GB5009.265-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中多環(huán)芳烴的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 6食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中多環(huán)芳烴的測(cè)定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實(shí)施中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)國(guó) 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 61 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中多環(huán)芳烴的測(cè)定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中多環(huán)芳烴( 萘、 苊、 芴、 菲、 蒽、 熒蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 熒蒽、 苯并k 熒蒽、 苯并a 芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝的液相色譜測(cè)定方法和食品中多環(huán)芳烴( 萘、 苊烯、 苊、 芴、 菲、 蒽、 熒蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 熒蒽、 苯并k 熒蒽、 苯并a 芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝的氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中多環(huán)芳烴含量的測(cè)定。第一法 高效液相色譜法2 原理試樣中的多環(huán)芳烴用有機(jī)溶劑提取, 提取液濃縮至近干, 溶劑溶解, 用P S A(N-丙基乙二胺) 和C1 8固相萃取填料凈化或用弗羅里硅土固相萃取柱凈化。經(jīng)濃縮定容后, 通過(guò)高效液相色譜分離, 測(cè)定各種多環(huán)芳烴在不同激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度, 外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。3.1 試劑3.1.1 乙腈(CH3C N) : 色譜純。3.1.2 正己烷(C6H1 4) : 色譜純。3.1.3 二氯甲烷(CH2C l2) : 色譜純。3.1.4 硅藻土: 色譜純。3.1.5 硫酸鎂(M g S O4) : 優(yōu)級(jí)純。3.1.6 N-丙基乙二胺(P S A) : 粒徑4 0m。3.1.7 封尾C1 8固相萃取填料: 粒徑4 0m6 3m。3.1.8 弗羅里硅土固相萃取柱:5 0 0m g,3m L。3.1.9 有機(jī)相型微孔濾膜:0.2 2m。3.2 試劑配制3.2.1 正己烷-二氯甲烷混合溶液(1+1) : 量取5 0 0m L正己烷, 加入二氯甲烷5 0 0m L, 混勻。3.2.2 乙腈飽和的正己烷: 量取8 0 0m L正己烷, 加入2 0 0m L乙腈, 振搖混勻后, 靜置分層, 上層正己烷層即為乙腈飽和的正己烷。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 62 3.3 標(biāo)準(zhǔn)品多環(huán)芳烴( 萘、 苊烯、 苊、 芴、 菲、 蒽、 熒蒽、 芘、 苯并a 蒽、 、 苯并b 熒蒽、 苯并k 熒蒽、 苯并a芘、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝有證標(biāo)準(zhǔn)溶液(2 0 0g/m L) , 于-1 8 下保存。警告 多環(huán)芳烴是已知的致癌、 致畸、 致突變的物質(zhì), 并且致癌性隨著苯環(huán)數(shù)的增加而增加, 測(cè)定時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)。測(cè)定應(yīng)在通風(fēng)柜中進(jìn)行并戴手套, 盡量減少暴露。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液(10 0 0n g/m L) : 吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5m L, 用乙腈定容至1 0 0m L。在-1 8下保存。