DB33 636.2-2007 無公害杏鮑菇 第2部分：菌種.doc

D33/T 2006浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布2007-05-16實(shí)施2007-04-16發(fā)布無公害杏鮑菇第2部分：菌種Non-environmental pollution pleurotus eryngiiPart 2: SpawnDB33/ 636.22007DB33浙江省地方標(biāo)準(zhǔn)ICS 67.080.20B 391DB33/ 636.22007前 言本部分第5章為強(qiáng)制性條款。DB33/ 636-2007無公害杏鮑菇分為： 第1部分：產(chǎn)地環(huán)境；第2部分：菌種；第3部分：原輔材料；第4部分：栽培技術(shù)規(guī)程；第5部分：質(zhì)量安全要求。本部分是DB33/ 636-2007的第2部分。本部分由浙江省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本部分起草單位：磐安縣人民政府食用菌生產(chǎn)辦公室、磐安縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局。本部分主要起草人：李強(qiáng)、呂先真、應(yīng)文立、方正燕、陳有興、楊海鷗、潘娟鶯。I無公害杏鮑菇第2部分：菌種1 范圍本部分規(guī)定了無公害杏鮑菇菌種的術(shù)語(yǔ)和定義、技術(shù)要求、質(zhì)量要求、試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則、標(biāo)識(shí)、包裝、運(yùn)輸及貯存。本部分適用于袋料栽培的無公害杏鮑菇菌種生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。GB/T 191 包裝儲(chǔ)運(yùn)圖示標(biāo)志GB/T 4789.28-2003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法、培養(yǎng)基和試劑NY/T 528 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y 862 杏鮑菇和白靈菇菌種3 術(shù)語(yǔ)和定義NY/T 528和NY 862確立的以及下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本部分。3.1雜菌除目標(biāo)菌以外的其他微生物。3.2積水培養(yǎng)基含水量過高而導(dǎo)致的水分游離沉積現(xiàn)象。3.3原基尚未組織化的可發(fā)育成子實(shí)體的菌絲擔(dān)集體。3.4干縮因菌齡過長(zhǎng)或其他非侵染性因子導(dǎo)致的菌絲體萎縮、色澤變暗、培養(yǎng)基脫離容器壁現(xiàn)象。4 技術(shù)要求4.1 技術(shù)人員菌種廠應(yīng)有與菌種生產(chǎn)所需的相應(yīng)專業(yè)技術(shù)人員。4.2 場(chǎng)地選擇地勢(shì)高燥，通風(fēng)良好。排水暢通，交通便利。至少300m之內(nèi)無禽畜舍，無垃圾（糞便）場(chǎng)，無污水和其他污染源（如大量揚(yáng)塵的水泥廠、磚瓦廠、石灰廠、木材加工廠等）。4.3 廠房設(shè)置和建造有各自隔離的攤曬場(chǎng)、原材料庫(kù)、配料分裝室（場(chǎng)）、滅菌室、冷卻室、接種室、培養(yǎng)室、貯存室、菌種檢驗(yàn)室等。廠房建造從結(jié)構(gòu)和功能上滿足食用菌菌種生產(chǎn)的基本需要。4.3.1 攤曬場(chǎng)要求平坦高燥、通風(fēng)良好，光照充足、空曠寬闊。遠(yuǎn)離火源。4.3.2 原材料庫(kù)要求高燥、通風(fēng)良好，防雨，遠(yuǎn)離火源。4.3.3 配料分裝室（場(chǎng)）要求水電方便，空間充足。如安排在室外，應(yīng)有天棚，防雨防曬。4.3.4 滅菌室要求水電安全方便，通風(fēng)良好，空間充足，散熱暢通。4.3.5 冷卻室潔凈、防塵、易散熱。4.3.6 接種室要設(shè)緩沖間，防塵換氣性能良好。內(nèi)壁和屋頂光滑，經(jīng)常清洗和消毒，做到空氣潔凈。4.3.7 培養(yǎng)室和貯存室內(nèi)壁和屋頂光滑，便于清洗和消毒。培養(yǎng)室和貯存室墻壁要加厚，利于控溫。4.3.8 菌種檢驗(yàn)室水電方便，利于裝備相應(yīng)的檢驗(yàn)設(shè)備和儀器。