-薄層色譜總結(jié)

1、-薄層色譜總結(jié)薄層色譜方法總結(jié)1. 方法原理（1）流動相利用毛細(xì)管力帶著樣品穿過固定相。（2）樣品與固定相的相互作用是指組份在移行 過程中由于偶極-（誘導(dǎo)）-偶極相互作用， 氫鍵和范德華力的作用而產(chǎn)生不同程度的延緩、 吸附、分散、離子交換和絡(luò)合等分離機(jī)理。2. 溶劑使用的溶劑必須是“分析純或“色譜純”， 溶劑組成采用體積量比（如正丁醇 -冰乙酸- 水=4:1:1 , V/V/V ），或者絕對量（如18ml甲 苯+ 2 ml甲醇）。其總量應(yīng)足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度約為5mm。展開劑要求新鮮配制， 不要多次反復(fù)使用，如需分層，則按要求放置分 層后取需要的一相（上層或下層），備用。一、

2、溶劑選擇規(guī)則：1、考慮分離成分的極性、溶解度、吸附度。2、先加入極性較小的溶劑，若不容再加入少 量極性大的溶劑3、一般根據(jù)相似相溶原則，需要注意，極性 相差大的不混溶。4、混合溶劑通常使用一個高極性和低級性溶劑組成的混合溶劑5、展開劑的比例要靠嘗試一般根據(jù)文獻(xiàn)中 報道的該類化合物用什么樣的展開劑，就首 先嘗試使用該類展開劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個分離效果好的展開劑。6、一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極 性的體積比為1/3的混合溶劑，如果有分開的 跡象，再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑）， 達(dá)到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點 較 拖”，最好是換溶劑。二、展開劑的選擇條件： 對的所

3、需成分有良好的溶解性； 可使成分間分開； 待測組分的Rf在0.20.8之間，定量測定在0.30.5之間； 不與待測組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)； 沸點適中，黏度較??； 展開后組分斑點圓且集中； 混合溶劑最好用新鮮配制。三、溶劑極性參數(shù)表環(huán)已烷:-0.2、石油醚（I類，3060C）、石 油醚（U類,6090C）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、 二甲苯25、苯27、二氯甲烷31、異丙醇39、 正丁醇:3.9、四氫呋喃40、氯仿41、乙醇43、 乙酸乙酯44、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、 乙酸:6.0、水:10.21、一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由 正己烷和水組成，再根據(jù)需要加入甲醇

4、、乙醇, 乙酸乙酯來調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的 分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類等的分 離；2、中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相 組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適 合于蔥醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂 素和萜類的分離；3、強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲 醇、乙醇，乙酸乙酯等來調(diào)節(jié)，適合于極性很 大的生物堿類化合物的分離。四、展開劑的選擇物質(zhì)分子化學(xué)結(jié)構(gòu)中，通常由較極性部 分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷 為極性小部分，隨著極性基團(tuán)部分的增加， 總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。以下分開討論不同化合物極性情況及其對應(yīng)的展開劑。1、類極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)冰片：

5、石油醚(3060 C)醋酸乙酯(17:3)、 厚樸酚：苯一醋酸乙酯(9:1.5)、a-香附酮：苯醋酯乙酯冰醋酸(92:5:5)、 丹皮酚：環(huán)己烷一醋酸乙酯(3:1),結(jié)論：以石油醚、正構(gòu)烷和苯為體積百分?jǐn)?shù)比 較大的溶劑，通常起溶解和分離化合物的作用， 而用醋酸乙酯為調(diào)節(jié)Rf (比移值)的溶劑。為了 減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響，適當(dāng)加入添加劑，如有機(jī)酸或者有機(jī)堿。2、類極性較小的不揮發(fā)性物質(zhì)3-谷甾醇：環(huán)己烷一醋酸乙酯一甲醇(625:1) 或者環(huán)己烷一丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯一醋酸乙酯一冰醋酸(12:4:0.5)、齊墩果酸：氯仿一甲醇(40:1)、豬去氧膽酸：氯仿乙醚一冰醋酸(2

