




已閱讀5頁,還剩42頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 1 中英文縮略對照 英文縮寫 英文全稱 中文全稱 n 外授精及胚胎移植 細(xì)胞集落刺激因子 細(xì)胞集落刺激因子受體 組人粒細(xì)胞集落刺激因子 噬細(xì)胞集落刺激因子 細(xì)胞 /巨噬細(xì)胞集落刺激因子 酸鹽緩沖液 -(4,52,5甲 基偶氮唑鹽比色法 甲基亞砜 牛血清 式細(xì)胞儀 介素 二醇 P 激素 泡刺激素 體生成素 體泌乳素 木精 疫組織化學(xué) 氨基聯(lián)苯胺 宮內(nèi)膜基底 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 2 第一章 前言 胚胎種植是人類輔助生殖過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),它依賴于正常的內(nèi)分泌激素、多種細(xì)胞因子之間相互協(xié)調(diào)而建立的胚胎發(fā)育與子宮內(nèi)膜容受 狀態(tài)的同步化過程。炎癥和損傷使子宮內(nèi)膜的 組織結(jié)構(gòu)和功能完整性受到破壞,引起內(nèi)膜過薄、對雌激素及血管活性藥物反應(yīng)差 ,宮壁組織瘢痕粘連、宮腔變形、狹窄和閉鎖,降低了子宮內(nèi)膜的容受性,因此選擇一種有效的改善子宮內(nèi)膜容受性的措施對于促進(jìn)胚胎種植,改善 娠率具有重要的意義 。目前, 輸卵管因素 是造成不孕癥 的主要 病 因, 一般由女性生殖系統(tǒng)的炎癥所致。 病原微生物沿陰道上行經(jīng)宮頸蔓延至子宮內(nèi)膜,長期慢性的炎癥,可引起子宮內(nèi)膜基底 終不僅引起輸卵 管的炎癥、粘連,功能障礙,也影響了內(nèi)膜的功能,造成胚胎著床障礙 。 哺乳動物的成功妊娠中具有重要的作用,參與了人卵泡、胎盤及子宮內(nèi)膜的生長、發(fā)育,是胚胎種植過程中 不可或缺的一種細(xì)胞因子,它通過升高外周血中的白細(xì)胞,增強(qiáng)了機(jī)體的 免疫 力。 對紐約 2 家獨立的心的 4 位患者進(jìn)行了前瞻性同期研究, 4 位行 療的患者,體外受精 現(xiàn)有治療方法進(jìn)行過多種嘗試后,內(nèi)膜厚度仍極不達(dá)標(biāo),于是使用 陰道對內(nèi)膜行灌注治療,測量指標(biāo)為移植日子宮內(nèi)膜厚度及妊娠率,結(jié)果發(fā)現(xiàn),對之前對于激素及血管舒張藥物不敏感的患者使用 腔灌注后,其子宮內(nèi)膜至少長至 74 位患者胚胎移植后,均獲得妊娠,其中 1 位患者因?qū)m角妊娠而終 止妊娠。灌注后大約 48 小時內(nèi),子宮內(nèi)膜增長至最小移植厚度。這提示我們 解決目前棘手的內(nèi)膜過薄 、行滲出性改變、 胎反復(fù)種植失敗 問題的一個新方法,但其 改善 子宮內(nèi)膜的機(jī)理 仍需進(jìn)一步研究。 粒細(xì)胞集落刺激因子 ( 是一種糖蛋白,含有 174 個氨基酸,分子量約為 20000。人 位于 17 號染色體的 的單個基因編碼,長約2.5 5 個外顯子和 4 個內(nèi)含子 ,其蛋白質(zhì)由 174 個氨基酸組成 ,含 30 個氨基酸的疏水信號系列 1。 要由 活化單核或巨噬細(xì)胞分泌,但在適當(dāng)?shù)拇碳は驴捎蓹C(jī)體多種細(xì)胞產(chǎn)生,這其中包括一些腫瘤細(xì)胞 ,可刺激骨髓中性粒前體細(xì)胞的增殖及分化 ,促進(jìn)中性粒細(xì)胞的成熟及功能 2。對于成熟的中性粒細(xì)胞,蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 3 促進(jìn)其游走、吞噬、產(chǎn)酶、釋放活性氧、殺菌能力和對外來異物的粘著作用,還可動員成熟中性粒細(xì)胞從骨髓進(jìn)入外周。 目前臨床 要用于預(yù)防和治療腫瘤放療或化療后引起的白細(xì)胞減少癥、治療骨髓造血機(jī)能障礙及骨髓增生異常綜合征、預(yù)防白細(xì)胞減少可能潛在的感染并發(fā)癥、以及使感染引起的中性粒細(xì)胞減少的恢復(fù)加快。 機(jī)體抗感染機(jī)制中起著重要的作用,早在 1991 年 , 批準(zhǔn)了 劑用于各種非髓性腫瘤的骨髓抑制性化療中 , 以避免因粒細(xì)胞減少癥引起的感染和死亡,此外 ,應(yīng)用于其他原因引起的免疫缺陷患者 , 可刺激嗜中性粒細(xì)胞的分化增殖 ,起到提高抗感染能力的作用 3, 4。也有研究 5表明 有抗細(xì)胞凋亡及抑制炎癥反應(yīng)的作用 。 目前 , 臨床應(yīng)用主要有以下幾方面 3 用于骨髓移植治療免疫性疾?。鹤泽w外周造血干細(xì)胞移植,應(yīng)用 重組人粒細(xì)胞集落刺激因子( 將患者造血干細(xì)胞動員至外周血 , 并經(jīng)過采集分選等處理后重新輸回患者 ,使其造血和免疫重建;用于各種腫瘤 ,如急性白血病的化療和嚴(yán)重粒細(xì)胞減少癥;用于非血液系統(tǒng)腫瘤的治療和治療感染性疾?。?于心肌保護(hù)和神經(jīng)保護(hù)有功效 。 