【國家標(biāo)準(zhǔn)】GB 5413.9-2010 嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E(發(fā)布稿.僅供參考-標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng))

中華人 民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)010中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布 2010布 2010施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 A、 D、 E 的測定 of , D, E in 010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 幼兒配方食品和乳粉 維生素 A、 D、 本標(biāo)準(zhǔn)與 要變化如下： 抗氧化劑由原來的焦性沒食子酸改為抗壞血酸； 將處理方法中的加熱回流改為恒溫皂化操作； 增加了標(biāo)準(zhǔn)溶液的校正； 將原有的單點(diǎn)定量改為標(biāo)準(zhǔn)曲線法； 增加了維生素 將計(jì)算公式進(jìn)行修改。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 錄 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： 413 010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 A、 D、 E 的測定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 A、 D、 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 A、 D、 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 原理 試樣皂化后，經(jīng)石油醚萃取，維生素 A、 標(biāo)法定量；維生素 相色譜法分離，外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為 6682規(guī)定的一級水。 活力 。 水硫酸鈉。 丙醇：色譜純。 醇：色譜純。 氧化鉀水溶液：稱取固體氫氧化鉀 250 g，加入 200 溶解。 油醚：沸程 30 60 。 醇：色譜純。 己烷：色譜純。 己烷：色譜純。 生素 C 的乙醇溶液（ 15 g/L）。 生素 A、 D、 E 標(biāo)準(zhǔn)溶液 生素 A 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（視黃醇）（ 100 g/精確稱取 10 維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇（ 解并定容于 100 色容量瓶中。 010 2 生素 E 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（ 500 g/精確稱取 50 維生素 E 標(biāo)準(zhǔn)品，用乙醇（ 解并定容于 100 色容量瓶中。 生素 100 g/精確稱取 10 維生素 乙醇（ 解并定容于 100 色容量瓶中。 生素 100 g/：精確稱取 10 維生素 乙醇（ 解并定容于 100 色容量瓶中。 注： 維生素 A、 D、 10以下避光儲存。標(biāo)準(zhǔn)工作液臨用前配制。標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液用前需校正，見附錄 A。 5 儀器和設(shè)備 效液相色譜儀，帶紫外檢測器。 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。 溫磁力攪拌器： 20 80 。 吹儀。 心機(jī)：轉(zhuǎn)速 5000 轉(zhuǎn) /分鐘。 養(yǎng)箱： 60 2 。 平：感量為 0.1 6 分析步驟 樣處理 淀粉的試樣 稱取混合均勻的固體試樣約 5 0 g（精確到 0.1 250 入 l g 固體試樣需用約 50 5 50 的水使其溶解，混合均勻后充氮，蓋上瓶塞，置于60 2 培養(yǎng)箱（ 培養(yǎng) 30 含淀粉的試樣 稱取混合均勻的固體試樣約 10 0 g（精確到 0.1 250 體試樣需用約 50 5 50 水使其溶解，混合均勻。 定維生素 D 的試樣需要同時做回收率實(shí)驗(yàn)。 測液的制備 化：于上述處理的試樣溶液中加入約 100 生素 C 的乙醇溶液（ 充分混勻后加25 氧化鉀水溶液（ 勻，放入磁力攪拌棒，充氮排出空氣，蓋上膠塞。 1000 燒杯中加入約 300 水，將燒杯放在恒溫磁力攪拌器（ ，當(dāng)水溫控制在 53 2 時，將三角瓶放入燒杯中，磁力攪拌皂化約 45 ，取出立刻冷卻到室溫。 ?。河蒙倭康乃畬⒃砘喝哭D(zhuǎn)入 500 液漏斗中，加入 100 油醚（ 輕輕搖動，排氣后蓋好瓶塞，室溫下振蕩約 10 靜置分層，將水相轉(zhuǎn)入另一 500 液漏斗中，按上述方法進(jìn)行第二次萃取。合并醚液，用水洗至近中性。醚液通過無水硫酸鈉過濾脫水，濾液收入 500 010 3 圓底燒瓶中，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上在 40 2 充氮條件下蒸至近干（絕不允許蒸干）。殘?jiān)檬兔艳D(zhuǎn)移至 10 量瓶中，定容。 上述容量瓶中準(zhǔn)確移取 2.0 油醚溶液放入試管 A 中，再準(zhǔn)確移取 7.0 油醚溶液放入另一試管 B 中，將試管置于 40 2 的氮吹儀（ ，將試管 A 和 B 中的石油醚吹干。向試管A 中加 5.0 醇（ 振蕩溶解殘?jiān)Ｏ蛟嚬?B 中加 2.0 己烷（ 振蕩溶解殘?jiān)?。再將試?A 和試管 B 以不低于 5000 轉(zhuǎn) /分鐘的速度離心 10 出靜置至室溫后待測。 A 管用來測定維生素 A、 E， B 管用來測定維生素 D。 定 生素 A、E 的測定 譜參考條件 色譜柱： 250 4.6 5 m，或具同等性能的色譜柱。 流動相：甲醇（ 流速： 1.0 mL/ 檢測波長：維生素 A： 325 生素 E： 294 柱溫： 35 1 。 