6、:2:1)、 大黃素：苯一醋酸乙酯一甲醇(15:2:0.2)或者 苯一乙醇(8:1)、丹參酮口 A :苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心蓮內(nèi)酯：氯仿-無水乙醇（9:1） 靛玉紅、靛藍(lán)氯仿乙醇（9:1）或者苯氯仿 丙酮（5:4:1）結(jié)論：這類物質(zhì)展開劑極性比極性較小的揮發(fā) 性物質(zhì)洗脫力強(qiáng)一些，因為這類物質(zhì)極性小的 母核大，而極性大的基團(tuán)通?？梢孕纬蓺滏I， 比如羧酸、羥基。以上物質(zhì)，母核分子量減小、 母核結(jié)構(gòu)中不飽和健的增加（尤其是出現(xiàn)苯 環(huán)），極性基團(tuán)的增加，都使極性增加，展開 劑極性也增大。這個范圍內(nèi)的物質(zhì)很多，一 般展開劑大百分?jǐn)?shù)的溶劑可以從環(huán)己烷一甲 苯一二甲苯一苯一氯仿的順序，按

7、照極 性要求選擇。這里注意，異丙醇、正丁醇極性 指數(shù)也比較小，在這范圍的化合物很少用，因 為粘性大、展開慢，造成斑點擴(kuò)散；另外，羥 基的氫鍵作用力也有不利。調(diào)節(jié) Rf值的溶劑， 從醋酸乙酯一甲醇一丙酮一乙醇。揮發(fā) 性物質(zhì)也有很多帶羰基、羥基的，但從它的揮 發(fā)性就可以明白，分子間作用力不強(qiáng)，另外， 母核與石油醚、正構(gòu)烷和苯的結(jié)構(gòu)差異小，估 計更容易脫離硅膠吸附，更快進(jìn)入溶劑中，而 不需要通過提高展開劑的極性。由于存在糖的多羥基結(jié)構(gòu)，苷元的結(jié)構(gòu)影 響變小。展開劑中使用極性大的有機(jī)溶劑(氯 仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇)和水。乙酸 和甲酸的使用，一方面增大展開劑極性，另 外也可以抑制硅膠羥基的作用，減

8、少拖尾。 由于混溶性和硅膠耐酸能力的限制，水和酸 的使用是有限度的。3、類極性大的小分子有機(jī)酸：沒食子酸：氯仿一醋酸乙酯一甲酸 (5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸、 異綠原酸。例如下面以苯丙烷為極性小部分， 隨著極性基團(tuán)部分的增加，總體的極性就增 力口，展開劑極性也增加了。依次為肉桂酸、 阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸。相應(yīng)展 開劑分別為：正己烷一乙醚一冰醋酸 (5:5:0.1)、苯一冰醋酸一甲醇(30:1:3)、氯 仿一甲醇一甲酸(9:1: 0.5 )、石油醚一乙 酸乙酯一甲酸(3:6: 1 )、醋酸丁酯一甲酸 -水 (7:2.5:2.5)。結(jié)論：這類物質(zhì)多數(shù)是苯乙烯母核的，這個

9、結(jié) 構(gòu)的極性本身比較大，另外有酚羥基和羧酸 基團(tuán)，個別有多羥基配基。皂苷的展開劑差 不多，極性大。注意甲酸通常指的是濃度 85% 左右的，含有水。4、類含氮有機(jī)物：鹽酸小檗堿：苯-醋酸乙酯一甲醇-異丙醇濃氨試液（12 :6 : 3 : 3 :0.6）（氨 蒸氣飽和）或正丁醇-冰醋酸-水 （7:1:2）、麻黃堿：氯仿一甲醇濃氨試液（20:5:0.5） 或正丁醇一冰醋酸一水（8:2:1）甘草酸銨:醋酸乙酯一甲酸一冰醋酸一水 （15:1:1:2）。結(jié)論分析：由于NH2硅醇基的作用很強(qiáng)，在強(qiáng) 極性展開劑加有機(jī)酸、有機(jī)堿掃尾。對于極性 化合物，使用正丁醇對斑點擴(kuò)散影響較小，因 為化合物和硅膠的作用強(qiáng)。當(dāng)

