分子醫(yī)學(xué)技能：流式細(xì)胞儀（FLOW CYTOMETERFCM）

1、流式細(xì)胞儀（FLOW CYTOMETER，F(xiàn)CM）,對(duì)于處在流動(dòng)狀態(tài)的細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行多參數(shù)的快速的定量和分析的技術(shù)。,檢測(cè)儀器：流 式 細(xì) 胞 記 數(shù) 儀,激光技術(shù) 電子物理技術(shù) 光電測(cè)量技術(shù) 計(jì)算機(jī)技術(shù) 細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù) 單克隆抗體技術(shù),FCM 是諸多技術(shù)的結(jié)晶:,FCM結(jié)構(gòu)組成部分,液流系統(tǒng); 將細(xì)胞引導(dǎo)至檢測(cè)位點(diǎn) 光學(xué)系統(tǒng); 產(chǎn)生并收集光學(xué)信號(hào) 電子系統(tǒng); 將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào),使之?dāng)?shù)字化,輸入計(jì)算機(jī)并分析。 細(xì)胞分選系統(tǒng)。,FLOW CELL(流動(dòng)室),熒光信號(hào),每種熒光染料均有特定的激發(fā)波長(zhǎng), 并激發(fā)后會(huì)有發(fā)射波長(zhǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)的即是它特定的發(fā)射波長(zhǎng). 利用各種不同波長(zhǎng)的光學(xué)濾

2、片來(lái)收集(檢測(cè))這些光學(xué)信號(hào),熒光染料的特性,激發(fā)波長(zhǎng)(EXCITING) 發(fā)射波長(zhǎng)(EMISSION),激發(fā)光源與熒光標(biāo)記物,前向角散射光信號(hào),側(cè)向角散射光信號(hào),檢測(cè)信號(hào),電子系統(tǒng),當(dāng)細(xì)胞攜帶熒光素標(biāo)記物, 通過激光照射區(qū)時(shí), 受激激發(fā), 產(chǎn)生代表細(xì)胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào), 這些信號(hào)經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào), 送計(jì)算機(jī)進(jìn)行儲(chǔ)存、 作圖、 統(tǒng)計(jì)分析,檢測(cè)器,Photomultiplier tube (PMT) 將光學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娒}沖(數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù))信號(hào),雙參數(shù)點(diǎn)圖,1. FSC,與細(xì)胞直徑平分正相關(guān),2. SSC, 指與激光束正交90度方向的散射信號(hào)，它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更敏感，可以提供細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)及顆粒性質(zhì)的信息,結(jié) 果 示 范,1.56,0.25,8.23,0.26,左圖顯示在抗原刺激前，CD4+和CD4-細(xì)胞中能產(chǎn)生IFN-的細(xì)胞占PBMC的0.25%和1.56% 右圖顯示在抗原刺激后，CD4-細(xì)胞中能