較高同源性,具有相似的生理作用及功能, 近幾年有文獻(xiàn) 9, 10報道 創(chuàng)面、潰瘍的愈合也有很好的療效,具有促進(jìn)粘膜細(xì)胞增殖的作用。不同濃度 胎兒口腔粘膜成纖維細(xì)胞的增殖及 成有刺激作用,在 80ng/成纖維細(xì)胞生長達(dá)到最佳狀態(tài),可能機(jī)制為 卵巢顆粒細(xì)胞、睪丸 胞、胎盤、子宮內(nèi)膜細(xì)胞中均有表達(dá),可能參與了人卵泡顆粒細(xì)胞、胎盤及子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長、發(fā)育的調(diào)節(jié),也是胚胎著床的調(diào)節(jié)因子之一 11。小鼠研究 12表明一定濃度的 通過旁分泌方式調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞活化數(shù)目,調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜蛻膜化,利于胚胎著床,但其具體 機(jī)制尚不清楚。 此外,有研究發(fā)現(xiàn) 13 支氣管哮喘、慢性阻塞性肺病、膿毒血癥、結(jié)腸炎等疾病均有不同程度的治療作用,在腦、腎缺血再灌注中能夠促進(jìn)血管的生成。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 4 圖 圖 2 生物活性圖 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 5 圖 3. 神經(jīng)細(xì)胞 的 作用機(jī)制圖 圖 4 白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 6 對健康男子進(jìn)行的靜脈點滴及皮下注射給藥( 1 g/的研究結(jié)果表明:靜滴 30 ,其 為 h,并有隨劑量的增加而延長的傾向,藥時曲線下面積為 ngh/下注射,血藥峰濃度出現(xiàn)于給藥后 h, 為 時曲線下面積為 ngh/物利用度是 下注射 4 h 以后,血藥濃度比同一時間靜滴時為高。靜滴或皮下注射連續(xù)給藥 6 h,血藥濃度變化均與單次給藥時無明顯差異。無論哪種給藥方法及用量,給藥 48 h 后,血藥及尿藥濃度均在檢出界限以下 17。 能會有以下不良反應(yīng) 18: 1. 偶有皮膚 發(fā)紅、皮疹,有時會有食欲不振、惡心、嘔吐等消化道反應(yīng)及肝功能損害;還可引起骨痛、腰痛、胸痛等;還可能引起堿性磷酸酶,低密度脂蛋白升高及發(fā)熱、頭痛、倦怠、心悸、尿酸和肌酐升高等。 2. 對孕婦及早產(chǎn)兒、嬰兒的安全性尚未確認(rèn)。 3. 對本品或其它基因重組制品有過敏反應(yīng)的患者忌用本品。 4. 有藥物過敏史、有過敏體質(zhì)以及有肝、腎、心、肺功能重度障礙的患者,需慎用。臨床前研究表明,無論哪種給藥途徑,單次給予本品對大鼠、狗和猴的 在 3000 g/10 g/( kgd)連續(xù)靜注 4 周、 1 g/( kgd) 連續(xù)靜注 13 周無不良影響。 生物學(xué)作用是通過與效應(yīng)細(xì)胞表面特異性受體 ( 合而產(chǎn)生的。在髓祖細(xì)胞,髓性白血病細(xì)胞、成熟中性粒細(xì)胞、血小板、單細(xì)胞及某些 T, B 淋巴細(xì)胞均有不同密度的受體存在 19某些非造血細(xì)胞 , 如血管內(nèi)皮細(xì)胞、胎盤細(xì)胞、小細(xì)胞、肺癌細(xì)胞系及滋養(yǎng)層細(xì)胞等 , 也有 在 。 粒系祖細(xì)胞 數(shù)量隨著細(xì)胞的成熟而增加,人類成熟粒細(xì)胞表面有200 1 000 R/細(xì)胞,有一單一的高親力位點,其解離常數(shù) ( 值約為 200 500 ,交聯(lián)試驗表明 白分子量約為 130 000 150 000 道爾頓,僅需少量 合即可誘發(fā)最大 物效應(yīng)。 隆是 1990 年報告的, 分子克隆對闡明作用機(jī)理有極其重要的價值。人類 由 813 氨基酸組成的單一胯膜區(qū)的多肽鏈分子組成的,與小鼠 的 核酸水平有 源性,在氨基酸水平有 同源性,與 體之間的同源性相對小的多。 1 個胞外區(qū)、胯膜區(qū)及胞漿內(nèi)區(qū)組成,結(jié)構(gòu)分析表明, 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 7 息傳導(dǎo)蛋白等,其特點是胞外區(qū)有 4個保守的半胱氨酸殘基和一個 題序列 23。 胞外區(qū) 6 氨基酸組成的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu) ( 結(jié)構(gòu) ) ,是配體與受體結(jié)合的部位;緊接其后是 ( 97,在 的 N 端有一 個富含 列,其 C 端有 題序列, 缺失分析表明 是配體與受體結(jié)合所必需的結(jié)構(gòu),若無此區(qū)配體結(jié)合后不能形成寡聚結(jié)構(gòu),因此 結(jié)構(gòu)及 是 受體結(jié)合所必不可少的區(qū)域。 