（法醫(yī)學(xué)專業(yè)論文）廣西都安瑤族線粒體dna控制區(qū)及ystr多態(tài)性研究.pdf

法醫(yī) 2 0 0 1級(jí)劉瑩碩士論 文 第一部分 廣西都安瑤族線拉體d n a控制區(qū)多態(tài)性研究食 研究生劉瑩 導(dǎo)師陳國(guó)弟 到 教授 四川大學(xué)華西基袖醫(yī)學(xué) 與法醫(yī)學(xué) 院 四川成都 ( 6 1 0 0 4 1 ) 漪要 l 目 的 為 線 粒 體d n a ( m it o c h o n d r ia ) d n a , m t d n a ) 法 醫(yī) 學(xué) 應(yīng) 用提供群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)， 擴(kuò)大m t d n a 在個(gè)體識(shí)別中的應(yīng)用范圍。 方法 以 南方民族瑤族為研究對(duì)象，根據(jù) m t d n a控制區(qū)及周圍區(qū)域的序列設(shè)計(jì) 引物， 用p c r產(chǎn)物直接測(cè)序?qū)?， 0 5 份無(wú)關(guān)瑤族樣本m t d n a控制區(qū)進(jìn) 行了 測(cè)序， 通過(guò)s e q u e n c i n g a n a ly s is 3 .4和s e q / e d e 軟 件分析比 對(duì)， 得到的序列結(jié)果，計(jì)算瑤族m t d n a單倍型的識(shí)別率，并應(yīng)用m e g a 2 軟件對(duì)數(shù)據(jù)做進(jìn)化距離分析， 構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。 結(jié)果 對(duì)樣本的m t d n a 控制區(qū)序列進(jìn)行了 統(tǒng)計(jì)分析，共檢出 1 4 1個(gè)變異點(diǎn)， 平均變異數(shù) ， 0 . 5 個(gè)，發(fā)現(xiàn) 3處點(diǎn)異質(zhì)性。整個(gè)序列個(gè)體識(shí)別率為 0 .9 7 4 7 ，變異度為 0 .9 8 4 1 。除了h v i 、h vi i 及 h v i ii 外，發(fā)現(xiàn)瑤族 m t d n a控制區(qū)還存 在其它的相對(duì)高變區(qū)。瑤族 m t d n a控制區(qū)序列與其他民族相比，均存 在一定差異。 系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，瑤族大體出現(xiàn)5 個(gè)聚類簇， 每個(gè)聚類簇 各有特點(diǎn)。結(jié)論瑤族 m t d n a控制區(qū)檢出3 個(gè)點(diǎn)異質(zhì)性，并發(fā)現(xiàn)存在 其他相對(duì)高變區(qū)。 群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)提示瑤族與蒙古人種有較近的親緣關(guān) 系。本研究為法醫(yī)學(xué)及系統(tǒng)發(fā)育學(xué)研究提供了基礎(chǔ)的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。 關(guān)鍵詞】線粒體d n a ， 控制區(qū)，多態(tài)性，瑤族， 法醫(yī)學(xué) * 本研究為2 0 0 1年北京市科學(xué)技術(shù)委員會(huì) “ 線粒體 d n a測(cè)序技術(shù)在法醫(yī)學(xué)中的 應(yīng)用” 立項(xiàng)的 子課題。 第一部分廣西都安璐族線粗體d n a 控制區(qū)多態(tài)性研究 s e q u e n c e v a r ia t i o n o f m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n i ny a o e t h n i c g r o u p f r o m d u a n o f g u a n g x i g r a d u a t e y n g l i u t u t o r a s s o c i a t e p rof . gu o d i ch e n c o lle g e o f p r e - c l i n i c a l a n d f o r e n s ic m e d i c i n e s i c h u a n u n iv e rs it y c h e n g d u 6 1 0 0 4 1 , p r . c h in a a b s t r a c t o b j e c t iv e i n o r d e r t o o b t a in t h e d a t a o f s e q u e n c e v a r ia t io n o f y a o e t h n ic g r o u p m t d n a f r o m d u a n o f g u a n g x i a n d e x t e n d t h e a p p l ic a t io n s c o p e o f m t d n a i n id iv id u a l id e n t if ic a t io n . m e t h o d 1 0 5 u n r e la t e d i n d iv id u a ls o f y a o e t h n ic