3.4.2 多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)系列工作液: 分別吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液0.1 0m L、0.5 0m L、1.0m L、2.0m L、5.0m L、1 0.0m L, 用乙腈定容至1 0 0m L, 得到質(zhì)量濃度為1n g/m L、5n g/m L、1 0n g/m L、2 0n g/m L、5 0n g/m L、1 0 0n g/m L的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀, 帶熒光檢測(cè)器。4.2 電子天平: 感量為0.0 1g。4.3 冷凍離心機(jī): 轉(zhuǎn)速45 0 0r/m i n。4.4 渦旋振蕩器。4.5 超聲波振蕩器。4.6 粉碎機(jī)。4.7 均質(zhì)器。4.8 氮吹儀。4.9 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。5 分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 干樣: 取樣品約5 0 0g, 經(jīng)粉碎機(jī)粉碎、 混勻, 分裝于潔凈盛樣袋中, 密封標(biāo)識(shí)后于-1 8 冷凍保存。5.1.2 濕樣: 取樣品約5 0 0g, 將其可食部分先切碎, 經(jīng)均質(zhì)器充分?jǐn)囁榫鶆? 分裝于潔凈盛樣袋中, 密封標(biāo)識(shí)后于-1 8冷凍保存。5.2 試樣提取5.2.1 糧谷或水分少的食品稱取2g 5g( 精確至0.0 1g) 試樣于5 0m L具塞玻璃離心管A中, 按以下步驟處理:a) 加入1 0m L正己烷, 渦旋振蕩3 0s后, 放入4 0水浴超聲3 0m i n; 以45 0 0r/m i n離心5m i n,吸取上清液于玻璃離心管B中; 離心管A下層用1 0m L正己烷重復(fù)提取1次, 提取液合并于離心管B中, 氮吹( 溫度控制在3 5以下) 除去溶劑, 吹至近干。b) 在離心管B中, 加入4m L乙腈, 渦旋混合3 0s, 再加入9 0 0m g硫酸鎂、1 0 0m gP S A和1 0 0m gG B5 0 0 9.2 6 52 0 1 63 C1 8填料, 渦旋混合3 0s, 以45 0 0r/m i n離心3m i n, 取上清液于1 0m L玻璃刻度離心管C中,離心管B下層再用2m L乙腈重復(fù)提取1遍, 合并提取液于離心管C中, 氮吹蒸發(fā)溶劑至近1m L, 用乙腈定容至1m L, 混勻后, 過(guò)0.2 2m有機(jī)相型微孔濾膜, 制得試樣待測(cè)液。5.2.2 水產(chǎn)品、 肉類和蔬菜等食品稱取2g 5g( 精確至0.0 1g) 試樣于5 0m L具塞玻璃離心管A中, 加1g5g硅藻土, 用玻棒攪勻,以下按5.2.1中a) 、b) 步驟處理, 制得試樣待測(cè)液。5.2.3 含油脂高的食品或動(dòng)植物油脂稱取1g 4g( 精確至0.0 1g) 試樣于5 0m L具塞玻璃離心管A中, 按以下步驟處理:a) 加入2 0m L乙腈和1 0m L乙腈飽和的正己烷, 渦旋振蕩3 0s后, 放入4 0水浴超聲3 0m i n;搖勻后, 以45 0 0r/m i n冷凍(-4) 離心5m i n, 吸取下層乙腈層于1 0 0m L雞心瓶中, 離心管A中溶液用2 0m L乙腈重復(fù)提取1次, 提取液合并于雞心瓶中,3 5 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。加入5m L正己烷, 渦旋振蕩3 0s溶解。b) 依次用5m L二氯甲烷和1 0m L正己烷活化弗羅里硅土固相萃取柱, 將a) 獲得的5m L提取樣液全部移入弗羅里硅土固相萃取柱, 再用5m L正己烷洗滌雞心瓶并入柱中, 用8m L正己烷-二氯甲烷混合溶液洗脫, 收集所有流出物于2 0m L玻璃離心管B中。氮吹( 溫度控制在3 5以下) 除去溶劑, 吹至近干, 加入0.5m L乙腈渦旋振蕩1 0s, 繼續(xù)氮吹至除盡正己烷-二氯甲烷, 用乙腈定容至1m L, 混勻后, 過(guò)0.2 2m有機(jī)相型微孔濾膜, 制得試樣待測(cè)液。5.3 液相色譜參考條件a) 色譜柱:P AHC1 8反相鍵合固定相色譜柱, 柱長(zhǎng)2 5 0mm, 內(nèi)徑4.6mm, 粒徑5m, 或同等性能的色譜柱。b) 檢測(cè)器: 熒光檢測(cè)器。c) 流動(dòng)相: 乙腈和水; 梯度洗脫程序見(jiàn)表1, 溶劑A為乙腈, 溶劑B為水。表1 反相C1 8柱梯度洗脫程序色譜時(shí)間m i n溶劑A%溶劑B%05 05 055 05 02 01 0 002 81 0 003 25 05 0 d) 流速:1.5m L/m i n。e) 檢測(cè)波長(zhǎng): 激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)見(jiàn)表2。