骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯課件

1、骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯1 畢業(yè)生：畢業(yè)生： 指導(dǎo)教師：指導(dǎo)教師： 20201212年長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)本科生畢業(yè)論文答辯年長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)本科生畢業(yè)論文答辯 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯2 研究背景及意義研究背景及意義 實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)部分 報(bào)告內(nèi)容報(bào)告內(nèi)容 CONTENTSCONTENTS 結(jié)果與討論結(jié)果與討論 結(jié)論結(jié)論 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯3 黃酮類化合物是一類分布很廣的多酚類天然黃酮類化合物是一類分布很廣的多酚類天然 產(chǎn)物，幾乎存在于所有的綠色植物中，具有多種產(chǎn)物，幾乎存在于所有的綠色植物中，具有多種 明顯的藥理活性明顯的

2、藥理活性。 目前對(duì)骨碎補(bǔ)總黃酮的研究主要在抗炎、抑目前對(duì)骨碎補(bǔ)總黃酮的研究主要在抗炎、抑 制疼痛等方面。同時(shí)制疼痛等方面。同時(shí)黃酮黃酮也也是一種很強(qiáng)的抗氧是一種很強(qiáng)的抗氧化化 劑，可有效清除體內(nèi)的劑，可有效清除體內(nèi)的超超氧氧陰離子陰離子自由基，這種自由基，這種 抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻抗氧化作用可以阻止細(xì)胞的退化、衰老，也可阻 止癌癥的發(fā)生。止癌癥的發(fā)生。 1.1.研究背景及意義研究背景及意義 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯4 黃酮的提取黃酮的提取工藝工藝 采用乙醇熱回流法采用乙醇熱回流法提取提取。 工藝流程：工藝流程： 骨碎補(bǔ)骨碎補(bǔ)粉碎粉碎過(guò)篩過(guò)篩（40

3、40目）目）石油醚脫石油醚脫 酯酯乙醇乙醇熱回流熱回流提提取取過(guò)濾過(guò)濾濾液濃縮濾液濃縮總黃酮總黃酮 提取液提取液 2.2.實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)部分 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯5 乙醇濃度對(duì)提取率的影響乙醇濃度對(duì)提取率的影響 提取溫度對(duì)提取率的影響提取溫度對(duì)提取率的影響 料液比對(duì)提取率的影響料液比對(duì)提取率的影響 提取時(shí)間對(duì)提取率的影響提取時(shí)間對(duì)提取率的影響 單單 因因 素素 實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 為了全面考查影響因素，設(shè)計(jì)了為了全面考查影響因素，設(shè)計(jì)了4 4因素因素3 3水平水平 的正交的正交試試驗(yàn)，試驗(yàn)因素水

4、平見驗(yàn)，試驗(yàn)因素水平見下下表表： 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯7 骨碎補(bǔ)總黃酮的抗氧化活性研究骨碎補(bǔ)總黃酮的抗氧化活性研究 采用鄰苯三酚自氧化法采用鄰苯三酚自氧化法 取取50 mmol/L Tris-HCI50 mmol/L Tris-HCI緩沖溶液緩沖溶液(pH=8.2)(pH=8.2)4.5 4.5 mLmL，與，與4.1 mL4.1 mL蒸餾水混勻后在蒸餾水混勻后在25 25 水浴中保溫水浴中保溫20 20 minmin，分別加入，分別加入0.1 mL0.1 mL的不同濃度的黃酮樣品液，的不同濃度的黃酮樣品液， 取出后立即加入在取出后立即加入在25 25 預(yù)熱過(guò)的預(yù)

