各類成分分析生物堿.ppt

第五章 各類成分分析,中藥分析教研室 王術(shù)玲 Tel: 35622505,生物堿* 皂苷* 黃酮* 蒽醌 揮發(fā)油,第五章 各類成分分析,一、概述 二、理化性質(zhì) *三、供試品溶液制備（提取、凈化） *四、鑒別：理化鑒別、TLC *五、含量測(cè)定：總成分、單體成分,第五章 各類成分分析,春花秋月何時(shí)了， 往事知多少！ 小樓昨夜又東風(fēng)， 故國不堪回首月明中。 雕欄玉砌應(yīng)猶在， 只是朱顏改。 問君能有幾多愁？ 恰似一江春水向東流！,虞 美 人 李煜,馬錢子,腰直不起，頭足相就，狀如牽機(jī)而死強(qiáng)直性驚厥,1988年奧運(yùn)會(huì) ，卡爾劉易斯 ，麻黃堿 1992年奧運(yùn)會(huì)，巫丹，士的寧 1992年奧運(yùn)會(huì) ，瑪麗喬費(fèi)爾南德斯 ，偽麻黃堿 1994年世界杯，馬拉多納，麻黃堿 2000年奧運(yùn)會(huì) ，拉杜坎，麻黃堿,生物堿與興奮劑,生物堿與毒品,偽麻黃堿,麻黃堿,冰毒,一、概 述,黃連：小檗堿、巴馬汀、藥根堿、表小檗堿,苦參：苦參堿、氧化苦化堿,益母草、延胡索、黃柏、貝母,麻黃：麻黃堿、偽麻黃堿,馬錢子：馬錢子堿、士的寧,第一節(jié) 生物堿,麻黃堿,小檗堿,1、結(jié)構(gòu)：C、H、O、N，堿性,二、理化性質(zhì),2、溶解性 親脂性：大多數(shù)，氯仿中溶解度最大 親水性：少，季銨型,二、理化性質(zhì),一般都易溶于酸水,3、沉淀反應(yīng)： 1）碘化鉍鉀（BiI3KI） 2）雷氏鹽 NH4Cr(NH3)2(SCN)4 3）苦味酸,干擾：蛋白質(zhì)、多肽、鞣質(zhì),沉淀特點(diǎn)：酸性水溶液（苦味酸在中性）中 沉淀常易溶于有機(jī)溶劑 沉淀有顏色,二、理化性質(zhì),4、光譜特征,小檗堿：225 、 270 、 331nm 366nm下 有熒光,麻黃堿：210nm,二、理化性質(zhì),1、有機(jī)溶劑提取法： 堿化+ CHCl3,士的寧的含量測(cè)定： P127 堿化+ CHCl3提取酸水 提堿化CHCl3萃取,三、供試品溶液的制備,2、氧化鋁柱色譜法： 益母草（藥典P203）,水蘇堿的薄層鑒別： 取本品3g 乙醇回流提取 上活性炭-氧化鋁柱 乙醇洗脫收集,三、供試品溶液的制備,3、離子交換樹脂法： 益母草流浸膏（藥典P280）,水蘇堿的含量測(cè)定： 取本品5g 鹽酸調(diào)pH12 加置強(qiáng)酸型陽離子樹脂柱 水洗脫（棄去） 氨水洗脫 收集,三、供試品溶液的制備,（一）理化鑒別 馬錢子散：馬錢子、地龍,取馬錢子散加濃氨試液三氯甲烷浸泡濾過濾液蒸干加稀鹽酸加碘化鉍鉀試液黃棕色沉淀,四、定性鑒別,（二）薄層鑒別 1、展開系統(tǒng)：乙二胺、氨水 P122,正丁醇-鹽酸-水（4:1:0.5）生物堿鹽,四、定性鑒別,2、對(duì)薄層板改性：12%NaOH溶液,例：黃連中生物堿 苯-EtOAc-MeOH-異丙醇-水 （6:3:1.5:1.5:0.3） 置氨水飽和的展開槽,2）顯色劑：,例：苦參：氧化苦參堿（藥典P141）,3、檢視： 1）365nm下看熒光 例：黃連：小檗堿,改良碘化鉍鉀 稀碘化鉍鉀+亞硝酸鈉乙醇液,四、定性鑒別,（一）總生物堿,1、酸堿滴定法：返滴法,2、分光光度法,直接測(cè)定法：小檗堿 比色法：苦味酸、雷氏鹽 P125,排除干擾：化學(xué)分離、柱色譜,五、含量測(cè)定,例：雷氏鹽比色法,B + NH4Cr(NH3)2(SCN)4 = BHCr(NH3)2(SCN)4 ,1、在酸性介質(zhì)中定量反應(yīng) 2、反應(yīng)物有顏色，其吸光度取決于硫氰酸鉻銨部分 3、反應(yīng)物不溶于水，易溶于丙酮,例：雷氏鹽比色法 P71,益母草口服液中生物堿的含量測(cè)定,測(cè)定方法： 