進(jìn)樣量： 20 L。 生素 A、 E 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別準(zhǔn)確吸取維生素 A 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（ 50 色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度分別為 g/g/g/g/g/ 分別準(zhǔn)確吸取維生素 E 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（ 50 色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度分別為 g/g/g/g/g/ 分別將維生素 A、 E 標(biāo)準(zhǔn)工作液注入液相色譜儀中（色譜圖參見附錄 B），得到峰高 (或峰面積 )。以峰高 (或峰面積 )為縱坐標(biāo)，以維生素 A、 E 標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)分別繪制維生素 A、 E 標(biāo)準(zhǔn)曲線。 生素 A、 E 試樣的測定 將試液（ 管）注入液相色譜儀中，得到峰高 (或峰面積 )，根據(jù)各自標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測溶液中維生素 A、 生素 D 的測定 生素 D 待測液的凈化 譜參考條件。 色譜柱：硅膠柱， 150 4.6 具同等性能的色譜柱。 流動相：環(huán)己烷（ 正己烷（ 體積比 1： 1混合，并按體積分?jǐn)?shù) 加入異丙醇（ 流速： 1 mL/ 波長： 264 柱溫： 35 1 。 進(jìn)樣體積： 500 L。 取約 0.5 3標(biāo)準(zhǔn)儲備液 （ 于 10 在 40 2 的氮吹儀 （ 吹干。殘?jiān)?5 該溶液 50 定維生素 后將 500 管）注入液相色譜儀中，根據(jù)維生素 餾分于試管 試管 0 2 條件下的氮吹儀中吹干，取出準(zhǔn)確加入 1.0 殘?jiān)袷幦芙?，即為維生素 010 4 生素 D 測定液的測定 參考色譜條件 色譜柱： 250 4.6 5m，或具同等性能的色譜柱。 流動相：甲醇（ 流速： 1 mL/ 檢測波長： 264 柱溫： 35 1 。 進(jìn)樣量： 100 L。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別準(zhǔn)確吸取維生素 標(biāo)準(zhǔn)儲備液 （ 100 棕色容量瓶中，用乙醇定容至刻度混勻。此標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度分別為 g/g/g/g/g/ 分別將維生素 準(zhǔn)工作液注入液相色譜儀中，得到峰高（或峰面積 )，參見附錄 B。以峰高 (或峰面積 )為縱坐標(biāo)，以維生素 準(zhǔn)工作液濃度為橫坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 生素 D 試樣的測定 吸取維生素 管） 100 譜圖參見附錄 B），得到峰高（或峰面積），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到維生素 2（或 濃度。 維生素 D 回收率測定結(jié)果記為回收率校正因子 f，代入測定結(jié)果計(jì)算公式（ 2），對維生素 D 含量測定結(jié)果進(jìn)行校正 。 7 分析結(jié)果的表述 生素 A 含量的計(jì)算 維生素 A 含量按（ 1）計(jì)算： 0 = （ 1） 式中： X試樣中維生素 位為微克每百克（ g/100 g） ； C從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的維生素 A 待測液的濃度，單位為微克每毫升（ g/； m 試樣的質(zhì)量，單位為克（ g）。 注： 1 g 視黃醇 = U 維生素 A。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 生素 D 含量的計(jì)算 維生素 D 含量按（ 2）計(jì)算： =100227/10（ 2） 式中： X試樣中維生素 含量，單位為微克每百克（ g/100 g） ； 從標(biāo)線得到的維生素 測液的濃度，單位為微克每毫升（ g/； m 試樣的質(zhì)量，單位為克（ g） ； 010 5 f 回收率校正因子。 注： 試樣中維生素 D 的含量以維生素 3的含量總和計(jì)。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 生素 E 含量 維生素 E 含量按（ 3）計(jì)算： 100010052/10=（ 3） 式中： X試樣中維生素 E（ 含量，單位為毫克每百克（ 00 g） ； 從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的維生素 E 待測液的濃度，單位為微克每毫升（ g/； m試樣的質(zhì)量，單位為克（ g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值，維生素 A、 %，維生素 0 %。 9 其他 本標(biāo)準(zhǔn)檢出限：維生素 A 為 1 g/100 g、維生素 E 為 g/100 g、維生素 D 為 g/100 g。 010 6 附錄 A （規(guī)范性附錄） 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度校正方法 維生素 A、 D、 體操作如下： 分別取維生素 A、 D、 別注入至含有 據(jù)給定波長測定各維生素的吸光值，按表 過下列公式計(jì)算出該維生素的濃度。 各維生素吸光值的測定條件 標(biāo)準(zhǔn)品 加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液的量 （ L） 比吸光系數(shù)%1波長 （ 視黃醇（ A） V 1835 325 E） V 71 294 麥角鈣化甾醇（ V 485 264 膽鈣化醇（ V 462 264 濃度計(jì)算按式 (4)： C=V( 4) 式中：