 靛基質(zhì)(吲哚)試驗 : 原理: 細菌產(chǎn)生色氨酸酶,可分解蛋白胨中的色氨酸,生成靛基質(zhì)(吲哚),靛基質(zhì)與試劑對二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰靛基質(zhì)。 培養(yǎng)基: 蛋白胨水培養(yǎng)基 試劑: 靛基質(zhì)試劑(含對二甲基氨基苯甲醛) 方法: 挑取純培養(yǎng)物接種蛋白胨水培養(yǎng)基,于 35培養(yǎng) 24 48h 后,沿管壁徐徐加入靛基質(zhì)試劑 成兩層,觀察結(jié)果。 結(jié)果: 加入試劑后,兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性;無色為陰性。 應用: 用于腸桿 菌科細菌的鑒定。 硫化氫試驗 : 原理: 某些細菌分解蛋白質(zhì)中的含硫氨基酸(如胱氨酸、甲硫氨酸),生成硫化氫,硫化氫與培養(yǎng)基中的鐵鹽(硫酸亞鐵)或鉛鹽(醋酸鉛)結(jié)合生成黑色硫化物(硫化亞鐵或硫化鉛)。 培養(yǎng)基: 克氏雙糖鐵培養(yǎng)基或醋酸鉛培養(yǎng)基 結(jié)果: 培養(yǎng)基變黑為陽性,不變?yōu)殛幮?。 應用: 常用于腸道桿菌的鑒別。沙門菌屬(甲型副傷寒沙門菌為陰性)、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬和變形桿菌屬等多為陽性,其他菌書呈陰性。 尿素酶試驗 : 原理: 產(chǎn)生脲酶的細菌,能水解尿素生成氨和 使培養(yǎng)基呈堿性變色。 培養(yǎng) 基: 尿素培養(yǎng)基 ( 試劑: 酚紅指示劑 方法: 將被檢菌接種于相應的尿素培養(yǎng)基,于 35培養(yǎng) 18 24h 后觀察結(jié)果。陰性時應繼續(xù)觀察 4 天。 結(jié)果: 培養(yǎng)基變紅者為陽性;培養(yǎng)基不變色者為陰性。 應用: 腸桿菌科中的變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌、雷極普羅威登菌和摩根菌為陽性;克雷伯菌為弱陽性;大腸埃希菌、斯氏和產(chǎn)堿普羅威登菌為陰性。 枸櫞酸鹽利用試驗 : 原理: 某些細菌能利用培養(yǎng)基中的枸櫞酸鹽作為唯一的碳源,也能利用其中的銨鹽作為唯一氮源,細菌生長過程中分解枸櫞 酸鹽產(chǎn)生碳酸鹽和分解銨鹽生成的氨,使培第 11 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 11 養(yǎng)基變堿,使指示劑呈堿性反應。 培養(yǎng)基: 枸鹽酸鹽瓊脂斜面培養(yǎng)基 試劑: 溴麝香草酚藍( 下呈黃色, 上呈藍色) 方法: 在枸鹽酸鹽瓊脂斜面上濃密劃線,大量接種被檢菌,于 35 培養(yǎng) 1 4 天,逐日觀察結(jié)果。 結(jié)果: 枸鹽酸鹽瓊脂斜面上有細菌生長,培養(yǎng)基變成深藍色為陽性;無細菌生長,培養(yǎng)基顏色不變(淡綠色)為陰性。 應用: 有助于腸桿菌科屬間的鑒別。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬和耶爾森菌屬均為陰性;產(chǎn)氣腸桿菌、沙門菌屬、克雷伯菌屬、黏質(zhì)和液化沙雷菌、某些變形 桿菌以及枸櫞酸桿菌為陽性。 13、 填空題 在形態(tài)和染色性上具有特征的致病菌常用 方法作初步診斷。如 和 菌。 鑒定細菌常用 凝集試驗。