與胯膜區(qū)之間 ( 310由 3 個重復(fù)的 型纖維蛋白結(jié)構(gòu) ( 區(qū) ) 組成。 胞內(nèi)區(qū)由 183 成, 種突變化的研究表明:近膜區(qū)的 55 增殖及生存信號轉(zhuǎn)導(dǎo)所必須的,該區(qū)域內(nèi)有兩個功能亞區(qū),稱為 基, 亞基中有很強(qiáng)的保守性,且都參與細(xì)胞增殖及生存信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。之后的 30 56,有顯著擴(kuò)大受體介導(dǎo)的有絲分裂信號的作用,提示該區(qū)內(nèi)可能存在另外的功能亞區(qū)。 內(nèi) 8 轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞成熟信號必需的區(qū)域。近年來發(fā)現(xiàn),該區(qū)域也是 導(dǎo)的細(xì)胞凋亡所必不可少的區(qū)域,在髓系細(xì)胞中能抑制增殖信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)。這一區(qū)域內(nèi)有一保守序列稱為 樣存在于 號傳導(dǎo)蛋白 , 能誘導(dǎo)正常小鼠骨髓粒細(xì)胞集落的形成,并能誘導(dǎo) 血病細(xì)胞向成熟細(xì)胞分化,說明區(qū)可能通過與之相關(guān)的特異的細(xì)胞底物直接參與了調(diào)控細(xì)胞成熟的過程24。 迄今為止,已發(fā)現(xiàn) 5 種不同類型的 異構(gòu)體 ( ,主要是由于 同的剪接方式造成的,各種變構(gòu)體的生物學(xué)作用及其表達(dá)的調(diào)控目前尚不十分明確。 5發(fā)現(xiàn) 1 例 因上有 1 個 突變,而使 胞 異體的表達(dá)明顯增加,而變化了的 能轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞成熟的信號,只能傳導(dǎo)增殖信號。推測白血病的發(fā)生與 突變有一定關(guān)系。先天性粒細(xì)胞缺乏的患者也發(fā)現(xiàn)類似 常的情況,因此對各種 不同細(xì)胞表達(dá)情況的研究對揭示粒細(xì)胞性疾病的發(fā)病機(jī)理有重要的意義。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 8 第二 章 料與方法 例資料 選擇內(nèi)膜對雌激素及血管活性藥物反應(yīng)極差,至少 3 個周期監(jiān)測示內(nèi)膜厚度未超過 0.7 子宮內(nèi)膜基底完全低回聲,之前有過 1 次或多次因內(nèi)膜因素 敗的患者共 60 例行 腔灌注治療,其中 7 人既往孕早中期胚胎停育史;選擇同期內(nèi)膜情況相似患者 30 例作為對照。 2 組患者的年齡、不育時間、體質(zhì)量指數(shù)( 胚胎質(zhì)量及灌前內(nèi)膜評分均無統(tǒng)計學(xué)差異( P見表 1。 表 1 間斷停藥組與未停藥組一般情況 組別 n 年齡(歲) 不育 時間(年) kg/ 胚胎質(zhì)量 灌前內(nèi)膜評分 灌注組 60 照組 30 子宮內(nèi)膜回聲評分 在內(nèi)膜增生中晚期,若形態(tài)為 A 型,記 4 分, B 型 3 分, C 型 2 分,若因內(nèi)膜過薄呈線性,記 1 分;宮腔無積液,記 1 分,存在宮腔積液,記 0 分;縱切位暴露全子宮,基底低回聲面積 1/3,記 4 分,介于 1/3 與 2/3 面積,記 3 分, 2/3記 2 分,完全低回聲時,記 1 分。各項相加的總分為子宮內(nèi)膜回聲評分。 療方案 根據(jù)患者的具體情況選擇在早卵 泡期、晚卵泡期,或圍排卵期進(jìn)行 者憋尿后取截石位于檢查床上,用窺陰器暴露宮頸;碘伏消毒外陰及陰道。腹超監(jiān)測子宮。使用移植管及 2 射器組合而成的灌注器抽吸00 2 白,山東齊魯制藥)。移植管經(jīng)陰道進(jìn)入宮頸口,穿過宮頸內(nèi)口即可將灌注液緩慢推入患者宮腔內(nèi),腹超監(jiān)測。陰道窺撤出陰器后,蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 9 患者保持截石位 10 下床即可。灌前監(jiān)測患者子宮內(nèi)膜的厚度、回聲、基底回聲、血流動力學(xué)等指標(biāo),灌注后連續(xù)監(jiān)測內(nèi)膜厚度及回聲的變化,灌注后48 h 再次監(jiān)測血流動力學(xué)指標(biāo),根 據(jù)內(nèi)膜的改善情況決定灌注的次數(shù),所有患者灌注次數(shù)為 1。根據(jù)內(nèi)膜情況,決定移植與否及移植日,選擇 2優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行移植,移植后 14 16 d 驗血 定生化妊娠,移植后 30 d 陰道超聲檢查確定臨床妊娠。