DB33 T 542-2005 水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測(cè)定方法 氣相色譜-二級(jí)質(zhì)譜法

20 備案號(hào)： 浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 542 2005 水產(chǎn)品中氯霉素 殘留量的測(cè)定方法 氣相色譜 of in S ) 2005布 2005施 浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 542 2005 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 和附錄 B 均為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江方圓檢測(cè)集團(tuán)股份有限公司、浙江工商大學(xué) 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人： 陳自力、勵(lì)建榮、廖上富、盛華棟、何喬桑、魯燕驊 。 542 2005 言 目前國(guó)內(nèi)外特別是歐盟國(guó)家對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素殘留監(jiān)控特別嚴(yán)格，而且允許殘留量都非常低，一般在 1 g/下。目前一般常用的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)都采用氣相色譜法（ 液相色譜法（ 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ 氣 S），氣相色譜法（電子捕獲檢測(cè)器）雖然能滿足靈敏度的要求，但易出現(xiàn)假陽(yáng)性、陽(yáng)性結(jié)果需進(jìn)一步確證；液相色譜法（ 操作簡(jiǎn)單，但靈敏度不高；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ 有簡(jiǎn)單、快速、處理樣品量大、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但容易產(chǎn)生假陽(yáng)性，一般只 適用 進(jìn)行樣品粗篩，陽(yáng)性結(jié)果需進(jìn)行確證。本方法采用氣相色譜離子阱時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素，靈敏度高，確證率高，穩(wěn)定性好。 542 2005 1 水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測(cè)定方法 氣相色譜 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用 于水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的測(cè)定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 樣品經(jīng)乙酸乙酯提取并濃縮，提取物溶于水，用正己烷脫脂， 烷化試劑衍生化后，用氣相色譜 標(biāo)法定量。 4 試劑 有試劑 在氯霉素出峰處應(yīng)無(wú)干擾峰，最好選擇優(yōu)級(jí)純或色譜純?cè)噭?霉素標(biāo)準(zhǔn)品：純度 99。 醇：色譜純。 酸乙酯：色譜純。 己烷：優(yōu)級(jí)純。 仿：分析純。 腈：色譜純。 水硫酸鈉：分析純， 650灼燒 4h，冷卻后貯于密閉容器中備用。 化鈉：分析純。 氯化鈉溶液：稱取氯化鈉 20g，加水溶解，稀釋到 500 霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品 甲醇溶解并定容至 100成濃度為500g/標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置 4冰箱中保存，保存期不超過(guò) 3 個(gè)月。臨用前，取此貯備液，用甲醇稀釋成 濃度為 標(biāo)準(zhǔn)工作液。 生化試劑： N,三甲基硅烷基 )三氟乙酰胺 (三甲基氯硅烷 (積比 99 1。 :實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合 6682 中一級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)。 5 儀器 驗(yàn)室常規(guī)儀器、設(shè)備及下列各項(xiàng)。 相色譜質(zhì)譜儀：電子轟擊源（ ,離子阱串聯(lián)質(zhì)譜。 子天平：感量 542 2005 2 質(zhì)機(jī)。 心機(jī)。 熱恒溫水浴鍋。 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。 心瓶： 50100 心管： 50 度離心管： 5塞。 吹儀。 18 固相萃取柱， 300 相萃取 裝置。 水硫酸鈉柱：砂芯玻璃層析柱中裝無(wú)水硫酸鈉 5g。 6 測(cè)定 譜條件 色譜柱： 30m 英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者。 載氣：高純氦氣（大于 ，恒流 柱溫：程序升溫， 150 恒溫 1 20 /率升至 270 ，保持 5 進(jìn)樣口溫度為 260 ； 無(wú)分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量 1L。 