GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定

016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替003食品中黃曲霉毒素006食品中黃曲霉毒素2、2的測(cè)定、010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素232122008牛奶和奶粉中黃曲霉毒素2、2、2的測(cè)定 液相色譜189792003食品中黃曲霉毒素的測(cè)定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法、995出口茶葉中黃曲霉毒素16642005牛奶和奶粉中黃曲霉毒素1、1、11012002進(jìn)出口油籽及糧谷中黃曲霉毒素的檢驗(yàn)方法、997出口油籽、堅(jiān)果及堅(jiān)果制品中黃曲霉毒素的檢驗(yàn)方法 液相色譜法、17362006進(jìn)出口蜂蜜中黃曲霉毒素的檢驗(yàn)方法 高效液相色譜法、12862007花生黃曲霉毒素效液相色譜法。本標(biāo)準(zhǔn)與003相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素根據(jù)011的要求,增加了方法的適用范圍;增加了同位素稀釋液相色譜增加了高效液相色譜增加了高效液相色譜修改了酶聯(lián)免疫法,并將方法名稱更改為酶聯(lián)免疫吸附篩查法;增加了免疫親和柱以及酶聯(lián)免疫試劑盒質(zhì)量判定要求與方法;修改了測(cè)定組分為黃曲霉毒素0161 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中黃曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素下簡(jiǎn)稱測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法為同位素稀釋液相色譜用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅(jiān)果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中標(biāo)準(zhǔn)第二法為高效液相色譜用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅(jiān)果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中標(biāo)準(zhǔn)第三法為高效液相色譜用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅(jiān)果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中標(biāo)準(zhǔn)第四法為酶聯(lián)免疫吸附篩查法,適用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅(jiān)果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品、嬰幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品中標(biāo)準(zhǔn)第五法為薄層色譜法,適用于谷物及其制品、豆類及其制品、堅(jiān)果及籽類、油脂及其制品、調(diào)味品中一法 同位素稀釋液相色譜理試樣中的黃曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素乙腈取液用含1%吐溫磷酸鹽緩沖溶液稀釋后(必要時(shí)經(jīng)黃曲霉毒素固相凈化柱初步凈化),通過免疫親和柱凈化和富集,凈化液濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離,串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè),同位素內(nèi)標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。腈(色譜純。醇(色譜純。酸銨(色譜純?；c(0162 酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(酸(142n(或吐溫58酸銨溶液(5):水溶解后稀釋至1000勻。腈4+16):取840勻。醇0+30):取700勻。腈0+50):取50勻。腈0+50):取50勻。0%鹽酸溶液:取1純水稀釋至10勻。酸鹽緩沖溶液(以下簡(jiǎn)稱900水稀釋至1000 1%吐溫10吐溫用17162純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17220純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17165純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17241純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。