所用儀器為美國 9 彩色多普勒超聲診斷儀,經(jīng)陰道探頭頻率范圍 5量部位:縱切位全面暴露子宮,觀察內(nèi)膜線性,前后壁基底區(qū)各選擇兩點測血流,待出現(xiàn)至少連續(xù) 4 個穩(wěn)定的波形圖后再作測量,取其平均值為該患者子宮基底區(qū)動脈的血流動力學(xué)值。 計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用 行統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗,如為正態(tài)分布,用均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差表示,組內(nèi)前后比較用自身配對 T 檢驗,組間比較采用重復(fù)測量方差分析。如為非正態(tài)分布,組內(nèi)前后比較采用非參數(shù) 號秩檢驗,組間比較采用 參數(shù)檢驗。 基底區(qū)動脈 8 h 后較前增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義( 基底區(qū)動脈 8 h 后較前增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義( 在灌后 96 h 內(nèi)膜厚度及基底回聲評分有統(tǒng)計學(xué)差異( 見表 6、 7,圖 5、 6。 表 6 圍排卵期灌注前子宮內(nèi)膜厚度、基底回聲及血流變化的比較 組別 n 灌注前 內(nèi)膜厚度 回聲 I 對照組 10 注組 19 7 圍排卵期灌注后 48 h 及 96 h 子宮內(nèi)膜厚度、基底回聲及血流變化的比較 組別 n 灌注后 48h 灌注后 96h 內(nèi)膜厚度 回聲 I 內(nèi)膜厚度 回聲 對照組 10 注組 19 與對照組相比較 *P灌注前相比較 P 5 不同時期子宮內(nèi)膜厚度及回聲評分變化圖 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 12 圖 6 不同時期子宮內(nèi)膜 動脈 化圖 組妊娠率的比較 在已行胚胎移植的患者中,灌注組的妊娠率為 35/56),對照組的妊娠率為 9/27),差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P 注前后血清細(xì)胞因子檢測 灌注組與對照組相比,血清 D 值增高, 低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義, D 值無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。則可反應(yīng)血清濃度,即:灌注組血清 度 增高 , 低 。 見表 8。 表 8 灌注前后兩組血清細(xì)胞因子 變化幅度表 對照組 注組 與對照組相比較 *P州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 13 論 胚胎著床既需要胚胎具有良好的發(fā)育潛能,又需要子宮內(nèi)膜具有良好的容受性,子宮內(nèi)膜容受性受激素、細(xì)胞因子、神經(jīng)免疫因素等多方面的調(diào)控。慢性子宮內(nèi)膜炎、子宮內(nèi)膜息肉、宮腔粘連的情況在 常有存在,使子宮內(nèi)膜在形態(tài)學(xué)、受體及相關(guān)因子的表達(dá)上發(fā)生變化 ,降低了其容受性。子宮內(nèi)膜超聲形態(tài)如厚度、回聲、基底回聲、血流灌 注等是反應(yīng)子宮內(nèi)膜狀況最直接的指標(biāo)。超聲顯示正常子宮內(nèi)膜種植窗時期厚度一般約在 910 容積不小于 2 超聲下內(nèi)膜面積多在 5 宮腔有效空間減少或內(nèi)膜過薄都會影響胚胎著床與發(fā)育,黃體中期時,子宮內(nèi)膜厚度 7 嚴(yán)重影響受精卵的著床 26。內(nèi)膜回聲變化應(yīng)均勻一致并具備與卵泡發(fā)育的同步性變化,否則會影響妊娠率27,在內(nèi)膜增生期可以觀察到清晰的 三線征 ,而中重度子宮內(nèi)膜炎,無論結(jié)核性或非結(jié)核性,其炎性滲出物往往造成內(nèi)膜回聲不均或基底低回聲,是影響成功妊娠的內(nèi)膜因素之一。此外, 子宮內(nèi)膜的血管活動呈周期性改變,子宮血流舒張末血流逐漸升高,黃體中期達(dá)高峰,阻力指數(shù) ( 明顯下降,利于胚胎著床。如果子宮動脈 持續(xù)增高 ,血管阻力高 , 組織血液灌注減少 , 子宮內(nèi)膜的血供不良 ,影響子宮內(nèi)膜的發(fā)育,胚胎則不能著床或著床后穩(wěn)定性差 28。 一種糖蛋白,主要作用于中性粒細(xì)胞系促進(jìn)其增殖、分化和活化,對成熟的中性粒細(xì)胞可促進(jìn)游走、吞噬、產(chǎn)酶、釋放活性氧、提高殺菌能力和對外來異物的粘著作用。臨床主要用于預(yù)防和治療腫瘤放化療后引起的白細(xì)胞減少癥、治療骨髓造血機(jī)能障礙及骨髓增生異常綜合征、 預(yù)防白細(xì)胞減少可能潛在的感染并發(fā)癥、以及促進(jìn)由感染引起的中性粒細(xì)胞減少的恢復(fù)。它與同類的巨噬細(xì)胞集落刺激因子( 粒細(xì)胞 生殖系統(tǒng)及粘膜修復(fù)中也起到一定的作用:對創(chuàng)面、潰瘍的愈合有較好的療效,具有促進(jìn)粘膜細(xì)胞增殖的作用 29。