10、被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性 溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則 須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物 質(zhì)用吸附性較弱的吸附劑（如以硅藻土或滑石粉代替硅膠），則洗脫劑的極性亦須相應(yīng)降低。3. TLC的通用顯色方法理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩(wěn)定、斑 點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的 深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全 已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要， 通用顯色方法主要有：1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；2、碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈 敏度高于該兩法單獨使用；3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外 下無熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯；4、

11、硫酸溶劑：對絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但 有破壞性。4. 薄層層析和紙色譜操作注意事項1、點樣 點樣器點樣于薄層板上，一般為圓點， 點樣基線距底邊1.01.5cm，樣點直徑一般不 大于2mm,點間距離可視斑點擴(kuò)散情況以不影 響檢出為宜。若因樣品溶液太稀，可重復(fù)點樣， 但應(yīng)待前次點樣的溶劑揮發(fā)后方可重新點樣， 以防樣點過大，造成拖尾、擴(kuò)散等現(xiàn)象，而影 響分離效果。點樣時必須注意勿損傷薄層表面2、展開 將點好樣品的薄層板放入展開缸的展 開劑中，浸入展開劑的深度為距原點 5mm為 宜，密封，待展開至規(guī)定距離（一般為 8 15cm ）,取出薄層板，晾干，待檢測。注：展開缸如需預(yù)先用展開劑預(yù)平衡，可在缸 中加

12、入適量的展開劑，密閉，一般保持15- 30 分鐘。3、顯色與檢視供試品含有可見光下有顏色的 成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸 漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日 光下檢視。有熒光的物質(zhì)或遇某些試劑可激發(fā) 熒光的物質(zhì)可在356nm紫外光燈下觀察熒光 色譜。對于可見光下無色，但在紫外光下有吸 收的成分可用帶有熒光劑的硅膠板 （如GF254 板），在254nm紫外光燈下觀察熒光板面上的 熒光猝滅物質(zhì)形成的色譜。把我的祖?zhèn)髅胤礁嬖V你吧PE（60-90）EtAc/PE=1:2EtAc/PE/AcOH=15:5:1EtAc/AcOH/n-Buta nol/H2O=2:1:1:18年來我用這四

13、種體系，沒有出現(xiàn)過什么問題. 我一直在用的是乙酸乙酯：環(huán)已烷，不斷調(diào)節(jié) 比例，直到有滿意的Rf值，有拖尾時可能要加 酸或堿，我一般乙酸和三乙胺。我用了好幾年了，都還好。不妨一試！ 鋪板鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易 出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后， 板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠 G:水=1: 23,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研 磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有 關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判 斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平 滑外，也影響板涂層的厚度，進(jìn)一步影響上樣 量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那 么明顯。通常，板的質(zhì)量對

14、薄層鑒別的影響不 是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系 統(tǒng)的飽和。點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好 只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小， 展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液 的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣 斑點擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙 醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板 用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。 展開劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗， 強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層, 取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把 各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展 開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會造 成層析的完全失

15、敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度 對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達(dá)到實 驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑, 應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，移液管應(yīng)符合計量 認(rèn)證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的。展開 系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽 用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把 待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上 展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸， 并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效 應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要 打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層 板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動作應(yīng)該 盡量輕、快。溫濕度的控制溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，

16、 通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫 下分離，例如人參皂昔。濕度的影響，估計主 要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性（容 量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。 溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過 在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。顯色噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器。solve ntpola rityViscosity( cp20C)Boili ng poi nt(C)UV cutoff (nm)i-pe ntane(戊烷)0.00-30-n-pe ntane0.000.2336210Petroleum ether（石油醚）0.010.3030-60210Hexa ne（己烷）0

17、.060.3369210Cyclohexane（環(huán) 己烷）0.101.0081210lsooctane（異 辛 烷）0.100.5399210Trifluoroacetic acid（三氟乙酸）0.10-72-Trimethylpe nta ne（三甲基戊烷）0.100.4799215Cyclope ntane（環(huán)戊烷）0.200.4749210n-hepta ne（庚烷）0.200.4198200Butyl chloride（ 丁基 氯；丁酰氯）1.000.4678220Trichloroethyle ne（三氯乙烯; 乙炔化三氯）1.000.5787273Carbon tetrachlor