此方法是用已知 檢測未知 。 直接涂片鏡檢 結(jié)核分枝桿菌 白喉棒狀桿菌 直接玻片 抗體 抗原 14、 綜合分析題 實驗室在對細菌培養(yǎng)時,需先制備培養(yǎng)基,根據(jù)所培養(yǎng)的細菌不同,選擇不同類型的培養(yǎng)基,如培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的細菌時,需制備含血清培養(yǎng)基(即在培養(yǎng)基中加入血清)。細菌的 保存常用細菌保存液,有時也用牛奶保存,如幽門螺桿菌。 思考題: 制備培養(yǎng)基過程中應注意什么? 制備含血清培養(yǎng)基時,基礎(chǔ)培養(yǎng)基和血清如何進行消毒滅菌?用于保存菌種的牛奶又如何進行消毒滅菌? 提示 1:培養(yǎng)基制備過程中應注意無菌操作,以防止微生物的污染。 提示 2:基礎(chǔ)培養(yǎng)基通常使用高壓蒸汽滅菌法滅菌,以殺滅包括細菌繁殖體和芽胞在內(nèi)的所有微生物。含血清培養(yǎng)基和用于保存細菌的牛奶,既要對其進行滅菌處理,又不能破壞營養(yǎng)成分,故常用間歇蒸汽滅菌法。 提示 3:在制備培養(yǎng)基過程中,應注意無菌操作,通常可在經(jīng)紫外線照射 后的無菌罩或?qū)嶒炇抑羞M行培養(yǎng)基的分裝。 提示 4:在準備含血清培養(yǎng)液時,通常使用過濾除菌法除菌,以確保血清中的營養(yǎng)成分不被破壞。 細菌與環(huán)境 1、名詞解釋: 正常菌群 ; 條件致病菌 ; 菌群失調(diào)癥 ; 重疊感染; 消毒;滅菌;無菌;無菌操作 ; 噬菌體;前噬菌體;毒性噬菌體;溶原性細菌 ; 濾過除菌法 正常菌群: 定居于正常人體體表及其開放性腔道中的微生物群。在正常情況下對機體有益無害。 由于在正常微生物群中以細菌為主,而且對細菌研究得較多而深入,所以將正常微生物群通稱為正常菌群。 條件致病菌 : 正常情況下不致病,在特定條件 下可致病的正常菌群,稱條件致病菌(或:機會致病菌)。 菌群失調(diào)癥:宿主某部位正常菌群中各菌種間的比例發(fā)生較大幅度改變并超出正常范圍第 12 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 12 的狀態(tài)稱為菌群失調(diào)。由此而引起的病癥稱為菌群失調(diào)癥。 重疊感染:或稱為 二重感染,是一種后果較為嚴重的菌群失調(diào)癥,即在抗菌藥物治療原感染性疾病或預防某些微生物感染的過程中,發(fā)生的一種新感染。 消毒 : 殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法。 但不一定能殺死含芽孢的細菌或非病原微生物。 滅菌: 殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高,包括殺滅細菌芽胞在內(nèi)的全部病原微生物 和非病原微生物。 無菌: 不存在活的微生物的意思。 無菌操作 : 防止微生物進入人體或其他物品的操作技術(shù)。 噬菌體: 是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。 前噬菌體 : 整合在細菌染色體上的噬菌體基因。 毒性噬菌體: 能在宿主細胞內(nèi)復制增殖,產(chǎn)生許多子代噬菌體,并最終裂解細菌的噬菌體,稱毒性噬菌體。 溶原性細菌: 染色體上帶有前噬菌體的細菌。 濾過除菌法 : 用物理阻留的方法除去液體或空氣中的細菌,達到無菌的目的。 