4.3.9 布局應(yīng)按菌種生產(chǎn)工藝流程合理安排布局。4.4 設(shè)備設(shè)施4.4.1 基本設(shè)備臺(tái)秤、天平、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、凈化工作臺(tái)、接種箱、調(diào)溫設(shè)備、除濕機(jī)、培養(yǎng)架、恒溫箱、冰箱、顯微鏡等及常規(guī)用具，產(chǎn)量大的菌種廠還應(yīng)配備攪拌機(jī)、裝瓶裝袋機(jī)。高壓滅菌鍋應(yīng)使用經(jīng)有關(guān)部門檢驗(yàn)的安全合格產(chǎn)品。4.4.2 基本設(shè)施配料、分裝、滅菌、冷卻、接種、培養(yǎng)等各環(huán)節(jié)的設(shè)施規(guī)模要配套。冷卻室、接種室和貯存室都要有調(diào)溫設(shè)施。4.5 使用品種4.5.1 品種應(yīng)使用經(jīng)省級(jí)以上農(nóng)作物品種審定委員會(huì)登記的品種，并且清楚種性。不使用來源和種性不清的菌種和生產(chǎn)性狀未經(jīng)系統(tǒng)試驗(yàn)驗(yàn)證的組織分離物作種源生產(chǎn)菌種。并從具相應(yīng)技術(shù)資質(zhì)的供種單位引種。4.5.2 移植擴(kuò)大母種僅用于移植擴(kuò)大原種，一支母種移植擴(kuò)大原種不應(yīng)超過6瓶（袋）；一瓶原種移植擴(kuò)大栽培種不應(yīng)超過50瓶（袋）。4.6 生產(chǎn)工藝流程稱料干拌濕拌裝瓶（袋）棉塞封口包棉塞（原種）滅菌冷卻接種培養(yǎng)檢驗(yàn)包裝出售。4.7 生產(chǎn)管理4.7.1 培養(yǎng)基4.7.1.1 母種配方馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g、水1000ml。4.7.1.2 原種、栽培種配方雜木屑36.5%、棉籽殼37%、麩皮25%、石膏1%、石灰0.5%；料水比為1(1.21.3)。4.7.2 容器4.7.2.1 母種 用透明玻璃試管和棉塞，試管18mm180mm或20mm200mm，棉塞要使用梳棉，不應(yīng)使用脫脂棉。4.7.2.2 原種使用650ml750ml、耐126高溫的無色或近無色的玻璃菌種瓶，或850ml耐126高溫白色半透明符合GB 9687衛(wèi)生規(guī)定的塑料菌種瓶，1528耐126高溫白色半透明符合GB 9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應(yīng)使用棉塞，棉塞應(yīng)符合4.7.2.1規(guī)定；也可用能滿足濾菌和透氣要求的無棉塑料蓋代替棉塞。4.7.2.3 栽培種使用符合4.7.2.2規(guī)定的容器，也可使用1735耐126高溫符合GB 9688衛(wèi)生規(guī)定的聚丙烯塑料袋。各類容器都應(yīng)使用棉塞或無棉塑料蓋，并符合4.7.2.2規(guī)定。4.7.3 滅菌母種培養(yǎng)基配制分裝后應(yīng)立即滅菌；原種和栽培種培養(yǎng)基分裝配制后應(yīng)在4h內(nèi)進(jìn)鍋滅菌。母種培養(yǎng)基滅菌0.11MPa0.12MPa， 30min；木屑培養(yǎng)基滅菌0.12MPa，1.5h或0.11MPa0.12MPa，1h。裝容量較大時(shí)，滅菌時(shí)間要適當(dāng)延長(zhǎng)。滅菌完畢后，應(yīng)自然降壓，不應(yīng)強(qiáng)制降壓。常壓滅菌時(shí)，在2h之內(nèi)使滅菌室溫度達(dá)到100，保持1008h10h。母種培養(yǎng)基、原種培養(yǎng)基應(yīng)高壓滅菌，不應(yīng)常壓滅菌。滅菌時(shí)應(yīng)防止棉塞被冷凝水打濕。4.7.4 冷卻冷卻室使用前要進(jìn)行清潔和除塵處理。地面鋪消毒過的塑料薄膜后，將滅菌后的原種瓶（袋）或栽培種瓶（袋）放置在冷卻室中冷卻到料溫降至適宜溫度。4.7.5 接種4.7.5.1 接種室（箱）的基本處理程序清潔搬入接種物和被接種物接種室（箱）的消毒處理。4.7.5.2 接種室（箱）的消毒方法用藥物消毒并用紫外燈照射。4.7.5.3 凈化工作臺(tái)的消毒處理方法先用75%酒精或新潔爾滅溶液進(jìn)行表面擦拭消毒，然后預(yù)凈20min。4.7.5.4 接種操作在無菌室（箱）或凈化工作臺(tái)上嚴(yán)格按無菌操作接種。接種完成后及時(shí)貼好標(biāo)簽。4.7.5.5 接種室（箱）后處理接種室每次使用后，要及時(shí)清理清潔，排除廢氣，清除廢物，臺(tái)面要75%酒精或新潔爾滅溶液進(jìn)行表面擦拭消毒。