g r o u p w a s s e le c t e d a s t h e in v e s t ig a t e d o b j e c t . d ir e c t s e q u e n c in g o f d n a a m p lif ie d b y p c r w a s u s e d w it h t h e p r im e r s d e s ig n e d a c c o r d i n g t o t h e s e q u e n ce o f c o n t r o l r e g io n a n d t h e n e i g h b o r r e g io n . s e q u e n ces w e r e a n a ly z e d a n d c o m p a r e d b a s e o n s e q u e n c in g a n a ly s is 3 .4 a n d s e q / e d e s o f t w a r e . d p o f m t d n a in y a o e t h n ic g r o u p w a s c a lc u la t e d . m a g a 2 s o f tw a r e w a s a ls o e m p lo y e d t o a n a ly z e t h e g e n e t ic d is t a n ce b e t w e e n s a m p le s a n d c o n s t r u c t t h e p h y lo g e n e n t ic t r e e . r e s u l t 1 4 1 v a r ia t io n s it e w a s f o u n d . t h e m e a n n u m b e r o f b a s e p a i r w it h d iff e r e n ce w a s 1 0 . 5 . 3 s it e s o f p o in t h e t e r o p la s m y w e r e d e t e c t e d . t h e g e n e t ic d iv e r s 衍 o f p o p u la t io n s a m p le s a n d t h e d is c r im in a t i o n p o w e r w e r e 0 . 9 m t - 0 ( n t 1 6 0 3 0 - n t 1 6 4 8 1 ) : h 5 - ca t ggg gaa gc a ga t t t g- 3 l 5 . 下 丁 agc t a c c c c c a a g t gt - 3 ; 法醫(yī) 2 0 0 1 級(jí)夕 瑩 碩士論文 m t - 2 ( n t l 6 4 1 9 - n t l 6 5 6 9 - n t 2 7 0 ) : h 5 - c a a t a t c cc gc a c a a ga g t g- 3 l 5 一g g a a a g t g g c t g t g c a g a c a t - 3 ; m t - 3 ( n t l 3 2 - n t 4 4 4 ) : h 5 - c t t t g a t t c ct g c c t c a t c c - 3 l 5 - t t a g t t g gg g g g t g a c t g t t - 3 ; m t - 4 ( n t 3 7 4 - n t 6 7 2 ) : h 5 - c ac c a g c c t a a c c a g a t t t c- 3 l 5 ，一 ag a a a g g c t a g g a c c a a a c c t - 3 ; 2 . 2主要試劑: a m p l i t a q酶 ( p r o m e g a ) , d n t p ( p h a r m a c ia ) , wiz a r d p c r產(chǎn)物 純 化 試 劑 盒( p r o m e g a ) ; a g r o s e ( p r o m e g a ) ; b ig d y e t m t e r m in a t e v 2 .0 試劑盒( a b i ) ; 丙 烯酞 胺( p r o m e g a ) ; n , n 一 二甲 雙丙 烯酞 胺( p r o m e g a ) , 尿素 ( p r o m e g a ) ; t e m e d ( s e r v a ) ; 其余試劑均為國(guó) 產(chǎn)分析純。 3 .主要儀器設(shè)備 d n a序列分析儀 a b i 3 7 7 ( a b i ，美國(guó)) :p e 9 6 0 0 d n a擴(kuò)增儀 ( a b i ， 美國(guó)) ; 離心機(jī) ( s ig m a ，德國(guó)) ; 超凈z作臺(tái) ( e s c o ， 新加 坡) ; 小型潛水式凝膠電泳儀( a d v a n c e ， 日本) : 透射型紫外燈( b io - r e d , 美國(guó)) ;寶利來(lái)一次成像照相機(jī) ( 尸 o la r o id ， 美國(guó)) ; 干熱器 ( 日 e l lc o ，美 國(guó)) :微量可調(diào)加樣器 ( g ills o n ，法國(guó)) 。 4 .