對于生殖系統(tǒng),集落刺激因子參與了卵泡發(fā)育及排卵過程 30、調(diào)節(jié)卵巢 31及調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞功能 32,調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜蛻膜化 33、促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖 34及胚胎種植 35。近年的研究發(fā)現(xiàn) 刺激周期可以改善低反應(yīng) 患者卵巢敏感性 38, 是卵子及胚胎種植潛能的一種標(biāo)記物 39,能夠降低復(fù)發(fā)性流產(chǎn)風(fēng)險 35,40,是預(yù)測 局的指標(biāo)之一 31,且對自蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 14 身免疫性疾病具有抑制作用 41。 34對 4 例內(nèi)膜反應(yīng)性差、雌激素及血管活性藥物抵抗的患者進(jìn)行了報道,發(fā)現(xiàn)當(dāng)子宮內(nèi)膜厚度小于 7 ,使用 300 ug/度的 行宮腔灌注對子宮內(nèi)膜厚度及容受性具有明顯的改善作用,提示 能具有促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞增生及刺激內(nèi)膜血管網(wǎng)再生等作用。我們的研究基于 的報道,選擇內(nèi)膜厚度不足、基底低回聲、反復(fù)種植失敗的患者作為研究對象,給予 宮腔灌注,在早卵泡期及晚卵泡期,對于子宮內(nèi)膜厚度及基底回聲改善明顯,圍排卵期宮腔灌注并不能改善內(nèi)膜的厚度,但對基底回聲仍然有效,可能與 激了子宮內(nèi)膜血管網(wǎng)中白細(xì)胞的生成及成熟,增加了抗炎作用有關(guān);對于子宮內(nèi)膜基底區(qū)血流動力學(xué)的影響,主要在于增加了基底區(qū)動脈的血流灌注,使得搏動指數(shù)增加,然而,并未使得阻力指數(shù)下降,但這只是灌注后 48 h 的血流,而我們尚未對多次灌注后、或胚胎移植日的血流動力學(xué)做監(jiān) 測,目前的研究結(jié)果顯示, 腔灌注可改善子宮內(nèi)膜的厚度及基底回聲,對于內(nèi)膜較薄、基底低回聲及胚胎反復(fù)種植失敗的患者具有較好的臨床治療效果。 受體( 人類子宮內(nèi)膜細(xì)胞上廣泛分布, 受體表達(dá)于人類子宮內(nèi)膜的上皮細(xì)胞,基質(zhì)細(xì)胞、白細(xì)胞及滋養(yǎng)層細(xì)胞 42, 43及蛻膜化組織等, 由巨噬細(xì)胞和 胞所分泌 44, 45。研究發(fā)現(xiàn)正常非妊娠婦女的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞可分泌少量的 而所分泌的 以在 88作用 下顯著增加。 認(rèn)為對妊娠滋養(yǎng)層細(xì)胞的增值具有促進(jìn)作用 46,據(jù)報道,蛻膜化的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞可產(chǎn)生豐富的非蛻膜化內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞只產(chǎn)生很少量 47從而解釋 腔灌注對于既往胚胎停育患者的具有治療作用的原因。有研究顯示過量的 通過抑制子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞向分泌泌乳素( 基質(zhì)細(xì)胞分化,從而抑制了8導(dǎo)的蛻膜化,而適量的 能夠促進(jìn)基質(zhì)細(xì)胞向分泌 加 分泌 50。由于子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞有多種分泌類型, 如普通基質(zhì)細(xì)胞,分泌 基質(zhì)細(xì)胞,分泌泌乳素的蛻膜化細(xì)胞等等,而 子宮內(nèi)膜容受性的調(diào)節(jié)可能是通過改變不同分泌類型的細(xì)胞數(shù)量,從而使內(nèi)膜分泌的各種生物活性因子達(dá)到更利于胚胎植入的狀態(tài)。這也可能蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 15 是 腔灌注可改善子宮內(nèi)膜狀況機(jī)制之一。 腔灌注能夠?qū)Υ萍に丶把芑钚运幬锏挚沟淖訉m內(nèi)膜的厚度、不明原因基底低回聲的內(nèi)膜有所改善,對子宮內(nèi)膜炎癥具有治療作用、促進(jìn)了子宮內(nèi)膜細(xì)胞增生以及改善了子宮內(nèi)膜容受性。 孕婦及早產(chǎn)兒、嬰兒的安全性尚未確認(rèn),現(xiàn)有的研究表明,在安全劑量下靜滴或 皮下注射 影響人體健康;無論哪種給藥方法及用量,給藥 48 h 后,血藥及尿藥濃度均在檢出界限以下。 