1、沉淀過濾，溶于丙酮，直接測(cè)定A 2、濾除沉淀后，測(cè)定殘存的過量雷氏鹽，間接計(jì)算,又如：產(chǎn)婦康顆粒,1、HPLC：,離子抑制色譜：二乙胺、三乙胺 例：浙貝母 藥典P205,離子對(duì)色譜：SDS、辛烷基磺酸鈉 常加入緩沖鹽 例： HPLC測(cè)小檗堿,（二）單體成分,五、含量測(cè)定,乙腈-水（50：50） 每100ml含0.34g KH2PO4和0.17g SDS,牛黃千金散中鹽酸小檗堿,乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）,浙貝母中貝母甲素和貝母乙素,小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿,乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3:97）,流動(dòng)相緩沖鹽的pH值對(duì)藥物的保留行為有影響，甚至?xí)@著改變某些堿性藥物的保留行為如圖所示。,流動(dòng)相pH值對(duì)保留時(shí)間的影響 色譜柱：NucleodurC18 15cm4mm 流動(dòng)相：乙腈-10mM 碳酸氫銨50：50, A：pH=3.0 B：pH=10.0 檢測(cè)波長：240nm,pH=3.0,pH=10.0,流動(dòng)相pH值對(duì)保留時(shí)間的影響 色譜柱：NucleodurC18 15cm4mm 流動(dòng)相：梯度洗脫程序 A 乙腈-20mM 磷酸氫二銨, pH=2.5 B 乙腈-20mM磷酸氫二銨, pH=10.0 檢測(cè)波長：254nm,pH=2.5,pH=10.0,流動(dòng)相組成對(duì)藥物保留行為的影響 組成：生物堿1、2、3、4 檢測(cè)波長：280nm 色譜柱：Kromasil 15cm4.6mm 流動(dòng)相：A PiCB6流動(dòng)相-PICB7流動(dòng)相1：1 B PiCB6流動(dòng)相-PICB7流動(dòng)相4：6 PICB6流動(dòng)相：己烷磺酸鈉1.88g甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀釋至刻度 PICB7流動(dòng)相：庚烷磺酸鈉0.28g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用水稀釋至刻度,流動(dòng)相組成對(duì)藥物保留行為的影響 色譜柱：Kromasil 15cm4.6mm 檢測(cè)波長：280nm PICB6：己烷磺酸鈉1.88g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀釋至刻度。 PICB7：庚烷磺酸鈉0.28g 甲醇260ml置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀釋至刻度。,C PiCB6流動(dòng)相-PICB7流動(dòng)相1：1,D PiCB6流動(dòng)相-PICB7流動(dòng)相9：1,封尾技術(shù)：消除或屏蔽殘留Si-OH,技術(shù)1：小分子鍵合,技術(shù)2：較大空間位阻的異丙基或異丁基（R基團(tuán)）,2、TLCS：,五、含量測(cè)定,益母草：藥典P204,黃連：藥典P213 熒光掃描, 激發(fā)波長=366nm,顯色，=510nm測(cè)吸光度,士的寧：藥典P319 熒光淬滅掃描, s=254nm,黃 連,3、高效毛細(xì)管電泳法（HPCE）,原理：電場(chǎng)下溶液中不同荷電物質(zhì)遷移速度不同,五、含量測(cè)定,原因：管內(nèi)壁硅羥基解離釋放H+使溶液帶正電,五、含量測(cè)定,遷移速