適 用于不耐高溫滅菌的物品如血清、毒素、抗生素及空氣等的除菌。生物安全柜也是 根據(jù)這個原理,利用 高效空氣過濾器 的過濾作用,除去空氣中的微生物,以達到保護操作對象、保護操作者、保護環(huán)境的目的。但 濾過除菌法只能除去細菌,一般不能除去病毒、支原體、衣原體和細菌的 L 型。 2、 正常菌群的生理作用有哪些?正常菌群轉(zhuǎn)化為機會致病菌的條件有哪些? ( 簡要說明微生態(tài)失調(diào)的主要原因有哪些?) 正常菌群的生理作用 : 生物拮抗; 營養(yǎng)作用; 免疫作用; 抗衰老作用; 抑腫瘤作用。 正常菌群轉(zhuǎn)化為機會致病菌的條件有 : 抗生素的使用導致菌群失調(diào); 正常菌群寄居部位改變; 宿主免疫功能低 下 如免疫抑制劑使用、激素、射線照射、細胞毒物的使用導致宿主免疫功能低下 。 3、常用濕熱滅菌方法的種類及其效果與適用范圍。 巴氏消毒法:用較低溫度殺滅液體中的病原菌或特定微生物(如結(jié)核桿菌)、保持物品中所需不耐熱成分不被破壞的消毒方法。 持續(xù)法 : 30 分鐘; 瞬間法 : 15; 常用于消毒牛奶、酒類。 煮沸法:常用于消毒食具、刀剪、注射器等 繁殖體 :煮沸 100, 5 芽孢:煮沸 100, 1 3h。 流動蒸氣消毒法:阿諾蒸鍋或蒸籠。 繁殖體 :煮沸 100, 15 30 間歇蒸氣滅菌法:如血清培養(yǎng)基的滅菌。 高壓蒸氣滅菌法:一種最有效、最徹底的滅菌方法。在 103.4 氣壓下,溫度 維持 15殺滅包括芽胞在內(nèi)的所有微生物。是普通培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)敷料等耐高溫、耐濕物品的最佳滅菌法。 4、高壓蒸汽滅菌法所要求的條件和用途各是什么? 第 13 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 13 高壓蒸氣滅菌法是一種最常用、最有效的滅菌方法,是在密閉的蒸氣容器中進行。隨著壓力升高,蒸氣的溫度也相應升高,在 氣壓下,溫度達到 維持 1520 殺滅包括細菌芽胞在內(nèi)的 微生物。適用于耐高溫、耐潮濕物品的滅菌,如一般培養(yǎng)基、生理鹽水、手術(shù)用品等。 但該溫度還不足以滅活朊粒和熱原質(zhì)。 5、請敘述紫外線的殺菌作用機制、特點和注意事項。 紫外線 ( 的殺菌機制主要是損傷細菌 型,使一條 上相鄰的兩個胸腺嘧啶共價結(jié)合而形成二聚體,從而干擾 復制與轉(zhuǎn)錄,導致細菌死亡 。 特點與注意事項: 殺菌作用與波長有關(guān): 240長的紫外線有殺菌作用,其中以 265其正好與 吸收光譜一致 。 紫外線的穿透力極弱: 不能透過玻璃或紙張等, 故一般只用于空氣消毒及物體表面消毒 。 殺菌波長的 人體皮膚、眼睛有損傷作用,使用時應注意防護 。 一般用低壓水銀蒸氣燈做紫外線殺菌處理。 6、簡述乙醇、碘酊、過氧化氫、過氧乙酸、戊二醛、環(huán)氧乙烷消毒滅菌的主要特點。 乙醇消毒滅菌的機制、特點及主要用途 : 機制:去除菌細胞膜中的脂類,并使菌體蛋白質(zhì)變性與凝固 。 特點與主要用途: 以濃度為 70% 75%時殺菌力最強 。 易揮發(fā),需加蓋保存,定期調(diào)整濃度 。 主要用于 皮膚消毒和浸泡體溫計 。 酊、 伏: 多用于皮膚黏膜、體溫計以及其他物品的表面消毒 。 過氧化氫: 機理:導致酶蛋白 轉(zhuǎn)變?yōu)?致酶活性喪失。 3 6過氧化氫 0%過氧化氫 用途:可用于物品表面和皮膚黏膜消毒(如口腔、創(chuàng)口的消毒、厭氧菌感染的消毒)。