位素內(nèi)標(biāo)131757449純度98%, 同位素內(nèi)標(biāo)131757470純度98%, 同位素內(nèi)標(biāo)131757444純度98%, 同位素內(nèi)標(biāo)131757462純度98%,:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以使用滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(10g/分別稱取用乙腈溶解并定容至100溶液濃度約為10g/液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后,在避光保存,備用。臨用前進(jìn)行濃度校準(zhǔn)(校準(zhǔn)方法參見附錄A)。合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100ng/準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(腈定容。此溶液密封后避光保存,三個(gè)月有效。合同位素內(nèi)標(biāo)工作液(100ng/3乙腈定容至10避光保存,備用。準(zhǔn)系列工作溶液:準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(100ng/0L、50L、100L、200L、500L、800L、1000入200初始流動(dòng)相定容至刻度,0163 漿機(jī)。速粉碎機(jī)。織搗碎機(jī)。聲波/渦旋振蕩器或搖床。平:旋混合器。速均質(zhì)器:轉(zhuǎn)速6500r/4000r/心機(jī):轉(zhuǎn)速6000r/璃纖維濾紙:快速、高載量、相萃取裝置(帶真空泵)。吹儀。相色譜電噴霧離子源。相色譜柱。疫親和柱:000%,0%(驗(yàn)證方法參見附錄B)。注:對(duì)于不同批次的親和柱在使用前需進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證。曲霉毒素專用型固相萃取凈化柱或功能相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈?以下簡(jiǎn)稱凈化柱):對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品測(cè)定時(shí)使用。孔濾頭:選用濾膜應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗(yàn)確認(rèn)無吸附現(xiàn)象,方可使用)。網(wǎng):1 分析步驟使用不同廠商的免疫親和柱,在樣品上樣、淋洗和洗脫的操作方面可能會(huì)略有不同,應(yīng)該按照供應(yīng)商所提供的操作說明書要求進(jìn)行操作。警示:整個(gè)分析操作過程應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域應(yīng)避光(直射陽(yáng)光)、具備相對(duì)獨(dú)立的操作臺(tái)和廢棄物存放裝置。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,操作者應(yīng)按照接觸劇毒物的要求采取相應(yīng)的保護(hù)措施。體樣品(植物油、醬油、醋等)采樣量需大于1L,對(duì)于袋裝、瓶裝等包裝樣品需至少采集3個(gè)包裝(同一批次或號(hào)),將所有液體樣品在一個(gè)容器中用勻漿機(jī)混勻后,其中任意的100g(品進(jìn)行檢測(cè)。體樣品(谷物及其制品、堅(jiān)果及籽類、嬰幼兒谷類輔助食品等)采樣量需大于1高速粉碎機(jī)將其粉碎,過篩,使其粒徑小于2合均勻后縮分至100g,儲(chǔ)存于樣品瓶中,密封保存,供檢測(cè)用。流體(腐乳、豆豉等)采樣量需大于1),對(duì)于袋裝、瓶裝等包裝樣品需至少采集3個(gè)包裝(同一批次或號(hào)),0164 搗碎機(jī)搗碎混勻后,儲(chǔ)存于樣品瓶中,密封保存,供檢測(cè)用。物油脂稱取550入100)振蕩混合后靜置30入204+16)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/上清液備用。油、醋稱取550入125乙腈或甲醇定容至25渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。般固體樣品稱取550入1004+16)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品稱取550入1000+50)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。流體樣品稱取550入1004+16)或甲醇0+30),置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。樣液的準(zhǔn)備準(zhǔn)確移取4入46吐溫用甲醇混勻。疫親和柱的準(zhǔn)備將低溫下保存的免疫親和柱恢復(fù)至室溫。0165 樣的凈化待免疫親和柱內(nèi)原有液體流盡后,將上述樣液移至50節(jié)下滴速度,控制樣液以1mL/mL/樣液滴完后,往注射器筒內(nèi)加入210穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后,用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng),在親和柱下部放置10下50入21制1mL/mL/用真空泵抽干親和柱,收集全部洗脫液至試管中。