分析軟件 d a t a c o lle c t io n 軟件 ( a b i ，美國(guó)) ;s e q u e n c e a n a ly s is 3 .4 軟件 ( a b i ，美國(guó)) ; s e q / e d e t 匕 對(duì)軟件 ( a b i ，美國(guó)) ，m e g a 2( 美國(guó)) 。 第一部分廣西都安璐族線粗體d n a 控制區(qū)多態(tài)性研究 二、方法 ， .m t d n a提取 酚一 氯仿法( 見附錄2 ) 提取d n a ， 千燥后溶于， 0 0 闊t e 緩沖液中， - 2 0 保存?zhèn)溆谩?2 . m t d n a的 擴(kuò)增 每個(gè)樣本分別在5 個(gè)擴(kuò)增管中同時(shí)擴(kuò)增不同大小的5 個(gè)片段。 p c r 反應(yīng)體系為 5 0 闊 ，反應(yīng)混合物中包括以下成分:3 端及 5 端引物各 1 2 .5 p m o l , 1 0 x p c r緩沖液5 p 1 , 7 5 m m o l m g c l2 , 4 0 n m o l d n t p s , 2 u t a q d n a聚合酶及d n a模板約1 n g o 循環(huán)參數(shù)為:9 5 c 3 min 2 0 s ; 9 4 c 3 0 s , 5 5 v 3 0 s , 7 2 0c 1 mi n 3 0 s , 3 5 個(gè)循環(huán);7 2 0c 7 mi n o 3 . p c r擴(kuò)增產(chǎn)物的半定量 m t d n a p c r擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)2 %瓊脂糖凝膠( 含。 .5 %e b ) 電泳分離， 判斷 產(chǎn)物的 有 無(wú)， 并用已 知濃度d n a ( k 5 6 2 , 濃度為， o n g 扣 i ) 進(jìn)行 產(chǎn) 物d n a的半定量。電 極間距離1 5 c m ，加樣5 n i ( 4 p l 樣本， 0 . 8 p l 6 x lo a d in g b u f f e r ) 。電 泳條件:1 0 o v , 1 0 -1 5 m i n ; 電 極緩沖 液1 x t a e . 凝膠成像系統(tǒng)記錄結(jié)果。 4 . p c r擴(kuò)增產(chǎn)物的純化 ( 1 ) 將p c r 擴(kuò)增產(chǎn)物移至， 5 m 1 離心管內(nèi)， 加入1 0 0 u 1 純化緩沖 液 和， ml 純化樹脂， 室溫放置1 0 分鐘， 期間振蕩3 次， 每次振蕩 間隔 ，分鐘以上。 ( 2 )將wiz a r d 純化柱裝在3 m 1 注射器上， 拔除注射器栓， 移入d n a i 樹脂混合物，裝上栓子，緩慢推動(dòng)，使樹脂進(jìn)入純化柱。 法醫(yī)2 0 0 1 級(jí)劉瑩碩 士論 文 ( 3 ) 用2 m 1 8 0 % 異丙醇清洗純化柱。 ( 4 ) 將 純 化柱 移 至1 .5 m 1 的 離 心 管， 1 0 0 0 0 g 離 心2 分 鐘， 徹底 清除 異丙醇。 ( 5 ) 將純化柱 移至 新的， . 5 m 1 離 心管， 根 據(jù)瓊脂 糖凝膠小電 泳熒光亮 度加2 0 p l - 4 0 p l 消 毒去 離 子水， 調(diào)整濃 度在1 0 0 - 2 0 0 n g / p l 之m- 室溫放置5 分鐘后，1 0 0 0 0 g 離心2 0 秒， 移去純化柱。 ( 6 ) 純化后的d n a進(jìn)行半定 量 ( 方法同上) 。 4 或一 2 0 保存?zhèn)溆谩?5 . m t d n a的測(cè)序 5 . 9 測(cè)序反應(yīng) 反 應(yīng) 體系為2 0 訓(xùn) ， 反 應(yīng) 混合 物中 含: t e r m in a t o r r e a d y r e a c t io n m ix 8 .o p l , 5 或3 端引 物3 .2 5 p m o l , p c r 擴(kuò)增后產(chǎn) 物1 0 0 - 2 0 0 n g e 反應(yīng)條件為: 9 6 c 1 0 s , 5 0 0c 5 s , 6 0 0c 4 m in , 2 5 個(gè)循環(huán)。 5 . 2測(cè)序反應(yīng)后產(chǎn)物的 沉淀 將測(cè)序反應(yīng)后產(chǎn)物移入 1 . 5 m 1 的離心管內(nèi)， 加入無(wú)水乙醇 5 5 訓(xùn)和 2 m m的m g c 12 2 0 p l ， 振蕩混勻， 室溫靜置1 0 分鐘， 1 2 0 0 0 r p m離心1 6 分鐘，棄上清，干燥備用。 5 . 3聚丙烯酞胺凝膠電泳分離產(chǎn)物 見附錄 3 0 6 .序列分析 利 用s e q u e n c e a n a ly s is 3 .4 軟 件分 析原 始圖 象文 件， 使 用s e q / e d e 比對(duì)軟件， 將分析后得到的樣品序列結(jié)果與a n d e r s o n 序列進(jìn)行比 較， 找出變異堿基1 3 . 1 9 7 統(tǒng)計(jì)計(jì)算 第一 部分廣西都安璐族線粒體 d n a控制區(qū)多態(tài)性研究 按 照d p = 1 一 e f 2 ( f 為 單 倍 型 頻 率) ， 變 異 度( g e n e t ic d iv e r s ity ) = n ( 1 一 e f 2 ) / ( n - 1 ) ( n 表 示 群 體 樣 本 數(shù)) ， 標(biāo)準(zhǔn) 差s e = 2 e f - ( i : f fl / n ) 2 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算12 0 1 8 .