但對金屬制品有腐蝕作用。 氧乙酸 : 類似于過氧化氫。 2%戊二醛: 機理:細菌蛋白 和核酸的烷化作用。 特點:廣譜,高效,快速。 用途:戊二醛以 整 配成 2%水溶液,浸泡 5用于精密儀器、內(nèi)窺鏡(不能用熱力滅菌法進行滅菌)等的滅菌。 環(huán)氧乙烷 : 種類:雜環(huán)類化合物,沸點 氣體消毒劑。 機理:細菌蛋白和核酸的烷化作用。 特點:能穿透包裹物,廣譜高效,殺滅芽胞,易燃,對人有毒性。 用途:已廣泛用于醫(yī)療器械、一次性用具的滅菌。 常用的滅菌要求是濃度 8001200;相對濕度 55%60%; 50 ; 6h。 7、 影響消毒滅菌效果 的因素有哪些? 消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時間 消毒劑種類不同,其殺菌效果亦有很大差別,大多數(shù)濃度越高,殺菌效果越好,但醇類例外,作用時間越長,殺菌效果越好。 微生物的種類與數(shù)量:菌齡、有無特殊構(gòu)造 等。 第 14 頁 共 80 頁 宜春學院 醫(yī)學院 楊婧編寫 14 同種消毒劑對不同的微生物殺菌效果也不一致,且微生物數(shù)量越多,所需消毒的時間就越長。 溫度、濕度 : 溫度升高可提高消毒效果。 酸堿度 : 酸堿度可影響消毒劑的殺菌效果。 有機物:環(huán)境中有機物的存在,可影響消毒劑的效果。生理鹽水清洗污染創(chuàng)口表面。 8、 化學消毒劑的殺菌機制有哪些?各自種類的代表是什 么? 使菌體蛋白變性或凝固,導致細菌死亡:酚類(高濃度)、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、醛類 干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝: 某些氧化劑、重金屬鹽類 (低濃度 )與細菌酶蛋白的 結(jié)合而使有關(guān)酶失去活性,導致細菌代謝發(fā)生障礙而死亡; 損傷細胞膜, 能降低菌細胞的表面張力并增加其通透性,胞外液體內(nèi)滲,導致細菌破裂 :酚類(低濃度)、表面活性劑、脂溶劑 9、 毒性噬菌體增殖以何種方式增殖?它的增殖過程包括哪幾個階段? 毒性噬菌體以 復制 方式 增殖。 它的增殖過程包括 吸附,穿入,生物合成和裝配、成熟與釋放等步驟。 10、 填空題 正常菌群的組成和數(shù)量發(fā)生明顯改變時,可出現(xiàn) ,由此產(chǎn)生的一系列臨床癥狀稱為 。 當正常菌群發(fā)生 或 時,可成為 菌。 正常菌群對機體的有益作用是 、 、 、 和 。 引起微生態(tài)失調(diào)動主要原因是 、 和 。 毒性噬菌體以 方式進行增殖,增殖過程包括 、 、 、 幾個階段。 噬菌體參與的基因轉(zhuǎn)移與重組的方式有 和 。 噬菌體的化學組成主要為 _、 _。 溫和噬菌體有三種存在形式 _、 _、 _。 菌群失調(diào) 菌群失調(diào)癥 寄居部位改變 菌群失調(diào) 條件致病菌 生物屏障作用 營養(yǎng)作用 免疫作用 抗衰老作用 抗腫瘤作用 正常菌群寄居部位改變 濫用抗生素 導致菌群失調(diào) 機體免疫功能降低 復制 吸附 穿入 生物合成 成熟與釋放 轉(zhuǎn)導 溶原性轉(zhuǎn)換 核酸 蛋白質(zhì) 游離的具有感染性的噬菌體顆粒 宿主胞質(zhì)內(nèi)類似質(zhì)粒
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