脈及皮下注射時存在一些風(fēng)險及不良反應(yīng),可能引起骨痛、腰痛、胸痛、發(fā)熱、頭痛、倦怠、心悸等不適,偶有皮膚發(fā)紅、皮疹;食欲不振、惡心、嘔吐等消化道反應(yīng)及肝功能損害;偶爾可能引起堿性磷酸酶,低密度脂蛋白升高及尿酸和肌酐升高等。對于疼痛可口服消炎痛半片或肌注非那根半支對癥治療;其余不適無需特殊處理。在我們行宮腔灌注的 60 例患者中,有 1 人發(fā)生輕度骨痛,第二天緩解, 2 人出現(xiàn)眼睛紅腫干澀,休息后緩解, 2 人 有脫發(fā)癥狀,其余患者無不適。在經(jīng)過 復(fù)宮腔灌注治療后,對于內(nèi)膜狀況較前改善的患者擇期解凍胚胎進(jìn)行移植,取得了較好的妊娠率,由于本研究的樣本量有限,觀察時間尚短,期待今后大樣本的臨床實驗?zāi)軌蜻M(jìn)一步證實 子宮內(nèi)膜厚度、回聲的改善及對作用機(jī)制進(jìn)行更深入的研究。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 16 第 三 章 料與方法 織標(biāo)本的獲取 選取 2012 年 12 月 4 月在蘭州大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科因子宮肌瘤(肌壁間)行全子宮切除術(shù)的患者 6 例,平均年齡 40 歲,所有患者術(shù)前 3 個 月均未用過激素治療。在行全子宮切除術(shù)后,無菌條件下切取子宮內(nèi)膜,浸于加有雙抗(青霉素 +鏈霉素)的生理鹽水中, 30 運往實驗室進(jìn)行分離培養(yǎng)。 要儀器 高壓滅菌儀 日本 司 4 冰箱 青島海爾有限公司 冰箱 青島海爾有限公司 離心機(jī) 美國 司 搖床 北京恒奧生物科技有限公司 酶聯(lián)免疫檢測儀 美國 司 英國 司 倒置相差顯微鏡 日本 司 超凈工作臺 濟(jì)南鑫貝西生物有限公司 96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 美國 司 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板 美國 司 直徑 10胞培養(yǎng)皿 美國 司 細(xì)胞計數(shù)板 上海求精生化試劑儀器有限公司 粘附載玻片 上海臥宏科技有限公司 要試劑 12 培養(yǎng)基 美國 司 胎牛血清 美國 司 胰蛋白酶 美國 司 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 17 膠原酶 美國 司 國 司 鼠抗人 克隆抗體 美國 司 國 司 海譜振生物科技有限公司 抗人角蛋白抗體 美國 司 抗波形蛋白抗體 美國 司 劑盒 武漢博士德生物工程有限公司 色劑 武漢博士德生物工程有限公司 垢劑 美國 司 記 國 司 宮內(nèi)膜細(xì)胞組織塊培養(yǎng)法 用無菌生理鹽水沖洗內(nèi)膜組織 3,超凈臺內(nèi)在 60 養(yǎng)皿中用眼 科剪將內(nèi)膜組織剪碎至糊狀(約 1 加入適量 養(yǎng)液,用 1 入培養(yǎng)皿,再加入適量培養(yǎng)液將皿中的組織塊吹打均勻,置于 37 二氧化碳培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng) 3 天, 3 天后用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞貼壁情況。 宮內(nèi)膜細(xì)胞 分離及接種 基質(zhì)細(xì)胞分離 待子宮內(nèi)膜細(xì)胞貼皿底達(dá) 80%以上時進(jìn)行分離,用培養(yǎng)液沖洗皿底 3 次,加入 蛋白酶 3-5 化 3-5 顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,成懸浮細(xì)胞后,加入完全培養(yǎng)基吹打終止消化。收集細(xì)胞懸液至無菌刻度離心管中放入離心機(jī), 以 500 r/心 3 集上清液,主要為基質(zhì)細(xì)胞,以1200 r/心 10 上清液即得基質(zhì)細(xì)胞,加入適量完全培養(yǎng)基,重懸細(xì)胞以 1106/密度接種細(xì)胞。 腺上皮細(xì)胞分離 將消化的細(xì)胞懸液置于刻度離心管中放入離心機(jī) 500 r/心 3收集沉淀物,用無血清 養(yǎng)液漂洗后 800 r/心 5 上清,加入適量完全培養(yǎng)基 重懸細(xì)胞 1106/密度接種細(xì)胞;基質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞于培養(yǎng)箱中靜置 3 天后均貼壁。 疫組化法鑒定 子宮內(nèi)膜細(xì) 胞 用細(xì)胞角蛋白 波形蛋白抗體對腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞爬片免疫化蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 18 學(xué)染色,基質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞爬片 5 天后進(jìn)行免疫細(xì)胞組織化學(xué)染色鑒定。