譜條件： 離子阱溫度 200 ；傳輸線溫度 250；歧管溫度 45； 光電倍增管電壓補(bǔ)償 200絲電流 80 A； 質(zhì)量掃描范圍： 99z； 譜監(jiān)測(cè)離子： 225、 242、 361、 451； 二級(jí)質(zhì)譜母離子 225；二級(jí)監(jiān)測(cè)離子 208； 壓： 定量方法：選擇 208m/z 為定量離子，外標(biāo)法定量。 7 測(cè)定步驟 品預(yù)處理 魚(yú)去鱗、皮，沿背脊取肌肉；蝦去頭、殼、附肢，取可食肌肉部分；蟹、中華鱉等取可食肌肉部分；樣品切成為不大于 小塊后混勻，放置冰箱中冷凍貯存?zhèn)溆谩?取 將樣品解凍，稱取樣品 5g(精確到 置于 50心管中，加入乙酸乙酯 20質(zhì)機(jī)均質(zhì) 1散 均勻，以 4 000r/心 3乙酸乙酯層轉(zhuǎn)移到 100心瓶中。再向離心管中加乙酸乙酯 10原均質(zhì)機(jī)均質(zhì)混合 14 000r/心 3并乙酸乙酯提取液于 100口雞心瓶中，于 40水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。 脂凈化 向雞心瓶中加 1醇振蕩溶解殘留物，再加入 15己烷和 25化鈉溶液，蓋塞振蕩混合 1分混合提取脂肪，轉(zhuǎn)移到另一 50心管中， 4 000r/速度離心 2去上層正己烷相并棄去。再向水相中加 10己烷，重復(fù)提 取一遍，棄去正己烷相。 水相中加入 15酸乙酯，旋渦混合 23 000r/心 3取乙酸乙酯層，經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉柱脫水過(guò)濾于 50心瓶中。再向水相中加入 5酸乙酯，重復(fù)上述操作。用少量乙酸乙酯淋洗無(wú)水硫酸鈉柱，合并提取液于 50心瓶中，在 40水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。 542 2005 3 對(duì)于凈化不完全的樣品可經(jīng) 相萃取柱進(jìn)一步凈化。加入 2酸乙酯溶解提取物并轉(zhuǎn)移于5塞離心管中，用 1酸乙酯洗滌雞心瓶，合并乙酸乙酯，于 50 55的砂浴中吹氮蒸發(fā)至近干，再用 1酸乙酯洗滌離心管壁并吹干。注意防潮。 18 柱凈化 注意：以下步驟必須連續(xù)做完，切莫讓吸附劑變干。 給每個(gè)樣品準(zhǔn)備一根 ，順序用 5醇、 5仿、 5醇和 5淋洗處理 ，棄掉洗滌液。用 5積分?jǐn)?shù)為 5的乙腈水溶液溶解 在 40水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干的提取物，吸取水溶液裝入 過(guò)柱，棄掉流出液。注意流速保持每秒一滴，否則凈化效果和回收率都較差。用 1淋洗雞心瓶 2 遍，并將淋洗液加入 過(guò)柱，棄掉流出液。用 5淋洗 ，讓洗滌液完全流出 ，用微氮吹干。用乙腈將 中的氯霉素洗脫，洗脫 2 次，每次 并洗脫液于 5塞離心管中。在溫度 50 55的砂浴中，用氮?dú)獯党译嬷两?，再?1意防潮。 生化 樣的衍生化 向干的殘留物中加 100L 衍生化試劑，蓋塞并旋渦混合 10s，在 70烘箱中反應(yīng) 30在 5055砂浴中用氮?dú)饬鞔党嘤嗟脑噭?，至樣品管剛好吹干為?(過(guò)長(zhǎng)的吹干時(shí)間可導(dǎo)致?lián)p失分析物 )。加入 己烷，旋渦混合 10s，供氣相色譜質(zhì)譜分析用。 準(zhǔn) 工作 液的衍生化 取適量標(biāo)準(zhǔn)工作液于 5塞離心管中，在溫度 50 55的砂浴中，用氮?dú)獯党軇┲粮?。以下?步驟操作。 品測(cè)定 分別注入 1L 適當(dāng)濃度的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)硅烷化衍生物溶液及樣品提取物硅烷化衍生物溶液于氣相色譜質(zhì)譜儀中，按上述色譜質(zhì)譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。 性測(cè)定 進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)， 如果檢出色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在樣品質(zhì)譜圖中，二級(jí)質(zhì)譜選擇的定性離子均出現(xiàn)，而且待測(cè)樣品的離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品的豐度比相一致，可確證該樣品含氯霉素。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)衍生物的二級(jí)質(zhì)譜總離子流圖和二級(jí)質(zhì)譜圖見(jiàn)附錄 A。 量 測(cè)定 以 208 為定量離子，外標(biāo)法定量。 行試驗(yàn) 按以上步驟對(duì)同一樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。 白 試驗(yàn) 除不稱取試樣后，均按上述步驟進(jìn)行。 果計(jì)算 結(jié)果按式（ 1）計(jì)算： Ss （ 1） 式中： X 試樣中被測(cè)組分殘留 量，單位為微克每千克（ g/ 標(biāo)準(zhǔn)工作液衍生化定容后溶液氯霉素衍生物組分濃度，單位為納克每毫升（ ng/ A 樣品中氯霉素衍生物的峰面積； 標(biāo)樣中氯霉素衍生物的峰面積； 542 2005 4 V 樣品溶液衍生化后定容體積，單位為毫升（ m 樣品溶液衍生化后定容溶液所代表試樣的質(zhì)量，單位為克（ g）。 注：計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。通常的玻璃器皿洗滌程序?qū)τ趶牟ＡП砻娉ズ哿柯让顾夭豢偸呛苡行У模ㄗh使用甲醇淋洗所有玻璃器皿，以避免污染問(wèn)題。均質(zhì)機(jī)清洗 方法，先用大量水浸洗，再用甲醇浸洗，最后用蒸餾水浸洗。 542 2005 5 附錄 A （資料性附錄）