系統(tǒng)樹的完成 采用n e ig h b o r j o in i n g m e t h o d ( n j ) 方法， 構(gòu)建基于1 0 5 個(gè)瑤族個(gè) 體d n a 序 列的 系 統(tǒng) 進(jìn) 化 樹， 操作由m e g a 2 11 3 1 軟 件 完成。 結(jié)果 一、 測(cè)序結(jié)果 1 . p c r擴(kuò)增及產(chǎn)物的半定量 2 % 瓊脂糖e b 凝膠證實(shí)， 0 5 份樣本全部成功擴(kuò)增，并進(jìn)行半定量。 擴(kuò)增產(chǎn)物必須經(jīng)過(guò)純化，以去除剩余的引物和 d n t p s以及其他可能影 響測(cè)序反應(yīng)的因子。圖 ， 一為擴(kuò)增產(chǎn)物純化前后 2 %瓊脂糖凝膠電泳照 片。 圖1 - 2 擴(kuò)增產(chǎn)物純化前后2 % 瓊脂糖凝膠電 泳圖 k為k 5 6 2 . 1 - - 6 道為未純化的各段擴(kuò)增產(chǎn)物，7 -1 2 道為純化后產(chǎn)物，m孔為m a r k e r . 2 . a b i - 3 7 7 序列分析儀測(cè)序掃描結(jié)果 ( 見圖1 -3 ) 法醫(yī) 2 0 0 1級(jí)劉瑩碩 士論文 參考文獻(xiàn): 1 . a n d e r s o n s , b a n k ie r a t , b a r r e l l b g , 以a l . s e q u e n c e a n d o r g a n iz a t io n o f t h e h u m a n m it o c h o n d r i a l g e n o m e . n a t u r e , 1 9 8 1 , 2 9 0 ( 5 8 0 6 ) : 4 5 7 - 6 5 . 2 . b a l l i n g e r s w, s h o f f n e r j m , h e d a y a e v , e t a l . m a t e rn a l ly t r a n s m itt e d d i a b e t e s a n d d e a f n e s s a s s o c ia t e d w it h a 1 0 .4 k b mit o c h o n d r ia l d n a d e le t io n . n a t g e n e t , 1 9 9 2 , 1 ( 1 ) : 1 1 - 5 . 3 . b a ll i n g e r s w, s h o f f n e r j m , g e b h a r t s , e t a l . m it o c h o n d r i a l d ia b e t e s r e v i s it e d n a t g e n e t , 1 9 9 4 , 7 ( 4 ) : 4 5 8 - 9 4 . l a m m in e n t , m a j a n d e r a , j u v o n e n v , e t a l . a m it o c h o n d h a l m u t a t io n a t n t 9 1 0 1 i n t h e a t p s y n t h a s e 6 g e n e a s s o c ia t e d w it h d e fi c i e n t o x i d a t iv e p h o s p h o ry la t io n i n a f a m i 扮w it h l e b e r h e r e d it a ry o 兩c n e u r o r e t in o p a t h y . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 5 , 5 6 ( 5 ) : 1 2 3 8 礴0 . 5 . k o b a y a s h i y , s h a r p e h , b r o w n n . s i n g l e - c e l l a n a ly s is o f in t e r cell u l a r h e t e r o p l a s m y o f rn t d n a i n l e b e r h e r e d it a ry o p t i c n e u r o p a t h y . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 4 , 5 5 ( 1 ) : 2 0 6 - 9 . 6 . l e s t i e n n e p , n e ls o n j , r ie d e r e r p , 以a l . n o r m a l m i t o c h o n d r i a l g e n o m e i n b r a i n f r o m p a t ie n t s w it h p a r k i n s o n s d is e a s e a n d c o m p le x i d e f e c t . j n e u r o c h e m , 1 9 9 0 , 5 5 ( 5 ) : 1 8 1 0 - z 7 . d i m o n t e d a . m it o c h o n d r i a l d n a a n d p a r k i n s o n s d is e a s e . n e u r o lo g y , 1 9 9 1 , 4 1 ( 5 s u p p l 2 ) : 3 8 - 4 2 . 