4.7.6 培養(yǎng)室處理在使用培養(yǎng)室的前兩天，采用藥物消毒。4.7.7 培養(yǎng)條件根據(jù)培養(yǎng)物的不同生長(zhǎng)要求，給予其適宜的培養(yǎng)溫度（多在2228），保持相對(duì)濕度在75%以下，通風(fēng)，避光。4.7.8 培養(yǎng)期的檢查各級(jí)菌種培養(yǎng)期間應(yīng)定期檢查，及時(shí)揀出不合格菌種。4.7.9 入庫(kù)完成培養(yǎng)的菌種要及時(shí)登記入庫(kù)。4.7.10 記錄生產(chǎn)各環(huán)節(jié)應(yīng)詳細(xì)記錄。4.7.11 留樣各級(jí)菌種應(yīng)留樣備查，留樣的數(shù)量應(yīng)以每個(gè)批號(hào)母種3支5支，原種和栽培種5瓶7瓶，于46下貯存，貯存至使用者一正常生產(chǎn)條件下該批菌種出第一潮菇。5 質(zhì)量要求5.1 母種5.1.1 感官要求母種感官要求應(yīng)符合表1 規(guī)定。表1 母種感官要求項(xiàng) 目指 標(biāo)容器潔凈、完整、無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求斜面長(zhǎng)度，頂端距棉塞4050接種量（接種物），2（35）（35）菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿斜面菌絲體特征潔白、健壯、棉毛狀菌絲體表面均勻、舒展、平整、無角變、色澤一致菌絲分泌物無菌落邊緣較整齊雜菌菌落無蟲（螨）體無斜面背面外觀培養(yǎng)基無干縮，顏色均勻，無暗斑、無明顯色素氣味具有杏鮑菇特有的香味，無異味5.1.2 微生物學(xué)要求母種微生物學(xué)要求應(yīng)符合表2規(guī)定。表2 母種微生物學(xué)要求項(xiàng) 目指 標(biāo)菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)粗壯、豐滿、均勻鎖狀聯(lián)合有雜菌無5.1.3 菌絲生長(zhǎng)速度杏鮑菇在PDA培養(yǎng)基上，在251下，10d12d長(zhǎng)滿斜面；在90培養(yǎng)皿上，8d10d長(zhǎng)滿平板。5.1.4 母種栽培性狀供種單位所供母種應(yīng)栽培性狀清楚，需經(jīng)出菇試驗(yàn)確證農(nóng)藝性狀和商品性狀等種性合格后，方可用于擴(kuò)大繁殖或出售。產(chǎn)量性狀在適宜條件下杏鮑菇生物學(xué)效率不低于40%。5.2 原種5.2.1 感官要求原種感官要求應(yīng)符合表3 規(guī)定。表3 原種感官要求項(xiàng) 目指 標(biāo)容器潔凈、完整、無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離，505，接種量（接種物大?。?，21212菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器菌絲體特征潔白濃密、生長(zhǎng)健壯培養(yǎng)物菌絲體表面生長(zhǎng)均勻，無角變，無高溫圈培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶（袋）壁，無明顯干縮培養(yǎng)物表面分泌物無雜菌菌落無蟲（螨）體無拮抗現(xiàn)象無菌皮無出現(xiàn)子實(shí)體原基的瓶（袋）數(shù)，%3氣味具有杏鮑菇特有的香味，無異味5.2.2 微生物學(xué)要求原種微生物學(xué)要求應(yīng)符合5.1.2規(guī)定。5.2.3 菌絲生長(zhǎng)速度杏鮑菇在培養(yǎng)室室溫231下，在木屑培養(yǎng)基上35d40d長(zhǎng)滿容器。5.3 栽培種5.3.1 感官要求栽培種感官要求應(yīng)符合表4規(guī)定。表4 栽培種感官要求項(xiàng) 目指 標(biāo)容器潔凈、完整、無損棉塞或無棉塑料蓋干燥、潔凈，松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離，505，菌種外觀菌絲生長(zhǎng)量長(zhǎng)滿容器菌絲體特征潔白濃密、生長(zhǎng)健壯不同部位菌絲體生長(zhǎng)均勻，色澤一致，無角變，無高溫圈培養(yǎng)基及菌絲體緊貼瓶（袋）壁，無明顯干縮培養(yǎng)物表面分泌物無雜菌菌落無蟲（螨）體無拮抗現(xiàn)象無菌皮無出現(xiàn)子實(shí)體原基的瓶（袋）數(shù)，%5氣味具有杏鮑菇特有的香味，無異味5.3.2 微生物學(xué)要求栽培種微生物學(xué)要求應(yīng)符合5.1.2規(guī)定。