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 64 表2 多環(huán)芳烴的激發(fā)波長(zhǎng)、 發(fā)射波長(zhǎng)及其切換色譜時(shí)間檢測(cè)參數(shù)序號(hào)化合物名稱時(shí)間m i n激發(fā)波長(zhǎng)n m發(fā)射波長(zhǎng)n m1萘苊芴02 7 03 2 42菲蒽1 2.0 42 4 83 7 53熒蒽1 4.0 02 8 04 6 24芘苯并a 蒽1 4.8 52 7 03 8 55苯并b 熒蒽1 8.9 32 5 64 4 66苯并k 熒蒽苯并a 芘二苯并a,h 蒽苯并g,h,i 苝2 0.2 22 9 24 1 07茚并1,2,3 -c,d 芘2 3.3 32 7 45 0 7 f) 柱溫:3 0。g) 進(jìn)樣量:2 0L。5.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中, 測(cè)得相應(yīng)的峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、 以峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見(jiàn)圖A.1。5.5 試樣溶液的測(cè)定將試樣待測(cè)液注入液相色譜儀中, 以保留時(shí)間定性, 測(cè)得相應(yīng)的峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測(cè)液中被測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值超出儀器檢測(cè)的線性范圍, 可適當(dāng)稀釋后測(cè)定。5.6 空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)除不加試樣外, 采用與試樣完全相同的分析步驟。6 分析結(jié)果的表述試樣中多環(huán)芳烴的含量Xi按式(1) 計(jì)算:Xi=iV10 0 0m10 0 0(1) 式中:Xi 試樣中多環(huán)芳烴的含量, 單位為微克每千克(g/k g) ;G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 65 i 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴i的濃度, 單位為納克每毫升(n g/m L) ;V 試樣待測(cè)液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;10 0 0 單位轉(zhuǎn)換;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) 。含量大于等于1 0g/k g時(shí), 保留三位有效數(shù)字; 含量小于1 0g/k g時(shí), 保留兩位有效數(shù)字。注:計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的2 0%。8 其他當(dāng)試樣取4g, 定容體積為1m L時(shí), 本方法的檢出限和定量限見(jiàn)表3。表3 液相色譜法的多環(huán)芳烴檢出限和定量限單位為微克每千克化合物蒽、 苯并a 蒽、 、 茚并1,2,3 -c,d 芘、 苯并b 熒蒽、苯并k 熒蒽、 苯并a芘、 二苯并a,h 蒽、苯并g,h,i 苝菲萘熒蒽苊、 芴、 芘檢出限0.3 32.03.30.50.6 5定量限1.06.01 01.52.0第二法 氣相色譜-質(zhì)譜法9 原理試樣中的多環(huán)芳烴用有機(jī)溶劑提取, 提取液濃縮至近干, 用P S A(N-丙基乙二胺) 和C1 8固相萃取填料凈化或用弗羅里硅土固相萃取柱凈化, 經(jīng)濃縮定容后, 用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測(cè)定, 外標(biāo)法定量。1 0 試劑和材料同第3章。1 1 儀器和設(shè)備1 1.1 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。1 1.2 其余同4.24.9。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 66 1 2 分析步驟1 2.1 試樣制備同5.1。1 2.2 試樣提取同5.2。1 2.3 空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)除不加試樣外, 采用與試驗(yàn)完全相同的分析步驟。1 2.4 氣相色譜-質(zhì)譜參考條件a) 色譜柱:D B - 5M S, 柱長(zhǎng)3 0m, 內(nèi)徑0.2 5mm, 膜厚0.2 5m, 或同等性能的色譜柱。