甘油的檢測方法匯總

1、甘油的檢測方法匯總在發(fā)酵行業(yè)中，甘油作為底物，是發(fā)酵液中生物合成的直接前體，會影響外源蛋白的啟 動表達效率，其含量的高低直接影響產(chǎn)物的發(fā)酵單位，是決定菌種取舍的重要指標(biāo)，是提高 工程菌的發(fā)酵密度，提高產(chǎn)品生產(chǎn)率的關(guān)鍵。在生物柴油生產(chǎn)中，它是副產(chǎn)物，其含量直接 影響生物柴油的使用性能，是衡量生物柴油產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。此外，甘油能與水結(jié) 合以防止紅細(xì)胞的冷凍損傷，能延長紅細(xì)胞的保存期，被普遍用作細(xì)胞內(nèi)冷凍保護劑等。山 于甘油用途很廣，因此其含量的測定具有非常重要的意義。目前國內(nèi)外甘油含量的測定方法較多，主要有高碘酸氧化法、Cu2+絡(luò)合比色法、酶比色 法法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法

2、、氣相色譜法、近紅外光譜法以及原子吸收法 等。下面將對其進行簡要概述：、高碘酸法1. 原理：高碘酸氧化法是口就常見用于tr油含量檢測的方法，利用高碘酸與甘油發(fā)生氧化還 原反應(yīng)，剩余高碘酸及反應(yīng)生成的碘酸與碘化鉀反應(yīng)生成碘，再用硫代硫酸鈉進行滴定，根 據(jù)消耗的硫代硫酸鈉的量來計算甘油的含量。2. 操作步驟準(zhǔn)確發(fā)酵液10ml于lOOmL小燒杯中，加少量水溶解，然后轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水稀釋 至標(biāo)線，搖勻，靜置。用移液管準(zhǔn)確移取lOmL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸鈉溶 液，混合均勻后，于黑暗中避光靜置40min,然后加入碘化鉀溶液和20%鹽酸溶液各15mL, 調(diào)節(jié)pH值在0.81.

3、0之間，然后用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，近終點時，加入2mL淀粉指 示劑溶液，繼續(xù)滴定至溶液藍(lán)色消失。同時做試樣空白。3.計算:（Z）xCxJoo10/50x4x1000式中：w樣品中甘油的含量，；VI空白試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2試樣消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL：C硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/L； M甘油相對分子質(zhì)量;一、酶比色法1. 原理：它是利用酶的特異性催化反應(yīng)建立的測定甘油的一種酶學(xué)方法，是指甘油在甘油激 酶作用下轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油，后者山磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二輕丙酮和過氧化氫，然 后過氧化氫和4-氨基安普比林、4-氯酚在過氧化物酶催化下反應(yīng)生成紫蘭

4、色、能在500 run 左右有特征吸收峰的覘亞胺，通過顏色深淺即吸光度的變化測定所生成的H：O：,甘油的含量 與生成的乩0成正比，這樣用比色法就可以測定甘油的含量。2. 操作步驟波長：oOOnm （480520nm） 反映溫度：37C 比色杯光徑：lcm取一定量R1 （參看R2瓶簽）加入1瓶R2中，溶解后即為工作液，工作液預(yù)先保溫至測試溫 度?？瞻坠苄?zhǔn)管樣品管工作液1ml1ml1ml蒸館水0.0100標(biāo)準(zhǔn)品0.01樣品000.01分別混合均勻，在反應(yīng)溫度保溫10分鐘，以試劑空白管校零，記錄校準(zhǔn)及樣品0D值。3. 計算：甘油濃度二A和/A側(cè)X校準(zhǔn)濃度（mmol/L或mg/dl）二、高效液相色譜

5、法1. 原理：高效液相色譜法（HPLC）的原理是以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不 同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，利用 色譜柱對待測混合物先進行分離，然后再進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析，因而其測量的 準(zhǔn)確性和精確度較高，目前已成為檢測生化分子較常用的一種方法。2. 操作步驟（1）首先用水將發(fā)酵液稀釋2. 5倍,然后加時0調(diào)pH至5. 5,在轉(zhuǎn)速8000r/min溫度4C 下離心lOmin,經(jīng)微孔濾膜過濾用于HPLC分析；（1）將甘油標(biāo)準(zhǔn)系列溶液在最佳色譜條件下進行HPLC分析，以峰面積外標(biāo)法定量得到甘油標(biāo) 準(zhǔn)曲線；（2）按照樣品預(yù)處理方法

6、處理后進樣5微升，記錄峰面積，代入線性方程中，計算其測定值。 將計算值乘以稀釋倍數(shù)后，即得發(fā)酵液中甘油的含量。一、氣相色譜法1. 原理：氣相色譜分析法是用于分離分析復(fù)雜樣品中的化合物的一種方法，其原理是一定量 的氣體或液體分析物被注入到柱一端的進樣口中，在載氣帶動下通過色譜柱，分析物的分子 會受到柱壁或柱中填料的吸附。由于不同的樣品具有不同的物理和化學(xué)性質(zhì)，與特定的固定 相有著不同的相互作用，使得每一種類型的分子都有自己的通過速率，因此，分析物中的各 種不同組分就會在不同的時間到達柱的末端，從而得到分離。當(dāng)化合物從柱的末端流出時， 它們被檢測器檢測到，產(chǎn)生相應(yīng)的信號，并被轉(zhuǎn)化為電信號輸出，從而

7、確定每一個組分到達 色譜柱末端的時間順序以及每一個組分的含量。2. 操作步驟（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 在7個25mL容量瓶中分別準(zhǔn)確稱入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、 0.5g甘油（精確至0. lmg）,再分別移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合溶劑定容并搖勻，作為標(biāo) 準(zhǔn)工作溶液。其中甘油質(zhì)量濃度分別為0、2、4、8、12、20g/L,內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度均為8g/L。（2）樣品的制備 在25mL容量瓶中加入5ml的發(fā)酵液樣品，移入2mL內(nèi)標(biāo)貯備液，用混合 溶劑定容至刻度并搖勻。（3）GC條件色譜柱：HP-5石英毛細(xì)管柱，30m （柱長）X0. 32mm （內(nèi)徑）X0.25ym （膜厚）。柱溫：初

8、 始溫度120C,保留omin,以20 C/min升至290C,保留lOmin。進樣口溫度：280C,進樣 量：0. 2uL,分流比：100： lo檢測器（FID）溫度：300C,氫氣流速：40mL/min,空氣流 速：300mL./mino載氣：氮氣，流速：lmL/min,恒流模式（4）進樣，計算二、酶電極法1、檢測原理利用生物酶只能催化一種或一類底物的性質(zhì)，將甘油氧化酶進行固定化處理，樣本中的片油 在片油酶膜的作用下被催化生成過氧化氫，根據(jù)電化學(xué)的原理，過氧化氫的濃度與電壓值正 相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)液、緩沖液的電壓值響應(yīng)值來確定樣本中甘油濃度。電壓值與濃度的相關(guān)性分析Y= 523.51繪圉31ii電壓值線性（電壓值）0.511.5甘油濃度L2200000000000002 0 8 6