8 . g r e e n b e r g b d , n e w b o ld ie , s u g in o a . i n t r a s p e c ifi c n u c le o t id e s e q u e n c e v a r i a b il it y s u r r o u n d in g t h e o 內(nèi)in o f r e p l ic a t i o n i n h u m a n m it o c h o n d r ia l d n a . g e n e t , 1 9 8 3 , 2 1 : 3 3 - 4 9 . 9 . c r e s p il l o m , l u q u e j a , p a r e d e s m , e t a l . m i t o c h o n d r i a l d n a s e q u e n c e s f o r 1 1 8 in d iv id u a ls f r o m n o r t h e a s t e rn s p a in . i n t j l e g a l m e d , 2 0 0 0 , 1 1 4 ( - 2 ) : 1 3 0 - 2 1 0 . p e r e i r a l . t h e s la v e t r a d e t o e u r o p e a n d b r a z i l f r o m t h e w e s t e n a n d e a s t e n a f r ic a c o a s t s a s r e g is t e r e d i n t h e m t d n a p o o l . p r o g r a m a n d a b s t r a c t s 1 9 i n t e r n a t i o n a l c o n g r e s s i s f g , 2 0 0 1 . 1 1 . c a r r a c c d o a , b a r w, l i n c o l n只以 a l . d n a c o mm i s s io n o f t h e i n t e rna t i o n a l s o c ie t y f o r f o r e n s ic g e n e t i c s : g u id e l in e s f o r m it o c h o n d r ia l d n a t y p i n g , f o r e n s ic s c i i n t , 2 0 0 0 , 1 1 0 : 7 9 - 8 5 . 第一部分廣西都安瑤族線粒體d n a 控制區(qū)多態(tài)性研究 1 2 . t u lly g , b a r w, b r in k m a n n b , e t a l. c o n s id e r a t io n s b y e u r o p e a n d n a p r o f i l i n g ( e d n a p ) g r o u p o n t h e w o r k i n g p r a c t ices , n o m e n c la t u r e a n d i n t e r p r e t a t i o n o f m it o c h o n d r ia l d n a p r o f il e s . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 1 , 1 2 4 : 8 3 - 9 1 . 1 3 . wils o n m r , a l la r d m w, m o n s o n k , e t a l . r e c o m m e n d a t i o n s f o r c o n s is t e n t t r e a t m e n t o f le n g t h v a r i a n t s i n t h e h u m a n m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 2 , 1 2 9 : 3 5 - 4 2 . 1 4余躍生， 姚永剛， 孔慶鵬， 等. 貴州水族人群線粒體d n a序列多態(tài)分析一 遺傳 學(xué)報(bào)， 2 0 0 1 , 2 8 ( 8 ) : 6 9 1 - 6 9 8 . 1 5袁志剛， 姚永剛， 馬志雄， 等. i 一 西壯族人群線粒體d n a 序列遺傳多態(tài)性分析. 遺傳學(xué)報(bào)， 2 0 0 1 , 2 8 ( 2 ) : 9 5 - 1 0 2 . 1 6 一 李永念， 左麗， 文波， 等. 中國(guó) 布依族人的起源及遷移初探一一 來(lái)自y染色體 和線粒體的線索. 遺傳學(xué)報(bào)， 2 0 0 2 , 2 9 ( 3 ) : 1 9 6 - 2 0 0 . 1 7錢亞屏， 褚嘉佑， 初正韜， 等. 應(yīng)用線粒體d n a d -lo o p 區(qū)遺傳多樣性分析云 南4 個(gè)少數(shù)民 族的 遺傳關(guān)系 . 遺傳學(xué)報(bào)， 2 0 0 1 , 2 8 ( 4 ) : 2 9 1 - 3 0 0 . 1 8 . 