在50下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两?旋30集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。曲霉毒素固相凈化柱和免疫親和柱同時(shí)使用(對(duì)花椒、胡椒和辣椒等復(fù)雜基質(zhì))化柱凈化移取適量上清液,按凈化柱操作說明進(jìn)行凈化,收集全部?jī)艋骸Ｒ哂H和柱凈化用刻度移液管準(zhǔn)確吸取上述凈化液4入46吐溫用甲醇入23吐溫混勻。:全自動(dòng)(在線)或半自動(dòng)(離線)的固相萃取儀器可優(yōu)化操作參數(shù)后使用。相色譜參考條件液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:乙酸銨溶液;腈0+50);b) 梯度洗脫:32%B(045%B(3100%B(32%B(c) 色譜柱:長(zhǎng)100或相當(dāng)者;d) 流速:e) 柱溫:40;f) 進(jìn)樣體積:10L。譜參考條件質(zhì)譜參考條件列出如下:a) 檢測(cè)方式:多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(b) 離子源控制條件:參見表1;c) 離子選擇參數(shù):參見表2;d) 子離子掃描圖:C.8;e) 液相色譜1 離子源控制條件電離方式細(xì)管電壓/30射頻透鏡1電壓/0166 表1(續(xù))離子源溫度/150錐孔反吹氣流量/(L/h)50脫溶劑氣溫度/500脫溶劑氣流量/(L/h)800電子倍增電壓/子選擇參數(shù)表化合物名稱母離子(m/z)定量離子(m/z)碰撞能量m/z)碰撞能量3333性測(cè)定試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較,變化范圍應(yīng)在內(nèi)。每種化合物的質(zhì)譜定性離子必須出現(xiàn),至少應(yīng)包括一個(gè)母離子和兩個(gè)子離子,而且同一檢測(cè)批次,對(duì)同一化合物,樣品中目標(biāo)化合物的兩個(gè)子離子的相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比,其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍。表3 定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度/%502050102010允許相對(duì)偏差/%202530標(biāo)準(zhǔn)系列溶液由低到高濃度進(jìn)樣檢測(cè),以到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程,標(biāo)法計(jì)算待測(cè)液中目標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量濃度,按第6章計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。待測(cè)樣液中的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),超過線性范圍則應(yīng)適當(dāng)減少取樣量重新測(cè)定。0167 白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。6 分析結(jié)果的表述試樣中)計(jì)算:X=31000V2m1000(1)式中:X 試樣中位為微克每千克(g/進(jìn)樣溶液中位為納克每毫升(ng/試樣提取液體積(植物油脂、固體、半固體按加入的提取液體積;醬油、醋按定容總體積),單位為毫升(樣品經(jīng)凈化洗脫后的最終定容體積,單位為毫升(1000換算系數(shù);用于凈化分取的樣品體積,單位為毫升(m試樣的稱樣量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。8 其他當(dāng)稱取樣品5二法 高效液相色譜理試樣中的黃曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素乙腈取液經(jīng)黃曲霉毒素固相凈化柱凈化去除脂肪、蛋白質(zhì)、色素及碳水化合物等干擾物質(zhì),凈化液用三氟乙酸柱前衍生,液相色譜分離,熒光檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。0168 醇(色譜純。腈(色譜純。己烷(色譜純。氟乙酸(腈4+16):取840醇0+30):取700腈0+50):取500腈0+50):取50017162純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17220純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17165純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17241純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。注:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以使用滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(10g/分別稱取用乙腈溶解并定容至100溶液濃度約為10g/液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后,在避光保存,備用。臨用前進(jìn)行濃度校準(zhǔn)(校準(zhǔn)方法參見附錄A)。合標(biāo)準(zhǔn)工作液(00ng/0ng/準(zhǔn)確移取腈定容。密封后避光保存,三個(gè)月內(nèi)有效。準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液10L、50L、200L、500L、1000L、2000L、4000初始流動(dòng)相定容至刻度(2ng/11 漿機(jī)。速粉碎機(jī)?？棑v碎機(jī)。聲波/渦旋振蕩器或搖床。0169 平:旋混合器。速均質(zhì)器:轉(zhuǎn)速6500r/4000r/心機(jī):轉(zhuǎn)速6000r/璃纖維濾紙:快速、高載量、吹儀。相色譜儀:配熒光檢測(cè)器。譜分離柱。曲霉毒素專用型固相萃取凈化柱(以下簡(jiǎn)稱凈化柱),或相當(dāng)者。次性微孔濾頭:選用濾膜應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗(yàn)確認(rèn)無吸附現(xiàn)象,方可使用)。網(wǎng):1溫箱。2 體樣品(植物油、醬油、醋等)采樣量需大于1L,對(duì)于袋裝、瓶裝等包裝樣品需至少采集3個(gè)包裝(同一批次或號(hào)),將所有液體樣品在一個(gè)容器中用勻漿機(jī)混勻后,其中任意的100g(品進(jìn)行檢測(cè)。體樣品(谷物及其制品、堅(jiān)果及籽類、嬰幼兒谷類輔助食品等)采樣量需大于1高速粉碎機(jī)將其粉碎,過篩,使其粒徑小于2合均勻后縮分至100g,儲(chǔ)存于樣品瓶中,密封保存,供檢測(cè)用。流體(腐乳、豆豉等)采樣量需大于1),對(duì)于袋裝、瓶裝等包裝樣品需至少采集3個(gè)包裝(同一批次或號(hào)),用組織搗碎機(jī)搗碎混勻后,儲(chǔ)存于樣品瓶中,密封保存,供檢測(cè)用。物油脂稱取550入204+16)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/上清液備用。油、醋稱取550乙腈或甲醇定容至25渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。01610 般固體樣品稱取5504+16)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。幼兒配方食品和嬰幼兒輔助食品稱取5500+50)或甲醇0+30),渦旋混勻,置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。流體樣品稱取5504+16)或甲醇0+30),置于超聲波/渦旋振蕩器或搖床中振蕩20用均質(zhì)器均質(zhì)3在6000r/均質(zhì)后玻璃纖維濾紙過濾),取上清液備用。品黃曲霉毒素固相凈化柱凈化移取適量上清液,按凈化柱操作說明進(jìn)行凈化,收集全部?jī)艋?。用氮?dú)饩従彽卮抵两?分別加入200旋30s,在401的恒溫箱中衍生15生結(jié)束后,在50下用氮?dú)饩従彽貙⒀苌捍抵两?旋30集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。譜參考條件色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:,腈0+50);b) 梯度洗脫:24%B(035%B(100%B(24%B(c) 色譜柱:長(zhǎng)150或相當(dāng)者;d) 流速:e) 柱溫:40;f) 進(jìn)樣體積:50L;g) 檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)360射波長(zhǎng)440nm;h) 液相色譜圖:準(zhǔn)曲線的制作系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣檢測(cè),以峰面積為縱坐標(biāo)到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。01611 樣溶液的測(cè)定待測(cè)樣液中待測(cè)化合物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),濃度超過線性范圍的樣品則應(yīng)稀釋后重新進(jìn)樣分析。白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。13 分析結(jié)果的表述試樣中)計(jì)算:X=31000V2m1000(2)式中:X 試樣中位為微克每千克(g/進(jìn)樣溶液中位為納克每毫升(ng/試樣提取液體積(植物油脂、固體、半固體按加入的提取液體積;醬油、醋按定容總體積),單位為毫升(凈化液的最終定容體積,單位為毫升(1000換算系數(shù);凈化柱凈化后的取樣液體積,單位為毫升(m試樣的稱樣量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。15 其他當(dāng)稱取樣品5三法 高效液相色譜述方法的儀器檢測(cè)部分,包括碘或溴試劑衍生、光化學(xué)衍生、電化學(xué)衍生等柱后衍生方法,可根據(jù)實(shí)際情況,選擇其中一種方法即可。