免疫SOP：絨毛膜促性腺激素＋B亞單位

1、44文件編號(hào)：LABOPMY020第 頁(yè)，共 頁(yè) 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書(shū) Cobas E 601/E 411乙絨毛膜促性腺激素+亞單位1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個(gè)過(guò)程18 分鐘完成。 第1 步：20 l（Elecsys2010,E170）或15 l（Elecsys1010）標(biāo)本、生物素化的抗HCG 單克隆抗體和釕（Ru）標(biāo)記的抗HCG 單克隆抗體混勻，形成夾心復(fù)物。 第2 步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復(fù)合物通過(guò)生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。 第3 步：反應(yīng)混和液吸到測(cè)量池中，微粒通過(guò)磁鐵吸附

2、到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過(guò)光電倍增管進(jìn)行測(cè)定。檢測(cè)結(jié)果由機(jī)器自動(dòng)從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出。此曲線由儀器通過(guò)2 點(diǎn)定標(biāo)校正，由從試劑條形碼掃描入儀器的原版標(biāo)準(zhǔn)曲線而得。2：標(biāo)本采集和準(zhǔn)備：必須選擇以下的標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定血清：使用標(biāo)準(zhǔn)取樣試管或含分離膠的試管采集血清：按標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)方法采集。血漿：肝素、EDTA-K3 、枸櫞酸鈉或草酸鉀抗凝均可。標(biāo)本在28 度可穩(wěn)定8 小時(shí)，-20 度可穩(wěn)定12 個(gè)月。凍融一次。標(biāo)本如有沉淀需離心后再使用。不要加熱滅活標(biāo)本。標(biāo)本和質(zhì)控品禁用疊氮鈉防腐。在測(cè)定前，保證試劑、定標(biāo)液、質(zhì)控液到達(dá)室溫。考慮到可能揮發(fā)的因素，建議標(biāo)本、定標(biāo)液、質(zhì)控液

3、上機(jī)后在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。3：試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑： M：鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋），1 瓶，6.5ml 。鏈霉親和素包被的微粒濃度0.72mg/ml，生物素結(jié)合能力：470ng 生物素/mg 粒子。含防腐劑。R1：生物素化的抗HCG 單克隆抗體（灰蓋），1 瓶，10ml 。生物素化的抗HCG 單克隆抗體濃度6.3mg/l，磷酸緩沖液0.04mol/l，pH7.5 。含防腐劑。R2：Ru(bpy)3 2+ 標(biāo)記的抗HCG 單克隆抗體（黑蓋），1 瓶，10ml 。Ru(bpy)3 2+ 標(biāo)記的抗HCG 單克隆抗體濃度4.6mg/l，磷酸緩沖液0.04

4、mol/l，pH6.5 。含防腐劑。校準(zhǔn)品： 每批HCG+試劑有一條形碼標(biāo)簽，含有該批試劑定標(biāo)所需的特殊信息。應(yīng)用HCG+CalSet 定標(biāo)液定標(biāo)。 定標(biāo)頻率： 每批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24 小時(shí)以內(nèi)）標(biāo)定一次， 如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求： Cobas E 601或E411： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7 天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況： 根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。質(zhì)控品： Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）1 和2 以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)

5、適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。其他所需材料：貨號(hào)：11973193，100 人份的Elecsys HCG+試劑盒包含： M 鏈霉親和素包被的微粒 R1 生物素化的抗HCG 抗體 R2 三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記的抗HCG 抗體需要的材料（未提供）： Elecsys HCG +定標(biāo)液（CalSet）貨號(hào)11973207 Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）貨號(hào)11731416 Elecsys 通用稀釋液 貨號(hào)11732277Cobas E 601或E411 分析儀 Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell

6、）貨號(hào)11662988 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell）貨號(hào)11662970 Elecsys 添加劑液（SysWash）貨號(hào)11930346 Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）貨號(hào)119331594：儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Cobas E 601/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀 儀器校準(zhǔn)：每批HCG+試劑有一條形碼標(biāo)簽，含有該批試劑定標(biāo)所需的特殊信息。應(yīng)用HCG+CalSet 定標(biāo)液定標(biāo)。 定標(biāo)頻率： 每天批試劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24 小時(shí)以內(nèi)）標(biāo)定一次， 如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求： Cobas E 601或E411： 一個(gè)月

7、（同一批號(hào)試劑） 7 天（放置儀器上的同一試劑盒） 各種分析儀均適用的情況： 根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。 質(zhì)控： Elecsys 通用質(zhì)控品（PreciControl Universal）1 和2 以及其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。5：操作步驟（Cobas E 601為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟：在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單Cal

8、ibration中進(jìn)行即可。3.2進(jìn)入CalibrationStatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWO POINT鍵）、跨距定標(biāo)（SPAN鍵）、多點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵），再選擇其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE，將定標(biāo)物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start，再點(diǎn)Start，儀器開(kāi)始定標(biāo)。 在CalibrationStatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選

9、擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)SAVE鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)REPEAT，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤(pán)內(nèi),按START鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START鍵，儀器自動(dòng)開(kāi)始推架檢測(cè)標(biāo)本。6：質(zhì)量控制 Elecsys 通用質(zhì)

10、控品（PreciControl ）1 和2 或其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24 小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7：計(jì)算方法 對(duì)每一個(gè)標(biāo)本，儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算HCG+含量，單位是mIU/ml 或IU/L 8：參考范圍 1112位非懷孕健康婦女，其97.5%百分位數(shù)為3mIU/ml 236位更年期后婦女6 mIU/ml 3277為男性，其97.5%百分位數(shù)為2 mIU/ml。9：分析性能 0.100-200.0mIU/ml 結(jié)果若低于檢測(cè)限，儀器將報(bào)告結(jié)果200.0mIU/ml10：干擾

11、因素該方法不受黃疸（膽紅素24mg/dl）、溶血（血紅蛋白1.0g/dl）、脂血（脂質(zhì)1400mg/dl）和生物素5mg/天）治療的病人，至少要等最后一次攝入生物素8 小時(shí)后才能采血。不受類風(fēng)濕因子干擾（3400U/ml）。15 種常用藥物經(jīng)試驗(yàn)對(duì)本測(cè)定無(wú)干擾。HCG+濃度高達(dá)300000mIU/ml 也不出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。接受過(guò)小鼠單抗治療或體內(nèi)診斷的病人會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。ElecsysHCG+檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合病史、臨床其他檢查結(jié)果綜合起來(lái)進(jìn)行診斷。11：稀釋：高于檢測(cè)范圍的標(biāo)本可用通用稀釋液稀釋。建議1:100 稀釋。稀釋后的標(biāo)本HCG+含量必須高于100mIU/ml 。如用手工稀釋，結(jié)果應(yīng)乘上稀釋倍數(shù)。如果是機(jī)器自動(dòng)稀釋，機(jī)器會(huì)自動(dòng)計(jì)算結(jié)果。12：臨床意義 與FSH 、TSH 和LH一樣，HCG 也是糖蛋白，由二種亞單位（-和-）組成.這四種激素中，鏈?zhǔn)峭耆嗤?，而鏈具特異性，?fù)責(zé)特定激素功能。 懷孕時(shí)HCG由卵巢產(chǎn)生。HCG由許多的亞激素組成，他們具有相同的生理活性，分子量不同。人類絨毛膜促性腺激素的生理功能是維持妊娠黃體及影響類固醇產(chǎn)生。懷孕婦女中的HGC主要是完整的HCG。檢測(cè)HCG 濃度可在受孕一周后診斷懷孕，在妊娠前三個(gè)月測(cè)定HCG 特別重