5、熱過(guò)的3 mmol/L3 mmol/L鄰苯三鄰苯三 酚酚0.3 mL0.3 mL，迅速搖勻后倒人比色杯，迅速搖勻后倒人比色杯，420 nm420 nm下測(cè)下測(cè) 定吸光度定吸光度A Ai i。以蒸餾水為空白作為對(duì)照，測(cè)定吸光。以蒸餾水為空白作為對(duì)照，測(cè)定吸光 度度A A0 0。 。 清除率的計(jì)算：清除率的計(jì)算： 清除率（清除率（% %）=( A=( A0 0-A-Ai i)/A)/A0 0100%100% 式中：式中：A A0 0以蒸餾水為空白實(shí)驗(yàn)的吸光度；以蒸餾水為空白實(shí)驗(yàn)的吸光度； A Ai i為加入不同濃度黃酮粗提取液的吸光度。為加入不同濃度黃酮粗提取液的吸光度。 黃酮黃酮清除清除O O2

6、 2- -自由基能力的測(cè)定自由基能力的測(cè)定 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯8 黃酮清除黃酮清除OHOH能力的測(cè)定能力的測(cè)定 采用鄰菲羅啉法采用鄰菲羅啉法 在在6 6個(gè)個(gè)2525 mLmL容量瓶中一次加入容量瓶中一次加入9 9 mmol/Lmmol/L FeSOFeSO4 4， 9 9 mmol/Lmmol/L水楊酸各水楊酸各2 2 mLmL，不同濃度的黃酮粗提取溶，不同濃度的黃酮粗提取溶 液液1 1 mLmL，8.88.8 mmol/Lmmol/L H H2 2O O2 2啟動(dòng)反應(yīng)啟動(dòng)反應(yīng)1 1 h h，用蒸餾水，用蒸餾水 定容，靜置，于定容，靜置，于510510 nmnm

7、處測(cè)定吸光度處測(cè)定吸光度A Ai i。以蒸餾水以蒸餾水 為空白，測(cè)定吸光度為空白，測(cè)定吸光度A A0 0。 。 清除率（清除率（% %）=( A=( A0 0-A-Ai i)/ A)/ A0 0100%100% 其中：其中：A A0 0為空白實(shí)驗(yàn)的吸光度；為空白實(shí)驗(yàn)的吸光度； A Ai i為不同濃度反應(yīng)液的吸光度為不同濃度反應(yīng)液的吸光度。 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯9 乙醇濃度對(duì)提取率的影響乙醇濃度對(duì)提取率的影響 3.3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 405060708090 3.05 3.10 3.15 3.20 3.25 3.30 總 黃酮含量 (%) 乙醇濃 度

8、(%) 圖1 乙醇濃度與總黃酮含量的關(guān)系曲線 由圖由圖1 1得知得知: :隨著乙醇濃度的增加，黃酮的得率升高。當(dāng)濃度隨著乙醇濃度的增加，黃酮的得率升高。當(dāng)濃度 大于大于6060時(shí)，得率的有所降低。故時(shí)，得率的有所降低。故最佳乙醇濃度最佳乙醇濃度為為6060。 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯10 提取溫度對(duì)提取率的影響提取溫度對(duì)提取率的影響 由圖由圖2 2可知：可知：4 400到到6060總黃酮含量有較大的增長(zhǎng)總黃酮含量有較大的增長(zhǎng), , 但但6060到到 9090黃酮含量減小。而黃酮含量減小。而6060時(shí)總黃酮含量最大。故最佳提取時(shí)總黃酮含量最大。故最佳提取溫度溫度 為為6

9、060。 405060708090 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 總 黃酮含量 (%) 提取溫度 () 圖2 提取溫度與總黃酮含量的關(guān)系曲線 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯11 料液比對(duì)提取率的影響料液比對(duì)提取率的影響 由圖由圖3 3可知可知：隨著料液比的提高，黃酮得率上升，但超過(guò)：隨著料液比的提高，黃酮得率上升，但超過(guò)1:30 后上升趨勢(shì)不明顯，料液比后上升趨勢(shì)不明顯，料液比為為1:30最好最好。 1:201:301:401:501:601:70 3.16 3.18 3.20 3.22 3.24 3.26 總 黃酮含量 (%) 料液比 (mL/g) 圖圖3 料液