16 原理試樣中的黃曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素曲霉毒素01612 溶液的混合溶液提取,提取液經(jīng)免疫親和柱凈化和富集,凈化液濃縮、定容和過濾后經(jīng)液相色譜分離,柱后衍生(碘或溴試劑衍生、光化學(xué)衍生、電化學(xué)衍生等),經(jīng)熒光檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。17 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級(jí)水。醇(色譜純。腈(色譜純。化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(酸(142n(或吐溫58衍生使用試劑:碘(衍生使用試劑:三溴化吡啶(化學(xué)衍生使用試劑:溴化鉀(濃硝酸(腈4+16):取840醇0+30):取700腈0+50):取500腈0+90):取100腈0+50):取500酸鹽緩沖溶液(以下簡(jiǎn)稱900水定容至1000%吐溫10溶液:20水定容至200配現(xiàn)用(僅碘柱后衍生法使用)。三溴化吡啶水溶液:稱取5配現(xiàn)用(僅溴柱后衍生法使用)。17162純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17220純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。17165純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。241純度98%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。注:標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可以使用滿足溯源要求的商品化標(biāo)準(zhǔn)溶液。01613 準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(10g/分別稱取用乙腈溶解并定容至100溶液濃度約為10g/液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后,在避光保存,備用。臨用前進(jìn)行濃度校準(zhǔn)(校準(zhǔn)方法參見附錄A)。合標(biāo)準(zhǔn)工作液(00ng/0ng/準(zhǔn)確移取腈定容。密封后避光保存,三個(gè)月內(nèi)有效。準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作液10L、50L、200L、500L、1000L、2000L、4000初始流動(dòng)相定容至刻度(2ng/18 漿機(jī)。速粉碎機(jī)?？棑v碎機(jī)。聲波/渦旋振蕩器或搖床。平:旋混合器。速均質(zhì)器:轉(zhuǎn)速6500r/4000r/心機(jī):轉(zhuǎn)速6000r/璃纖維濾紙:快速、高載量、相萃取裝置(帶真空泵)。吹儀。相色譜儀:配熒光檢測(cè)器(帶一般體積流動(dòng)池或者大體積流通池)。注:當(dāng)帶大體積流通池時(shí)不需要再使用任何型號(hào)或任何方式的柱后衍生器。相色譜柱。化學(xué)柱后衍生器(適用于光化學(xué)柱后衍生法)。劑柱后衍生裝置(適用于碘或溴試劑衍生法)。化學(xué)柱后衍生器(適用于電化學(xué)柱后衍生法)。疫親和柱:000%,0%(驗(yàn)證方法參見附錄B)。注:對(duì)于每個(gè)批次的親和柱使用前需質(zhì)量驗(yàn)證。曲霉毒素固相凈化柱或功能相當(dāng)?shù)墓滔噍腿≈?以下簡(jiǎn)稱凈化柱):對(duì)復(fù)雜基質(zhì)樣品測(cè)定時(shí)使用。次性微孔濾頭:選用濾膜應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)溶液檢驗(yàn)確認(rèn)無吸附現(xiàn)象,方可使用)。網(wǎng):19 分析步驟使用不同廠商的免疫親和柱,在樣品的上樣、淋洗和洗脫的操作方面可能略有不同,01614 商所提供的操作說明書要求進(jìn)行操作。警示:整個(gè)分析操作過程應(yīng)在指定區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。該區(qū)域應(yīng)避光(直射陽(yáng)光)、具備相對(duì)獨(dú)立的操作臺(tái)和廢棄物存放裝置。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中,操作者應(yīng)按照接觸劇毒物的要求采取相應(yīng)的保護(hù)措施。樣液的準(zhǔn)備準(zhǔn)確移取4入46吐溫用甲醇混勻。疫親和柱的準(zhǔn)備將低溫下保存的免疫親和柱恢復(fù)至室溫。樣的凈化免疫親和柱內(nèi)的液體放棄后,將上述樣液移至50節(jié)下滴速度,控制樣液以1mL/mL/樣液滴完后,往注射器筒內(nèi)加入210穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱。待水滴完后,用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng),在親和柱下部放置10下501制1mL/mL/用真空泵抽干親和柱,收集全部洗脫液至試管中。