HPLC法測(cè)定皮膚丸中鹽酸小檗堿的含量的論文

1、HPLC法測(cè)定皮膚丸中鹽酸小檗堿的含量的論文 作者：羅亦芬，程艷陽(yáng)，謝友蓮，黃爔樂，陳欣瑜 【摘要】 目的 建立皮膚丸中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法。方法 采用hplc法，色譜柱為welch malerials xbc18柱，乙腈0.02 moll-1磷酸溶液(體積比2575)為流動(dòng)相，流速為1.0 mlmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為424 nm，柱溫為35 。結(jié)果 鹽酸小檗堿的質(zhì)量濃度在3.81438.14 gml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好;平均回收率為99.1%，rsd為0.8%(n=9);最低檢測(cè)限為0.942 7 ng。結(jié)論 本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，能有效地控制該制劑的質(zhì)量。 【關(guān)鍵詞】 皮

2、膚丸;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法abstract:objective to establish an hplc method for determining the content of berberine hydrochloride in pifu pills. methods a welch materials xbc18 column was used to analyze the sample by using acetonitrile0.02 mol/l phosphoric acid solution(2575)as mobile phase. the flow rate was

3、1.0 ml/min and detection wavelength was 424 nm. results the standard curve for berberine hydrochloride was linear in the concentration range of 3.81438.14 g/ml. the average recovery was 99.1% with rsd 0.8% (n=9). conclusion this method was simple,accurate and reliable for the quality control of pifu

4、 pills.key words:pifu pills; berberine hydrochloride;hplc皮膚丸由關(guān)黃柏、蛇床子、防風(fēng)等組成，具有養(yǎng)血祛風(fēng)、燥濕止癢的功效。WwW為了更好控制該制劑的質(zhì)量，通過查閱處方中各藥材植化分析有關(guān)資料，選擇對(duì)處方中主要藥材關(guān)黃柏1中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法進(jìn)行研究。在參照 文獻(xiàn) 1,2的基礎(chǔ)上，建立了本品中鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法。該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，能有效地控制該制劑的質(zhì)量。 1 儀器與試藥 agilent 1100型(vwd)高效液相色譜儀(美國(guó));色譜柱為welch malerials xbc18;hn1006超聲清洗儀(廣州市華南超聲

5、設(shè)備有限公司);鹽酸小檗堿對(duì)照品( 中國(guó) 藥品生物制品檢定所，批號(hào)110713200609);皮膚丸(自制，批號(hào)lb0024、lb0038、mb0016);鹽酸、甲醇為分析純;磷酸、乙腈為色譜純;水為超純水。 2 方法與結(jié)果 2.1 對(duì)照品溶液的制備取105 干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定， 加1% (體積比) 鹽酸甲醇溶液制成每1 ml含8 g的溶液，即得。2.2 供試品溶液的制備取本品粉末(過三號(hào)篩) 約1 g， 精密稱定， 置50 ml容量瓶中，加1%(體積比)鹽酸甲醇溶液約40 ml，超聲處理(功率300 w，頻率25 khz)30 min，放冷，加1%(體積比)鹽酸甲醇溶

6、液稀釋至刻度，搖勻，靜置，取上淸液，用0.45 m微孔濾膜，濾過，取續(xù)濾液，即得。2.3 陰性對(duì)照溶液的制備依照處方中的比例，按制法制備缺關(guān)黃柏的陰性對(duì)照樣品，按供試品溶液的制備方法制備，即得。2.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以welch malerials xbc18為色譜柱;以乙腈0.02 mol/l磷酸溶液(體積比2575)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為424 nm。分別精密吸取缺關(guān)黃柏陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明：陰性對(duì)照不干擾，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿 計(jì)算 為10 412，相鄰兩峰的分離度為2.26，拖尾因子為0.89。2.5

7、 線性關(guān)系考察取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，用1%(體積比)鹽酸甲醇溶液制成每1 ml中分別含含3.814、7.628、19.07、30.51、38.14 g的溶液，分別精密吸取10 l，注入液相色譜儀，按“2.4”項(xiàng)下的方法測(cè)定，以質(zhì)量濃度()為橫坐標(biāo)，峰面積(a)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：a=8.73613-0.0511939，r=0.999 9(n=5)結(jié)果表明鹽酸小檗堿的質(zhì)量濃度在3.81438.14 gml-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。2.6 精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液(38.14 gml-1)，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果鹽酸小檗堿平均峰面積為332.447 75，rsd為0

8、.16%(n=6)。 2.7 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品(批號(hào)lb0024)6份，按“2.2” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，按“2.4”項(xiàng)下的方法測(cè)定，結(jié)果鹽酸小檗堿的平均含量為0.446 7 mgg-1，rsd為1.7%(n=6)。2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份供試品(批號(hào)lb0024)溶液，分別于0、2、4、7、24 h按“2.4”項(xiàng)下方法，測(cè)定峰面積，結(jié)果其rsd為1.2%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。2.9 加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品(lb0038)粉末1 g，精密稱定，共9份，分別置50 ml容量瓶中，分別精密加入鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測(cè)定

9、，結(jié)果見表1。表1 鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果2.10 樣品測(cè)定取皮膚丸3批，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定， 計(jì)算 。結(jié)果3個(gè)批號(hào)的樣品中鹽酸小檗堿含量分別為0.446 7、0.501 7、0.569 9 mgg-1。 3 討 論 3.1 波長(zhǎng)選擇取對(duì)照品溶液(38.14 gml-1)于200500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸小檗堿在230、266、347、424 nm處有最大吸收。分別選擇266、347、424 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行試驗(yàn)，以266、347 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)靈敏度較高，但空白溶液有干擾;以424 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)可有效消除干擾

10、，檢測(cè)靈敏度也達(dá)到檢測(cè)要求，故選擇424 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。3.2 流動(dòng)相的選擇分別對(duì)乙腈0.02 moll-1磷酸(體積比2575)、乙腈0.05 moll-1磷酸氫二鉀(體積比2872)、乙腈0.1%磷酸(體積比5050)(每100 ml中加十二烷基磺酸鈉0.1 g)3種流動(dòng)相進(jìn)行考察，結(jié)果以第1種流動(dòng)相分離效果最佳。3.3 提取溶劑的選擇分別對(duì)水、10%(體積比)鹽酸溶液、0.02 moll-1磷酸溶液、1%(體積比)鹽酸60%甲醇溶液、1%(體積比)鹽酸甲醇溶液作為提取溶劑進(jìn)行了考察，結(jié)果表明1%(體積比)鹽酸甲醇溶液提取效果最好。3.4 提取方式的選擇用1%(體積比)鹽酸甲醇溶液作為提取溶劑，分別對(duì)索氏、回流、超聲提取方法進(jìn)行了考察，結(jié)果以超聲的提取方式效果最佳，提取完全，且操作簡(jiǎn)便。3.5 提取時(shí)間的選擇分別對(duì)超聲15、30、45、60 min的提取效果進(jìn)行考察，結(jié)果以超聲30 min效果最佳。3.6 進(jìn)樣量的選擇鹽酸小檗堿在424 nm的波長(zhǎng)處響應(yīng)較小，試驗(yàn)中嘗試增加進(jìn)樣體積以加大鹽酸小檗堿的峰面積，但隨著進(jìn)樣體積的增