一抗為兔抗人 克隆抗體,濃縮液 1: 200 稀釋,鼠抗人 克隆抗體 1:200 稀釋,二抗為生物素標(biāo)記羊抗兔或小鼠 劑盒,試驗步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行,具體如下: 洗標(biāo)本 3 次 , 各 1 4%多聚甲醛固定 30 氣干燥 5 洗標(biāo)本 3 次 , 各 2 ) 孵育 1 次 20 洗標(biāo)本 3 次 , 各 2 3%色液體)孵育 1520 除內(nèi)源性過氧化酶活性, 洗標(biāo)本 3 次 , 各 2 加封閉血清(試劑 A 藍(lán)色液體)室溫孵育 1520 去,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗孵育(滴度 1: 200,濕盒) 4 過夜或 37 23 h; 洗標(biāo)本 3 次 , 各 3 加試劑 B(黃色液體)即二抗工作液孵室溫或 37 1520 洗標(biāo)本 3 次 , 各 3 滴加試劑 C(橙色液體),室溫或 37 孵育1520 洗標(biāo)本 3 次 , 各 3 色( A, B, C 依次各加一滴,避光,鏡下觀察至棕色 )約 310 來水充分沖洗,蘇木素復(fù)染,蘸后即刻取出,自來水洗返藍(lán),梯度酒精脫水 85, 95, 100%各 3 甲苯透明,蘸后即刻取出,用中性樹膠封片后顯微鏡觀察及拍片。 及 腺上皮細(xì)胞的影響 96 孔板中的細(xì)胞貼壁 24 h 后 , 棄去培養(yǎng)基 ,加入 新鮮 含血清的 養(yǎng)基 200 分別加入不同濃度的 度 分別 為 100 pg/200 pg/500 pg/ 1000 pg/并設(shè)有空白對照組 和 陰性對照組。繼續(xù)培養(yǎng) , 24 h 后加入 5mg/ 20孔 , 孵育 4 h, 棄去培養(yǎng)基 , 加入 37 孵育30速震蕩 10在酶聯(lián)免疫檢測儀 490 長測定吸收值 ( , 比較各組 并 繪制條圖 。 可反應(yīng) 細(xì)胞存活率表示 , 即細(xì)胞存活率 =( 實驗組 空白對照組 ) /(陰性 對照組 空白對照組 )*100%。 式細(xì)胞儀 檢測 兩組細(xì)胞 6 孔板中的細(xì)胞貼壁 24 h 后,棄 去培養(yǎng)基 ,加入 新鮮 含血清的 養(yǎng)基2 基質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞 培養(yǎng)孔中 分別加入 200 及 500 pg/48h 后棄去培養(yǎng)基,用不含血清 洗 2 遍,使用胰酶分別消化兩種細(xì)胞,于顯微鏡下觀察懸浮細(xì)胞達(dá) 80%以上時,終止消化。以 1200 r/ 800 r/速度分別離心基質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞,棄去上清,將沉淀物吹打均勻后,取 200 P 管中,分別加入 10 E 熒光標(biāo)記的 吹蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 19 打均勻,室溫放置 15,上機(jī)檢測。 組 細(xì)胞 3及 241 6 孔板中的細(xì)胞貼壁 24 h 后,棄去培養(yǎng)基 ,加入新鮮含血清的養(yǎng)基 2 質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)孔中分別加入 200 及 500 pg/48h 后棄去培養(yǎng)基,用不含血清 洗 2 遍, 進(jìn)行如下操作: 取 1. 6 孔板加入 500 上勻漿(邊勻漿邊暫停) 2. 轉(zhuǎn)入一新 中( 室溫裂解 10. 加氯仿 200 蕩混合(手搖劇烈),室溫靜置 5. 13000 離心 15. 轉(zhuǎn)移上層水相(吸 70%)到一新 中,加等體積異丙醇 ,振蕩混合,室溫靜置 10. 13000 離心 15. 倒掉上清,加 15%無水乙醇( 4保存),振蕩混合, 8000 離心 5. 倒掉上清,室溫或 37放置 20P 管倒置在濾紙上 )使 淀干燥 9. 加 30至 中 10. 在 60孵育 3 分溶解 逆轉(zhuǎn)錄 1. 暫離心 2. 將 11 和 1入 內(nèi),置于冰上,使 濃度為 加入 1輕混合均勻,短時間離心 3. 將反應(yīng)液置于 65 5上 1時間離心 4. 按順序加入: 5 400糖核苷酸酶抑制劑 10mm 2轉(zhuǎn)錄酶 1輕混合均勻,短時間離心 5. 將混合物置于 42, 60. 70加熱 5止上述反應(yīng),置于冰上 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 20 聚合酶鏈反應(yīng) . 