在50下用氮?dú)饩従彽貙⑾疵撘捍抵两?旋30集濾液于進(jìn)樣瓶中以備進(jìn)樣。曲霉毒素固相凈化柱和免疫親和柱同時(shí)使用(對(duì)花椒、胡椒和辣椒等復(fù)雜基質(zhì))化柱凈化移取適量上清液,按凈化柱操作說明進(jìn)行凈化,收集全部?jī)艋骸Ｒ哂H和柱凈化用刻度移液管準(zhǔn)確吸取上部?jī)艋?入46吐溫用甲醇混勻。:全自動(dòng)(在線)或半自動(dòng)(離線)的固相萃取儀器可優(yōu)化操作參數(shù)后使用。衍生器法(大流通池直接檢測(cè))液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:;腈0+50);b) 等梯度洗脫條件:A,65%;B,35%;01615 c) 色譜柱:長(zhǎng)100或相當(dāng)者;d) 流速:e) 柱溫:40;f) 進(jìn)樣量:10L;g) 激發(fā)波長(zhǎng):365射波長(zhǎng):436463h) 后光化學(xué)衍生法液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:;腈0+50);b) 等梯度洗脫條件:A,68%;B,32%;c) 色譜柱:長(zhǎng)150料粒徑5m),或相當(dāng)者;d) 流速:e) 柱溫:40;f) 進(jìn)樣量:50L;g) 光化學(xué)柱后衍生器;h) 激發(fā)波長(zhǎng):360射波長(zhǎng):440nm;i) 后碘衍生法液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:;腈0+50);b) 等梯度洗脫條件:A,68%;B,32%;c) 色譜柱:長(zhǎng)150料粒徑5m),或相當(dāng)者;d) 流速:e) 柱溫:40;f) 進(jìn)樣量:50L;g) 柱后衍生化系統(tǒng);h) 衍生溶液:溶液;i) 衍生溶液流速:j) 衍生反應(yīng)管溫度:70;k) 激發(fā)波長(zhǎng):360射波長(zhǎng):440nm;l) 后溴衍生法液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:;腈0+50);b) 等梯度洗脫條件:A,68%;B,32%;c) 色譜柱:長(zhǎng)150料粒徑5m),或相當(dāng)者;d) 流速:e) 色譜柱柱溫:40;f) 進(jìn)樣量:50L;01616 g) 柱后衍生系統(tǒng);h) 衍生溶液:5三溴化吡啶水溶液;i) 衍生溶液流速:j) 衍生反應(yīng)管溫度:70;k) 激發(fā)波長(zhǎng):360射波長(zhǎng):440nm;l) 后電化學(xué)衍生法液相色譜參考條件列出如下:a) 流動(dòng)相:(150硝酸);醇;b) 等梯度洗脫條件:A,60%;B,40%;c) 色譜柱:長(zhǎng)150料粒徑5m),或相當(dāng)者;d) 柱溫:40;e) 流速:f) 進(jìn)樣量:50L;g) 電化學(xué)柱后衍生器:反應(yīng)池工作電流100A;1根度50h) 激發(fā)波長(zhǎng):360射波長(zhǎng):440nm;i) 準(zhǔn)曲線的制作系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液由低到高濃度依次進(jìn)樣檢測(cè),以峰面積為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。樣溶液的測(cè)定待測(cè)樣液中待測(cè)化合物的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),濃度超過線性范圍的樣品則應(yīng)稀釋后重新進(jìn)樣分析。白試驗(yàn)不稱取試樣,確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。20 分析結(jié)果的表述試樣中)計(jì)算:X=31000V2m1000(3)式中:X 試樣中位為微克每千克(g/進(jìn)樣溶液中位為納克每毫升(ng/試樣提取液體積(植物油脂、固體、半固體按加入的提取液體積;醬油、醋按定容總體積),單位為毫升(01617 樣品經(jīng)免疫親和柱凈化洗脫后的最終定容體積,單位為毫升(用于免疫親和柱的分取樣品體積,單位為毫升(1000換算系數(shù);m試樣的稱樣量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。21 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20%。22 其他當(dāng)稱取樣品5后光化學(xué)衍生法、柱后溴衍生法、柱后碘衍生法、后光化學(xué)衍生法、柱后溴衍生法、柱后碘衍生法、柱后電化學(xué)衍生法:衍生器法:四法 酶聯(lián)免疫吸附篩查法23 原理試樣中的黃曲霉毒素均質(zhì)、渦旋、離心(過濾)等處理獲取上清液。被辣根過氧化物酶標(biāo)記或固定在反應(yīng)孔中的黃曲霉毒素試樣上清液或標(biāo)準(zhǔn)品中的黃曲霉毒素洗滌后加入相應(yīng)顯色劑顯色,經(jīng)無機(jī)酸終止反應(yīng),于450品中的黃曲霉毒素4 試劑和材料配制溶液所需試劑均為分析純,水為6682規(guī)定二級(jí)水。按照試劑盒說明書所述,配制所需溶液。所用商品化的試劑盒需按照5 孔板酶