10、比與總黃酮含料液比與總黃酮含量量的關(guān)系曲線的關(guān)系曲線 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯12 提取時(shí)間對(duì)提取率的影響提取時(shí)間對(duì)提取率的影響 由由圖圖4可知：黃酮含量隨著提取時(shí)間的增加而增大，可知：黃酮含量隨著提取時(shí)間的增加而增大，當(dāng)當(dāng)超過(guò)超過(guò) 3 h時(shí)，總黃酮含量反而降低。故選用時(shí)，總黃酮含量反而降低。故選用3 h為宜。為宜。 1.01.52.02.53.03.5 2.5 2.6 2.7 2.8 2.9 3.0 3.1 3.2 3.3 總 黃酮含量 (%) 提取時(shí) 間 (h) 圖圖4 提取時(shí)間與總黃酮含量的關(guān)系曲線提取時(shí)間與總黃酮含量的關(guān)系曲線 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗

11、氧化活性研究的答辯13 正交正交試試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)結(jié)果 比較比較左左表中表中4 4因素因素 的的R R值的大小，可以看出值的大小，可以看出A A 因素，即因素，即乙醇濃度乙醇濃度為最重為最重 要因素要因素。四因素對(duì)黃酮提四因素對(duì)黃酮提 取量影響的主次順序?yàn)橐胰×坑绊懙闹鞔雾樞驗(yàn)橐?醇濃度醇濃度 浸提時(shí)間浸提時(shí)間 浸提溫浸提溫 度度 料液比，并且最料液比，并且最佳佳的提的提 取取工藝工藝條件為條件為：乙醇濃度乙醇濃度 60%、料液比、料液比1:30、提、提取取 時(shí)間時(shí)間3 h、提、提取取溫度溫度60 ， 即即A A1 1B B2 2C C3 3D D2 2。 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研

12、究的答辯14 黃酮清除黃酮清除O2-自由基能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果自由基能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 0.00.20.40.60.81.0 14 16 18 20 22 24 26 28 清除率 (%) 提取濃 度 (mg/mL) 圖5 提取濃度與清除率的關(guān)系曲線 由圖由圖5 5可知：可知：在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，骨碎補(bǔ)中黃酮類化合物對(duì)清在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，骨碎補(bǔ)中黃酮類化合物對(duì)清 除除O O 2 2 自由基自由基的的效果隨黃酮濃度的增加而加強(qiáng)。效果隨黃酮濃度的增加而加強(qiáng)。 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯15 黃酮清除黃酮清除OH自自由基能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果由基能力的實(shí)驗(yàn)結(jié)果 0.00.20.40.60.81.

13、0 6 8 10 12 14 16 18 20 清除率 (%) 提取濃 度 (mg/mL) 圖圖6 6 提取濃度與清除率的關(guān)系曲線提取濃度與清除率的關(guān)系曲線 由圖由圖6 6可知：可知：在在一定的一定的濃度范圍內(nèi)，骨碎補(bǔ)中黃酮類化合物對(duì)濃度范圍內(nèi)，骨碎補(bǔ)中黃酮類化合物對(duì) 清除清除OHOH自由基自由基的的效果隨黃酮濃度的增加而加強(qiáng)。效果隨黃酮濃度的增加而加強(qiáng)。 骨碎補(bǔ)中總黃酮的提取含量測(cè)定及抗氧化活性研究的答辯16 4 4. .結(jié)論結(jié)論 （1 1）采用乙醇熱回流提取法，從骨碎補(bǔ)中提取總黃采用乙醇熱回流提取法，從骨碎補(bǔ)中提取總黃 酮酮。 （2 2）在單因素）在單因素實(shí)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研 究得到究得到骨碎補(bǔ)中總黃酮提取的最佳工藝條件：骨碎補(bǔ)中總黃酮提取的最佳工藝條件：乙乙 醇濃度醇濃度60%60%、料液比、料液比1 1: :3030、提、提取取時(shí)間時(shí)間3 3 h h、提、提取取溫溫 度度6060。在此條件下，在此條件下，用紫外分光光度法測(cè)得總用紫外分光光度法測(cè)得總 黃酮的含量為黃酮的含量為3.3.5 51%1%。 （