實驗三石蠟切片制作2ppt課件

.,石蠟切片制作-沖洗、脫水、包埋、切片,.,1、取材小鼠新鮮尸體上取脾、肌肉、肝等組織；2、固定將取出的材料投入預(yù)先配好的4中性甲醛固定液，使細(xì)胞的蛋白質(zhì)變性凝固，以防止細(xì)胞死后自溶或細(xì)菌分解，從而保持細(xì)胞本來的形態(tài)結(jié)構(gòu)；3、沖洗（本次實驗本步驟省略）,.,4、脫水將固定好的材料置于一般用由低濃度到高濃度的酒精脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份：75%乙醇，過夜85%乙醇，1h95%乙醇，1h100%乙醇，30min100%乙醇，30min100%乙醇，30min；5、透明再將組織塊按以下程序置于透明：二甲苯（酒精：二甲苯=1：1），30min二甲苯，30min二甲苯，30min；6、浸蠟將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中浸蠟：石蠟(二甲苯：石蠟=1：1)，30min石蠟，30min石蠟，30min；7、包埋用加熱的彎頭鑷子輕輕夾取已經(jīng)過浸蠟的組織塊，平正地置放于包埋底模的中央處，加入已溶化的石蠟，迅速放在冷臺上，待包埋底模內(nèi)的熔蠟?zāi)毯?，將一體的蠟塊和包埋盒從包埋模具內(nèi)取出，備用。,.,8、切片包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的方形或長方形，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊切面與切片刀刃平行，旋緊。通常切片厚度為4-7m，切出一片接一片的蠟帶，用毛筆輕托輕放在紙上；切取可供使用的蠟片，置與溫水內(nèi)展片。9、貼片與烤片采用水撈片法將展好的蠟片置于載玻片上，打開烤箱，設(shè)定60，烤片2小時，備用。,.,石蠟包埋的注意事項,1.作為包埋組織使用的石蠟不僅由于氣候的不同需要加以選擇，而且與組織的硬度也有密切關(guān)系，過硬的組織最好用硬度較高的石蠟包埋，反之，軟組織則應(yīng)以硬度較低的石蠟包埋。其熔點一般要求再60左右。2.包埋用石蠟加溫不可過高，以保持其不凝固為度，溫度過高容易將組織燙壞，使得組織變硬，變脆，并發(fā)生卷曲，收縮變形而不利于切片，甚至影響診斷。另外注意埋蠟的溫度和組織本身的溫度，兩者是否合適，溫度不一致常可造成組織與周圍石蠟脫裂的現(xiàn)象，而達(dá)不到包埋的作用。3.包埋應(yīng)注意組織病變面放在下面，并盡可能使組織放平，在不損傷組織的情況下可用鑷子輕壓。4.囊壁和消化道等組織包埋時更應(yīng)注意組織方位，應(yīng)將組織塊直立拉平，不要卷曲。5.相同組織如包埋于一個蠟塊時，除包平外，還要注意方向的一致，以利切片。6.多塊組織和碎組織包埋于一個蠟塊內(nèi)時，組織的排列一定要密擠靠攏，以求成直線或方塊行，這樣有利于切片。7.石蠟包埋后，不宜冷凝過慢，特別是室溫較高時，石蠟?zāi)毯髴?yīng)立即投入冷水中加速冷卻可增加石蠟密度，韌性和硬度。但冷凝過速也會因為內(nèi)外溫差過大