唐暉， 劉雅誠(chéng)， 馬 萬(wàn)山 ， 等， 北京 漢族群體 線粒體d n a高變區(qū)的 多 態(tài)性. 中國(guó) 法醫(yī)學(xué)雜志， 2 0 0 2 , 1 7( 1 ) :3 2 - 3 3 1 9 . s a la s a , r a s m u s s e n e m , l a r e u m 丫e t a l . f l u o r e s cen t s s c p o f o v e r l a p p i n g f r a g m e n t s ( f s s c p - o f ) : a h ig h ly s e n s it iv e m e t h o d f o r t h e s c r e e n i n g o f m it o c h o m d r ia l d n a v a r ia t io n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 1 , 1 2 4 ( 2 - 3 ) : 9 7 - 1 0 3 . 2 0 . m n e i , , f t a j i m a . d n a p o ly m o r p h is m d e t e c t a b le b y r e s t r i c t i o n e n d o n u c le a s e s . ge n e t i c s , 1 9 8 1 , 9 7 : 1 4 5 - 6 3 2 1 瑤族簡(jiǎn)史編寫組. 瑤族簡(jiǎn)史， 南寧: 廣西人民出版社. 1 9 8 3 年 2 2張有雋 瑤族歷史與文化 南 j : 廠 西人民出版社. 1 9 8 3 年. 2 3都安瑤族自治縣志編纂委員會(huì). 都安瑤族自治縣志_ 南寧; i - 西人民出版社. 2 0 0 1 . 2 4 . k - j . 薩 姆布魯克. d . w. 拉塞爾著. 黃 培堂等 譯. 分子克隆 實(shí) 驗(yàn) 指南， 第三 版 北京二 科學(xué)出版社 2 0 0 2 . 6 9 9 . 2 5 . l u n d b e r g k s , s h o e m a k e r d d , a e t a m s m ww, e t a 一h ig h - f id e l it y a m p l if i c a t io n u s i n g a t h e r m o s t a b le d n a p o ly m e r a s e is o la t e d f r o m 尸 y roc o c c u s f u r i o s u s . ge n e , 1 9 9 1 , 1 0 8 : 1 - 6 . 法醫(yī)2 0 0 1 級(jí)劉瑩碩士論 文 2 6 . m a tt i l a p , k o r p e l a j , t e n k a n e n不e t a l . f id e l it y o f d n a s y n t h e s i s b y t h e t h e r m o c o c c u s f t o r a l is d n a p o ly m e r a s e - a n e x t r e m e ly h e a t s t a b le e n z y m e w it h p r o o f r e a d i n g a c t iv it y . n u c le ic a c id s r e s , 1 9 9 1 , 1 9 : 4 9 6 7 - 4 9 7 3 2 7 . s a n g e r f , n ic k le n s , c o u ls o n a r . d n a s e q u e n c in g w it h c h a in - t e r m in a t in g i n h i b it o r s . p r o c n a t l a c a d s c i u s a , 1 9 7 7 , 7 4 ( 1 2 ) : 5 4 6 3 - 7 . 2 8 . c a r r a c e d o a , a lc j a e d , d u p u y b , e t a l . r e p r o d u c ib i lit y o f m t d n a a n a ly s is b e t w e e n la b o r a t o r ie s : a r e p o r t o f t h e e u r o p e a n d n a p r o fi l i n g g r o u p ( e d n a p ) . f o r e n s i c s c i i n t , 1 9 9 8 , 9 7 : 1 6 5 - 1 7 0 . 2 9 . g a b r ie l m n , c a llo w a y c d , r e y n o ld s r l , e t a l . p o p u la t i o n v a r ia t io n o f h u m a n m it o c h o n d r i a l d n a h y p e rv a r ia b le r e g io n s i a n d 1 1 i n 1 0 5 c r o a t i a n in d iv id u a l d e m o n s t r a t e d b y i m m o b i l iz e d s e q u e n c e - s p e c if ic o l ig o n u c l e o t id e p r o b e a n a ly s is . c r o a t m e d j , 2 0 0 1 , 4 2 ( 3 ) : 3 2 8 - 3 5 . 