一種新的膀胱癌原位移植瘤動物模型的建立VIP

2013年9月,一種新的膀胱癌原位移植瘤動物模型的建立Anewmethodofestablishingorthotopicbladdertumorinmiceforexperimentaltherapies,一、研究目的和意義,膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一，術(shù)后高復(fù)發(fā)率是臨床治療失敗的主要原因。根據(jù)膀胱癌易復(fù)發(fā)的特點(diǎn)，行術(shù)后藥物膀胱灌注可以達(dá)到清除殘余瘤體，預(yù)防復(fù)發(fā)的目的。,因此尋找一種能有效清除膀胱癌術(shù)后殘余瘤體的藥物具有重要意義。研究藥物在動物體內(nèi)對膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)防效果，首先必須建立一種簡便、穩(wěn)定、可靠的膀胱癌原位移植瘤動物模型。,原位膀胱癌動物模型的制備方法,目前常用的制備膀胱癌原位移植瘤動物模型的方法按接種方法不同可分為四種：1.將致癌劑注入膀胱腔內(nèi)引發(fā)腫瘤。缺點(diǎn)：腫瘤多發(fā)，且定位不確定。2.將化學(xué)物質(zhì)（酸、堿或酶）注入膀胱腔內(nèi)造成膀胱粘膜損傷后再注入腫瘤細(xì)胞。缺點(diǎn)：成瘤率低、操作繁雜，損傷面積大，可能造成嚴(yán)重并發(fā)癥，對動物損傷非常大。3.經(jīng)腹部膀胱壁內(nèi)注射腫瘤細(xì)胞。缺點(diǎn)：需要手術(shù)，操作復(fù)雜，對動物損傷嚴(yán)重，且腫瘤細(xì)胞易漏入盆腔和腹腔。,原位膀胱癌動物模型的制備方法,4.用機(jī)械方法造成膀胱粘膜損傷后再灌注腫瘤細(xì)胞該方法對動物損傷??；腫瘤細(xì)胞可以定植在損傷部位，因此成瘤部位確定；且該模型與臨床膀胱腫瘤病理過程相似，能準(zhǔn)確反應(yīng)出腫瘤的生長、浸潤。,原位膀胱癌動物模型的制備方法,（1）楊慎敏等采取腹正中切口，暴露膀胱，自尿道插入動脈穿刺套管針套管，插入針芯，在直視下用小鑷子提起膀胱并輕輕移動，使針芯劃傷膀胱左側(cè)壁23次，退出針芯，注入腫瘤細(xì)胞。缺點(diǎn)：需要進(jìn)行手術(shù)，操作復(fù)雜，對動物損傷嚴(yán)重。（2）BissonJF等將自制的摩擦裝置通過套管經(jīng)尿道置入膀胱，感覺針頭抵達(dá)膀胱壁后用針芯旋轉(zhuǎn)損傷膀胱粘膜，然后注入腫瘤細(xì)胞。缺點(diǎn)：未對針芯旋轉(zhuǎn)的程度給予限制，造成的膀胱粘膜損傷無可控性。,我們采用偏角針膀胱粘膜損傷方法，成功建立了膀胱癌原位移植瘤動物模型，為膀胱癌防治研究提供了一種有實(shí)用價(jià)值的膀胱癌動物模型的制備方法。應(yīng)用該造模方法成功驗(yàn)證了我們研制的一種膀胱灌注液（蘇復(fù)寧洗液）預(yù)防膀胱癌術(shù)后復(fù)發(fā)的作用效果。,材料與方法,1.偏角針的制備,24#靜脈留置針，取出針芯，在距針尖15mm處將針芯折約5-7度的偏角，旋轉(zhuǎn)針芯時(shí)針尖處可形成=2.613.66mm的圓。,24#靜脈留置針,2.細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)動物的選擇,小鼠膀胱癌細(xì)胞株BTT，由山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)院泌尿外科楊曉峰教授惠贈。T739近交系小鼠，雌性，46周齡，SPF級，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號：SCXK(京)2009-0004。人膀胱癌細(xì)胞株T24，購自中科院上海生命科學(xué)研究院。BALB/c-nu-nu裸鼠，雌性，46周齡，SPF級，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK(京)2009-0017。,3.腫瘤細(xì)胞原位接種方法,實(shí)驗(yàn)動物,下腹部常規(guī)消毒,經(jīng)尿道口緩慢插入膀胱腔內(nèi),一手固定套管，另一手轉(zhuǎn)動針芯5周,偏角針緩慢插入套管中,麻醉,戊巴比妥鈉60mg/kg,24#靜脈留置針套管外涂以液體石蠟,抽出尿液,拔出針芯,注入腫瘤細(xì)胞懸液0.1ml（含有1107個(gè)細(xì)胞）,待動物自然蘇醒,拔出套管,實(shí)驗(yàn)組,對照組,圖1膀胱粘膜未損傷與損傷后的小鼠膀胱（充盈）（左：膀胱粘膜未損傷；右：膀胱粘膜損傷）,4.觀察方法,接種后動物常規(guī)飼養(yǎng)，觀察動物的活動、體重變化，記錄動物生存時(shí)間，動物自然死亡后解剖，觀察兩種方法造模后膀胱腔內(nèi)有無腫瘤形成、腫瘤轉(zhuǎn)移及血尿形成，剖取膀胱，并對膀胱及有腫瘤轉(zhuǎn)移的臟器以10%甲醛溶液固定后作病理檢查。,表1偏角針損傷與不損傷膀胱粘膜的膀胱原位移植瘤成瘤率比較,結(jié)果,1.腫瘤形成情況,圖2膀胱早期與晚期腫瘤(左：早期膀胱腫瘤；右：晚期膀胱腫瘤),早期腫瘤較為表淺，晚期腫瘤充滿整個(gè)膀胱。,圖3原位膀胱癌肝轉(zhuǎn)移與腎轉(zhuǎn)移(左：肝臟轉(zhuǎn)移；右：腎臟轉(zhuǎn)移),2.腫瘤轉(zhuǎn)移情況,T739小鼠接種后有23%的動物肉眼可見肝臟、腎臟、腸系膜、腹膜等處有轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移灶可為多處或單處，同時(shí)伴有血性腹水，腹腔內(nèi)有粘連現(xiàn)象。BALB/c-nu-nu裸鼠只有一只可見腎臟轉(zhuǎn)移。,圖4T739小鼠與Balb/C-nu-nu裸鼠生存時(shí)間圖(左：T739小鼠；右：Balb/C-nu-nu裸鼠),3.動物生存時(shí)間,表3膀胱原位移植瘤模型動物平均生存時(shí)間,圖5膀胱腫瘤及肝腎轉(zhuǎn)移病理學(xué)形態(tài),A正常膀胱(100),C晚期原位膀胱腫瘤(100),B早期原位膀胱腫瘤(100),D腎臟轉(zhuǎn)移(200),4.病理學(xué)檢查結(jié)果,討論,偏角針旋轉(zhuǎn)可以在膀胱粘膜上形成一個(gè)均衡的損傷。接種早期即可有大量的腫瘤細(xì)胞定植，在較短時(shí)間內(nèi)就可形成腫瘤并發(fā)生臟器轉(zhuǎn)移。制備偏角針?biāo)捎玫?4#靜脈留置針為標(biāo)準(zhǔn)的醫(yī)用器械，易于獲得且標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一偏角針的制備方法簡單，實(shí)驗(yàn)操作簡單，對