5.3.3 菌絲生長(zhǎng)速度杏鮑菇在培養(yǎng)室室溫231下，在木屑培養(yǎng)基上35d40d長(zhǎng)滿容器。6 試驗(yàn)方法6.1 感官要求6.1.1 容器、棉塞、無棉塑料蓋、斜面背面外觀肉眼觀察。6.1.2 培養(yǎng)基上表面距瓶（袋）口的距離、斜面長(zhǎng)度、接種量、菌種外觀（除雜菌菌落、蟲（螨）體、子實(shí)體原基外）肉眼觀察和測(cè)量。6.1.3 雜菌菌落、蟲（螨）體肉眼觀察，必要時(shí)用5放大鏡觀察。6.1.4 子實(shí)體原基隨機(jī)抽取樣本100瓶（袋），肉眼觀察有無原基，計(jì)算。6.2 微生物學(xué)檢驗(yàn)6.2.1 菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)、鎖狀聯(lián)合用放大倍數(shù)不低于1040的光學(xué)顯微鏡對(duì)培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個(gè)視野。6.2.2 雜菌6.2.2.1 細(xì)菌檢驗(yàn)將檢驗(yàn)樣本按無菌操作接種于GB/T 4789.28-2003中4.7規(guī)定的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，28下培養(yǎng)1d2d,觀察斜面表面是否有細(xì)菌菌落長(zhǎng)出，必要時(shí)用顯微鏡檢查。6.2.2.2 霉菌檢驗(yàn)將檢驗(yàn)樣本按無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基中，2528下培養(yǎng)3d4d,觀察是否有杏鮑菇菌絲形態(tài)菌落或有異味，必要時(shí)用水封片鏡檢。6.3 菌絲生長(zhǎng)速度6.3.1 母種PDA培養(yǎng)基，90直徑的培養(yǎng)皿，傾倒培養(yǎng)基25ml30ml/皿，菌齡7d10d的菌種為接種物，用滅菌過的5直徑的打孔器在菌落周圍相同菌齡處打接種物，接種后立即置于251黑暗培養(yǎng)，計(jì)算長(zhǎng)滿所需天數(shù)。6.3.2 原種和栽培種在選定的培養(yǎng)基上接種后立即置于251黑暗培養(yǎng)，計(jì)算長(zhǎng)滿所需天數(shù)。7 檢驗(yàn)規(guī)則7.1 批次同一種源、同一接種時(shí)段和同一培養(yǎng)條件生產(chǎn)的母種為一批次；同一種源、同一接種時(shí)段、同一制作方法和同一培養(yǎng)條件生產(chǎn)的原種、栽培種為一批次。7.2 抽樣母種按品種、培養(yǎng)條件、接種時(shí)間分批編號(hào)，原種和栽培種按菌種來源、制種方法和接種時(shí)間分批編號(hào)。按批隨機(jī)抽取被檢樣品。母種、原種、栽培種的抽樣量分別為該批菌種量的10%、5%、1%隨機(jī)取樣，但每批抽樣數(shù)量不少于10支（瓶、袋）；超過100支（瓶、袋）的，可進(jìn)行兩級(jí)抽樣。7.3 判定規(guī)則檢驗(yàn)項(xiàng)目全部符合要求時(shí)，為合格菌種；其中任何一項(xiàng)目不符合要求，均為不合格菌種。8 標(biāo)識(shí)、包裝、運(yùn)輸及貯存8.1 標(biāo)識(shí)菌種包裝儲(chǔ)運(yùn)標(biāo)志應(yīng)符合GB/T 191規(guī)定，每支（瓶、袋）菌種產(chǎn)品標(biāo)簽應(yīng)標(biāo)明產(chǎn)品名稱、品種名稱、生產(chǎn)單位、接種時(shí)間、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)等內(nèi)容。每箱菌種包裝標(biāo)簽應(yīng)標(biāo)明產(chǎn)品名稱、品種名稱、生產(chǎn)單位、廠址、聯(lián)系電話、出廠日期、保質(zhì)期、貯存條件、數(shù)量、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)等內(nèi)容。8.2 包裝母種采用木盒或有足夠強(qiáng)度的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙或報(bào)紙等輕質(zhì)材料填滿。原種和栽培種采用有足夠強(qiáng)度的紙箱，內(nèi)部用棉花、碎紙或報(bào)紙等輕質(zhì)材料填滿。箱（盒）內(nèi)附產(chǎn)品合格證書和使用說明（包括菌種種性、培養(yǎng)基配方及適用范圍