3 0 . r o s s p l , l e e k , b e l g r a d e r只 d i s c r i m i n a ti o n o f s i n g le - n u c l e o t id e p o ly m o r p h i s m s i n h u ma n d n a u s i n g p e p t id e n u c le ic a c id p r o b e s d e t e c t e d b y m a l d i- t o f m a s s s p e c t r o m e t ry . a n a l c h e m , 1 9 9 7 , 6 9 ( 2 0 ) : 4 1 9 7 - 2 0 2 . 3 1 . v a n d e n b o s c h b j , d e c o o r f , s c h o lt e h r , e t a l . m u t a t i o n a n a ly s is o f t h e e n t i r e m i t o c h o n d r i a l g e n o m e u s i n g d e n a t u r i n g h ig h p e rf o r m a n c e l iq u id c h r o m a t o g r a p h y . n u c le ic a c id s r e s , 2 0 0 0 , 2 8 ( 2 0 ) : e 8 9 . 3 2 . v ig i la n t l , p e n n i n g t o n r , h a r p e n d i n g h , 以a l . m it o c h o n d r ia l d n a s e q u e n c e s i n s i n g le h a i r s f r o m a s o u t h e r n a f r i c a n p o p u la t io n . p r o c . n a t l . a c a d . s c i . u s a , 1 9 8 9 , 8 6 ( 2 3 ) : 9 3 5 0 - 5 4 3 3 . 馬萬(wàn)山、唐暉、劉雅誠(chéng)等 中國(guó)海南黎族群體 m t d n a控制區(qū)多態(tài)性. 中國(guó)法 醫(yī)學(xué)雜志，2 0 0 3 , 1 8 ( 1 ) : 4 1 一 2 3 4唐暉著， 法醫(yī)線粒體 d n a分型及中國(guó)不同民族多 態(tài)性研究t 博十論文】 ， 侯一 平教授指導(dǎo). 3 5 . 美 m a s a t o c h i n e i, s u d h ir k u m a r 著，呂 寶忠等譯 分子 進(jìn) 化與 系統(tǒng)發(fā)育. 北 京: 高等教育出版社. 2 0 0 2 , 6 9 3 6曹顯明 t . 克松. 貴州 8個(gè)民族 6種不對(duì)稱行為特征的群體遺傳學(xué)研究. 黔南 l i : 族醫(yī)專學(xué)報(bào). 2 0 0 2 , 1 5 ( 3 ) : 1 2 5 - 1 2 8 3 7 . 吳融四_ 瑤族體質(zhì)形態(tài)的初步研究. 見: 中國(guó)人類學(xué)學(xué)會(huì)編， 中國(guó)八個(gè)民族體 質(zhì)調(diào)杏報(bào)告昆明:昆明人民出版社 1 9 8 2 第一部分廣西都安瑤族線拉體 d n a控制區(qū)多態(tài)性研究 吳立撲主編. 中國(guó)西南少數(shù)民 族皮紋學(xué). 貴州: 貴州科技出 版社， 1 9 9 1 . k o y a m a h , iw a s a m , m a e n o y , 以a l , m it o c h o n d r ia l s e q u e n c e h a p lo t y p e i n noou 33 t h e j a p a n e s e p o p u la t i o n . f o r e n s i c s c i i n t , 2 0 0 2 , 1 2 5 : 9 3 - 9 6 . 4 0 . a n n e b a a s n e r , b u r k h a r d m a d e a . s e q u e n c e p o ly m o r p h is m o f t h e m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g i o n i n 1 0 0 g e r m a n c a u c a s ia n s . j f o r e n s ic s c i , 2 0 0 0 , 4 6 ( 6 ) : 1 3 4 3 4 1 . m o u n t a i n j l , h e b e rt j m , b h a t t a c h a r y y a s , e t a l . d e m o g r a p h ic h i s t o ry o f i n d i a a n d m t d n a - s e q u e n c e d iv e r s it y . a m . j . h u m. g e n e t , 1 9 9 6 , 5 6 : 9 7 9 - 9 9 2 4 2 . l u t z