物 上游引物 5 下 游引物 5 擴(kuò)增片段理論長度 326 3 上游引物 5 下 游引物 5 擴(kuò)增片段理論長度 262 上游引物 5 下游引物 5 擴(kuò)增片段理論長度 645 5反應(yīng)體系,冰上操作,稍后短時間離心 1 1 1 補至 25環(huán) : 94 5 94 45s 45s 72 45s (從第 2 步開始循環(huán) 30 ) 72 7 4 12h 束后置于冰上開始電泳 凝膠電泳 加樣 : 樣本孔:上樣緩沖液 6 物 10物 =1:5) , :取 果 宮內(nèi)膜細(xì)胞鑒定 用組織塊培養(yǎng)法聯(lián)合差速離心法對子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞及腺上皮細(xì)胞的分離蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 21 成功率均達(dá) 90%以上,子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞呈長梭形,腺上皮細(xì)胞形態(tài)較不規(guī)則,呈短梭形,蝌蚪狀、類圓形等。 見圖 7、 8。 圖 7 分離后的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 形態(tài) (倒置顯微鏡下 40 ) 圖 8 分離后的子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞 (倒置顯微鏡下 40 ) 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 22 用免疫組化法對子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定,基質(zhì)細(xì)胞對波形蛋白抗體呈陽性反應(yīng),可見胞漿中棕黃色顆粒;腺上皮細(xì)胞對角蛋白抗體呈陽性反應(yīng),胞漿顯示棕黃色。 見圖 9、 10。 圖 9 波形蛋白抗體對 子宮 內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的鑒定 圖 10 角蛋白抗體對 子宮內(nèi)膜 腺上皮 細(xì)胞的鑒定 宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖 基質(zhì)細(xì)胞 如表 9、 10、 11、圖 11 所示 , 基質(zhì)細(xì)胞在 004胞存活率無顯著性差異,體外培養(yǎng) 72h 時,細(xì)胞存活率下降,且與 度呈負(fù)相關(guān) 。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 23 表 9 加藥后 24 h 子宮內(nèi)膜 基質(zhì) 細(xì)胞 組別 pg/ 0 00 00 00 000 10 加藥后 48 h 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 組別 pg/ 0 00 00 500 1000 與對照組相比較 *P 11 加藥后 72 h 子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 組別 pg/ 0 00 200 500 1000 與對照組相比較 *P州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 善子宮內(nèi)膜狀況的臨床及機(jī)理研究 24 圖 11 同濃度及 作用 時間 的 子宮 內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞 增殖水平圖 腺上皮細(xì)胞 如表 12、 13、 14, 圖 12 所示 , 腺上皮細(xì)胞在 00pg/8h,細(xì)胞存活率最高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P 表 12 加藥后 24 h 子
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 以康復(fù)勝架構(gòu)為基礎(chǔ)構(gòu)建特殊教育教師評價體系研究
- 良性驚厥的健康宣教
- 瘢痕性倒睫的護(hù)理課件
- 腫瘤引起的腦積水護(hù)理
- 出血性腹膜炎個案護(hù)理
- 氣管憩室的健康宣教
- 髂窩結(jié)核的個案護(hù)理
- 《基于組態(tài)王的PLC電梯控制設(shè)計畢業(yè)設(shè)計》
- 癔癥性失明的護(hù)理課件
- 磁體表面處理新材料研究
- GB/T 1606-2008工業(yè)碳酸氫鈉
- 葛的栽培技術(shù)
- 《綠色建筑概論》整套教學(xué)課件
- 山東中醫(yī)藥大學(xué)2020-2021學(xué)年內(nèi)科護(hù)理學(xué)試題及答案2
- 2022年綿陽江油市社區(qū)工作者招聘考試模擬試題及答案解析
- 初中道德與法治學(xué)科教學(xué)經(jīng)驗交流
- 工程測量、定位放線控制點復(fù)核記錄表
- 申辦出入境證件的函
- 安全評估收費指導(dǎo)意見
- 全過程工程造價咨詢服務(wù)實施方案
- DB34-T 4289-2022城鎮(zhèn)檢查井蓋安裝管理技術(shù)規(guī)程
評論
0/150
提交評論