b) 柱溫度程序: 初始溫度9 0,以2 0/m i n升溫至2 2 0, 再以5/m i n升溫至3 2 0, 保持2m i n;c) 進(jìn)樣口溫度:2 5 0;d) 色譜-質(zhì)譜接口溫度:2 8 0;e) 離子源溫度:2 3 0;f) 載氣: 氦氣, 純度9 9.9 9 9%,1.0m L/m i n;g) 電離方式:E I;h) 電離能量:7 0e V;i) 質(zhì)量掃描范圍:5 0a m u 4 5 0a m u;j) 測(cè)定方式: 選擇離子監(jiān)測(cè)方式;k) 進(jìn)樣方式: 不分流進(jìn)樣,2.0m i n后開(kāi)閥;l) 進(jìn)樣量:1.0L;m) 溶劑延遲:3m i n。1 2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中, 測(cè)得相應(yīng)的峰面積, 以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、 以峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1 2.6 試樣溶液的測(cè)定將試樣待測(cè)液注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中, 測(cè)得相應(yīng)的峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測(cè)液中被測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值超出儀器檢測(cè)的線性范圍, 可適當(dāng)稀釋后測(cè)定。1 2.7 定性如果試樣待測(cè)液中檢出的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相一致, 且選擇離子的相對(duì)豐度與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的相對(duì)豐度兩者之差不大于允許相對(duì)偏差( 相對(duì)豐度5 0%, 允許1 0%偏差;5 0%相對(duì)豐度2 0%, 允許1 5%偏差;1 0%相對(duì)豐度2 0%, 允許2 0%偏差; 相對(duì)豐度1 0%, 允許5 0%偏差) , 則可判斷試樣中存在對(duì)應(yīng)的被測(cè)物。在上述色譜條件下, 總離子流圖參見(jiàn)圖B.1。參考保留時(shí)間和特征離子見(jiàn)表4。G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 67 表4 多環(huán)芳烴的參考保留時(shí)間和特征離子序號(hào)化合物名稱保留時(shí)間m i n選擇離子定量離子定性離子豐度比1萘4.0 11 2 86 4,1 0 21 0 0682苊烯5.8 21 5 26 3,7 61 0 051 73苊6.0 41 5 31 5 4,7 61 0 09 42 04芴6.6 61 6 61 6 5,8 21 0 09 295菲7.9 81 7 88 9,1 5 21 0 0996蒽8.0 51 7 88 9,1 5 21 0 01 077熒蒽1 0.3 12 0 21 0 1,2 0 01 0 01 32 28芘1 0.8 52 0 21 0 1,2 0 01 0 01 62 49苯并a 蒽1 4.5 02 2 81 1 4,2 2 61 0 01 22 31 01 4.6 42 2 81 1 4,2 2 61 0 01 03 61 1苯并b 熒蒽1 8.3 82 5 21 2 6,2 5 01 0 01 51 61 2苯并k 熒蒽1 8.4 82 5 21 2 6,2 5 01 0 01 62 01 3苯并a 芘1 9.5 12 5 21 2 6,2 5 01 0 01 62 21 4茚苯1,2,3 -c,d 芘2 3.3 52 7 61 3 8,2 7 71 0 01 92 21 5二苯并a,h 蒽2 3.4 72 7 81 3 8,2 7 61 0 01 23 01 6苯并g,h,i 苝2 4.1 42 7 61 3 8,2 7 71 0 02 42 31 3 分析結(jié)果的表述試樣中多環(huán)芳烴的含量Xi按式(2) 計(jì)算:Xi=iV10 0 0m10 0 0(2) 式中:Xi 試樣中多環(huán)芳烴的含量, 單位為微克每千克(g/k g) ;i 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣待測(cè)液中多環(huán)芳烴i的濃度, 單位為納克每毫升(n g/m L) ;V 試樣待測(cè)液最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;10 0 0 單位轉(zhuǎn)換;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) 。含量大于等于1 0g/k g時(shí), 保留三位有效數(shù)字; 含量小于1 0g/k g時(shí), 保留兩位有效數(shù)字。注:計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。1 4 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的2 0%。G