s , j o a c h i m h , h e iz m a n n wj , e t a l . m it o c h o n d r ia l h e t e r o p l a s m y a m o n g m a t e r n a l ly r e l a t e d i n d iv id u a ls . i n t j l e g a l m e d , 2 0 0 0 , 1 1 3 : 1 5 5 - 1 6 1 4 3 . t u ll y l a , p a r s o n s t j , s t e ig h n e r r j , e t a l . a s e n s it iv e . d e n a t u r i n g g r a d ie n t - g e l e le c t r o p h o r e s i s a s s a y r e v e a l s a h ig h f r e q u e n c y o f h e t e r o p la s m y in h y p e r v a r ia b le r e g i o n 1 o f t h e h u m a n m t d n a c o n t r o l r e g io n a m j h u m g e n e t , 2 0 0 0 , 6 7 ( 2 ) : 4 3 2 - 4 3 . 4 4 . h u h n e j , p f e iff e r h , b r i n k m a n n b . h e t e r o p l a s m i c s u b s t it u t i o n s i n t h e m it o c h o n d r ia l d n a c o n t r o l r e g io n i n m o t h e r a n d c h il d s a m p le s . i n t j l e g a l m e d , 1 9 9 9 , 1 1 2 ( 1 ) :2 7 - 3 0 . 4 5 . n ic k e r s o n d a , t o b e v o , t a y lo r s l . p o ly p h r e d : a u t o m a t i n g t h e d e t e c t io n a n d g e n o t y p i n g o f s in g l e n u c l e o t i d e s u b s t it u t io n s u s in g fl u o r e s c e n c e - b a s e d r e s e q u n c i n g . n u c le i c a c id s r e s , 1 9 9 7 , 2 5 : 2 7 4 5 - 5 1 4 6 . c a llo w a y c d , r e y n o ld s r l , h e r r in g l j r , e t a l . t h e f r e q u e n c y o f h e t e r o p l a s m y i n t h e h v l r e g i o n o f m t d n a d iff e r s a c r o s s t i s s u e ty p e s a n d in c r e a s e s w it h a g e . a m j h u m g e n e t , 2 0 0 0 , 6 6 ( 4 ) : 1 3 8 4 - 9 7 . 4 7 . s ig u r 6 a r d e tt i r s ig r d n , a g n a r h e l g a s in , j e ff r e y r . g u l c h e r . t h e m u t a t io n r a t e i n t h e h u m a n m t d n a c o n t r o l r e g io n . a m. j . h u m. g e n e t , 2 0 0 0 , 6 6 : 1 5 9 9 - 1 6 0 9 4 8 . b e n d a l l k e , m a c a u l a y v a , s y k e s b c . v a r i a b l e le v e ls o f a h e t e r o p la s m i c p o i n t m u t a t io n i n i n d iv id u a l h a ir r o o t s . a m j h u m g e n e t , 1 9 9 7 , 6 1 ( 6 ) 1 3 0 3 - 8 4 9 . iv a n o v p l , wa d h a m s m j , r o b y r k , e t a l . m i t o c h o n d r i a l d n a s e q u e n c e h e t e r o p l a s m y i n t h e g r a n d d u k e o f r u s s ia g e o r g ij r o m a n o v e s t a b lis h e s t h e 一3 a- 法 醫(yī) 2 0 0 1 級(jí) 劉瑩碩 士論文 a u t h e n t ic it y o f t h e r e m a in s o f t s a r n ic h o la s n a t g e n e t 1 9 9 6 , 1 2 ( 4 ) : 4 1 7 - 2