18、ide（四1.600.9777265氯化碳）Trichlorotrifluo roetha ne（三氯1.900.7148231三氟代乙烷）i-propyl ether（丙基醚；丙醚）2.400.3768220Tolue ne（甲苯）2.400.59111285p-xyle ne（對二甲 苯）2.500.65138290Chlorobe nzene（氯苯）2.700.80132-o-dichlorobe nze ne（領(lǐng)二氯苯）2.701.33180295Ethyl ether（二 乙醚;醚）2.900.2335220Benzene（苯）3.000.6580280Isobutyl alcoho

19、l（異丁醇）3.004.70108220Methyle ne chloride（二氯甲 烷）3.400.4440245Ethyle ne dichloride（二氯 化乙烯）3.500.7984228n-butanol（ 丁醇）3.902.95117210n-butyl acetate（醋酸丁 酯；乙酸丁酯）4.00126254n-propanol（丙 醇）4.002.2798210Methyl isobutyl ket on e（）4.20-119330Tetrahydrofuran（四氫呋喃）4.200.5566220etha nol4.301.2079210Ethyl acetate4.

20、300.4577260i-propanol（丙 醇）4.302.3782210Chloroform（氯 仿）4.400.5761245Methyl ethyl keto ne（甲基乙 基酮）4.500.4380330Dioxane（ 一 惡 烷；二氧六環(huán);二氧雜環(huán)己烷）4.801.54102220Pyridine（吡啶）5.300.97115305Aceto ne（丙酮）5.400.3257330Nitrometha ne（ 硝基甲烷）6.000.67101380Acetic acid（乙 酸）6.201.28118230Acet on itrile（乙腈）6.200.3782210Anili

21、ne（苯胺）6.304.40184-Dimethyl formamide（二甲 基甲酰胺）6.400.92153270Metha nol（）6.600.6065210Ethyle ne glycol（乙二醇）6.9019.90197210Dimethyl sulfoxide（）7.202.24189268water10.201.00100268常用溶劑參數(shù)表吸匕合物名稱名稱中收中極性粘度沸點收波30i-pe ntane戊烷）n-pe ntane戊烷)正 00.23 36Petroleum ether油醚）石 0.01300.360Hexane己 0.06 0.33 69Cyclohexa ne

22、(環(huán)己烷）Isoocta ne(異辛烷）Trifluoroacetic acid(二氟乙酸）Trimethylpe ntane(二甲基戊烷）Cyclope ntane(環(huán)戊烷）n-hepta ne(庚0.1 1.0 810.1 0.530.1 -0.1 0.470.2 0.47997299490.2 0.4198210210210210210215210200Butyl chloride （基氯；丁酰氯）丁 1.0 0.46 782201.0 0.57 87273Carbon tetrachloride (氯化碳)四 1.6 0.9777265Trichlorotrifluoroetha ne

23、(氯三氟代乙烷)1.9 0.7148231i-propyl ether基醚；丙醚)丙 2.4 0.3768220Tolue ne甲 2.4 0.59111285Trichloroethyle ne（氯乙烯；乙炔化三氯）對 2.5 0.65138 290p-xyle ne二甲苯）Chlorobe nzene氯 2.7 0.8 132 -o-dichlorobe nzene二氯苯）鄰 2.7 1.33 180 295Ethyl ether二 2.9 0.23 35220乙醚；醚）Benzene3.0 0.65 80280（苯）Isobutyl alcohol （ 丁醇）Methyle ne chloride（氯甲烷）Ethyle ne dichloride （ 氯化乙烯）n-buta nol（丁醇）n-butyl acetate （ 酸丁酯；乙酸丁酯）n-propa nol（醇）化合物名稱 文名稱j異3.0 4.7 108 2203.4 0.44 240 245二 3.5 0.7884228正3.7 2.95117 210醋4.0 -126 254丙4.0 2.2798210吸中收極性粘度沸點波Methyl isobutyl keto ne (基異丁酮)甲4.2 -119 330Tetrahydrofura n(四氫呋喃）