實驗六 微生物顯微鏡的直接計數(shù)法與微生物大小測定1.ppt

1、實驗六 微生物顯微鏡的直接計數(shù)法與微生物大小測定,一、目的要求,1.掌握使用血球計數(shù)器進行微生物計數(shù)的方法。 2.學(xué)習(xí)掌握測量微生物大小的基本方法。,二、基本原理,1.微生物數(shù)量的測定,記數(shù)室邊長為1毫米，則其面積為1平方毫米。蓋上蓋玻片后，載片與蓋玻片之間高度為0.1毫米，所以每個記數(shù)室體積為0.1立方毫米。 在計數(shù)時，通常以五個中方格的總菌數(shù)（每個中方格中數(shù)四個小方格）即20個小方格的總菌數(shù)（求平均值）。 例如：設(shè)20個小方格中的總菌數(shù)為A，懸液稀釋度B，那么大格（0.1立方毫米的總菌數(shù)） A/20400B。,2.微生物大小的測定,三、器材,顯微鏡；血球計數(shù)板；手撳計數(shù)器；蓋玻片；目鏡測微

2、尺；鏡臺測微尺。 酵母菌菌懸液；,四、操作步驟,1.酵母菌細胞總數(shù)的測定 (1)先將計數(shù)板蓋上蓋片在顯微鏡下，從低倍找到計數(shù)器的位置，然后取出計數(shù)板。 (2)將稀釋好的菌懸液搖勻，取一環(huán)由蓋玻片邊緣自行滲入。如一環(huán)不夠可再取一環(huán)，使室充滿。（不宜過多，也不可有氣泡）放在鏡臺上。 (3)靜止3-5分鐘，先在低倍鏡觀察找到位置，然后換成高倍鏡進行計數(shù)。樣品不宜太濃或太稀，最好每小格控制在5-10個菌體為宜，計數(shù)需要重復(fù)二次。取平均值。先后二次誤差太大，需再重復(fù)計數(shù)。 (4)清洗：計數(shù)板使用完畢后，再水中沖洗（切勿用硬物洗刷），洗后，自行涼干或吹干。,2.目鏡測微尺的校正,首先把接目鏡上的透鏡旋下，

3、然后將目鏡測微尺的刻度朝下輕輕地裝入接目鏡的隔板上，然后把鏡臺測微尺置于載物臺上，使刻度朝上并對準聚光器。先用低倍鏡觀察，對準焦距，當(dāng)看清鏡臺測微尺后，轉(zhuǎn)動接目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺點與鏡臺測微尺的一條刻線重合，然后于另一端找重合線，計算兩端重合線之間目鏡測微尺和鏡臺測微尺各載若干格。因為鏡臺測微尺的刻度是在載物臺上，所以每格的長度(10微米)就是實際測量時的長度。 用同法校正在高倍鏡下目鏡測微尺每格所量的載物臺上物體的實際長度。 由于不同顯微鏡及附件的放大倍數(shù)不同，因此校正目鏡測微尺必須針對特定的顯微鏡和附件（特定的接物鏡，接目鏡，鏡筒長度等）進行，而且只能在這特定的情況下重復(fù)使用。,3.菌體大小的測定,目鏡測微尺校正好以后，移去鏡臺測微尺以目鏡測微尺來測量微生物占有幾格（長、寬），測出的格數(shù)（估計小數(shù)點后面一位）乘上目鏡測微尺每格長度，即該微生物的大小。 一般測量菌的大小在同一涂片上測10-20個菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體進行測定。 測量酵母菌的長和寬。,五、實驗結(jié)果,1、P50題1 2、P55題1,六、思考題,1、根據(jù)你的體會，用血球計數(shù)板的誤差主要來自那些方面？應(yīng)如何避免誤差，力